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pIRES2-EGFP-IL-1ra-Fcε真核表达载体的构建及鉴定
被引量:
4
1
作者
刘中成
王园园
+2 位作者
邹民吉
王嘉玺
徐东刚
《分子细胞生物学报》
CSCD
北大核心
2008年第4期309-316,共8页
采用RT-PCR方法从哮喘大鼠脾细胞中克隆IgE恒定区cDNA,同时从载体pBV220-IL-1ra中克隆IL-1ra基因,利用重叠延伸PCR技术构建IL-1ra-Fcε融合基因。将其克隆入真核表达载体pIRES2-EGFP,以脂质体法转染293T细胞,同时采用气管滴注方式滴注...
采用RT-PCR方法从哮喘大鼠脾细胞中克隆IgE恒定区cDNA,同时从载体pBV220-IL-1ra中克隆IL-1ra基因,利用重叠延伸PCR技术构建IL-1ra-Fcε融合基因。将其克隆入真核表达载体pIRES2-EGFP,以脂质体法转染293T细胞,同时采用气管滴注方式滴注大鼠肺部。经Western blot、RT-PCR及荧光显微镜观察此融合基因在293T细胞及大鼠肺组织中实现了表达,为过敏性哮喘基因治疗奠定了基础。
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关键词
il-
1
ra-fc
ε融合基因
转染
真核表达
鉴定
下载PDF
职称材料
IL-1ra-Fcε融合基因在大鼠体内表达条件优化及免疫原性分析
被引量:
1
2
作者
刘中成
张艳芬
《中国药理学通报》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第5期638-642,共5页
目的探索基因治疗载体pCI-neo-IL-1ra-Fcε在大鼠体内的最适表达条件及免疫原性。方法采用气道滴注方式将pCI-neo-IL-1ra-Fcε载体滴注至大鼠肺部,利用RT-PCR及Westernblot方法检测不同剂量(0.25、0.5、2.5mg.kg-1)载体在不同时间(d4、d...
目的探索基因治疗载体pCI-neo-IL-1ra-Fcε在大鼠体内的最适表达条件及免疫原性。方法采用气道滴注方式将pCI-neo-IL-1ra-Fcε载体滴注至大鼠肺部,利用RT-PCR及Westernblot方法检测不同剂量(0.25、0.5、2.5mg.kg-1)载体在不同时间(d4、d7、d20)的表达量,并采用免疫组化方法进行验证。间接ELISA法检测滴注后IL-1ra-Fcε蛋白IgG抗体变化,并对IgG抗体亚型IgG2a和IgG1进行分析。结果3种不同剂量载体在滴注后d20均可检测到目的蛋白表达,2.5mg·kg-1组蛋白表达量明显高于另外2组;以0.25mg·kg-1剂量滴注载体,目的基因d4时未见表达,d7时表达量增加,d20时达到最大值;免疫组化结果显示IL-1ra-Fcε基因在大鼠肺组织中得到有效表达。结论成功建立pCI-neo-Ira-Feε载体在大鼠体内最适表达条件,此载体可诱导机体产生Th1型免疫应答。
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关键词
il-
1
ra-fc
ε融合基因
基因治疗
表达
免疫原性
哮喘
气道滴注
下载PDF
职称材料
题名
pIRES2-EGFP-IL-1ra-Fcε真核表达载体的构建及鉴定
被引量:
4
1
作者
刘中成
王园园
邹民吉
王嘉玺
徐东刚
机构
军事医学科学院基础医学研究所
出处
《分子细胞生物学报》
CSCD
北大核心
2008年第4期309-316,共8页
基金
国家科技支撑计划课题(2006BAI19B05-3)~~
文摘
采用RT-PCR方法从哮喘大鼠脾细胞中克隆IgE恒定区cDNA,同时从载体pBV220-IL-1ra中克隆IL-1ra基因,利用重叠延伸PCR技术构建IL-1ra-Fcε融合基因。将其克隆入真核表达载体pIRES2-EGFP,以脂质体法转染293T细胞,同时采用气管滴注方式滴注大鼠肺部。经Western blot、RT-PCR及荧光显微镜观察此融合基因在293T细胞及大鼠肺组织中实现了表达,为过敏性哮喘基因治疗奠定了基础。
关键词
il-
1
ra-fc
ε融合基因
转染
真核表达
鉴定
Keywords
il-1ra-fcε fusion gene
. Transfection. Eukaryotic expression. Identification
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
下载PDF
职称材料
题名
IL-1ra-Fcε融合基因在大鼠体内表达条件优化及免疫原性分析
被引量:
1
2
作者
刘中成
张艳芬
机构
河北大学药学院
河北大学实验室管理办公室
出处
《中国药理学通报》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第5期638-642,共5页
基金
河北省教育厅资助项目(NoZ2009307)
河北大学引进人才资助项目(No2008-140)
河北省自然科学基金资助项目(NoC2010000248)
文摘
目的探索基因治疗载体pCI-neo-IL-1ra-Fcε在大鼠体内的最适表达条件及免疫原性。方法采用气道滴注方式将pCI-neo-IL-1ra-Fcε载体滴注至大鼠肺部,利用RT-PCR及Westernblot方法检测不同剂量(0.25、0.5、2.5mg.kg-1)载体在不同时间(d4、d7、d20)的表达量,并采用免疫组化方法进行验证。间接ELISA法检测滴注后IL-1ra-Fcε蛋白IgG抗体变化,并对IgG抗体亚型IgG2a和IgG1进行分析。结果3种不同剂量载体在滴注后d20均可检测到目的蛋白表达,2.5mg·kg-1组蛋白表达量明显高于另外2组;以0.25mg·kg-1剂量滴注载体,目的基因d4时未见表达,d7时表达量增加,d20时达到最大值;免疫组化结果显示IL-1ra-Fcε基因在大鼠肺组织中得到有效表达。结论成功建立pCI-neo-Ira-Feε载体在大鼠体内最适表达条件,此载体可诱导机体产生Th1型免疫应答。
关键词
il-
1
ra-fc
ε融合基因
基因治疗
表达
免疫原性
哮喘
气道滴注
Keywords
il-1ra-fcε fusion gene
gene
therapy
expression
immunogenicity
asthma
trachea instillation
分类号
R-332 [医药卫生]
R322.35 [医药卫生—人体解剖和组织胚胎学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
pIRES2-EGFP-IL-1ra-Fcε真核表达载体的构建及鉴定
刘中成
王园园
邹民吉
王嘉玺
徐东刚
《分子细胞生物学报》
CSCD
北大核心
2008
4
下载PDF
职称材料
2
IL-1ra-Fcε融合基因在大鼠体内表达条件优化及免疫原性分析
刘中成
张艳芬
《中国药理学通报》
CAS
CSCD
北大核心
2010
1
下载PDF
职称材料
已选择
0
条
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参考文献
引证文献
统计分析
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