IL-1ra-Fcε融合分子的构建及其在293T细胞中的表达与鉴定

目的:构建IL-1ra-Fcε融合基因的真核表达载体pCI-neo-IL-1ra-Fcε,研究其在体外的表达情况。方法:利用RT-PCR方法从哮喘大鼠脾细胞中克隆大鼠IgE恒定区cDNA,同时从载体pBV220-IL-1ra中克隆IL-1ra基因。利用重叠延伸PCR技术合成了IL-1ra-Fcε融合基因。将其克隆入真核表达载体pCI-neo,以脂质体法转染293T细胞,G418筛选稳定表达细胞株。利用Western印迹、RT-PCR验证融合蛋白的表达,并在EL-4/CTLL-2细胞中对融合蛋白活性进行了验证。结果和结论:成功构建了pCI-neo-IL-1ra-Fcε表达载体,Western印迹、RT-PCR验证融合蛋白在293T细胞得到表达,并获得了稳定表达IL-1ra-Fcε的细胞株。表达的融合蛋白在体外具有拮抗IL-1的功能。为过敏性哮喘基因治疗奠定了基础。