重型再生障碍性贫血患者异基因造血干细胞移植前后血清IL-2、TNF-α、sIL-2R水平变化及其与急性移植物抗宿主病的关系

目的 探讨重型再生障碍性贫血(SAA)患者异基因造血干细胞移植前后血清白细胞介素-2(IL-2)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、可溶性白细胞介素2受体(sIL-2R)水平变化及其与急性移植物抗宿主病(aGVHD)的关系.方法 选取2020年5月~2022年6月在本院行异基因造血干细胞移植的78例SAA患者作为研究组,选取同期进行体检的72例健康者为对照组,比较两组血清IL-2、TNF-α、sIL-2R水平及研究组aGVHD的发生情况,并探讨其临床意义.结果 研究组移植前后血清IL-2、TNF-α及sIL-2R水平组内比较及其与对照组比较,差异均无统计学意义(P>0.05);研究组有32例患者发生aGVHD(aGVHD组),aGVHD组血清IL-2、TNF-α及sIL-2R水平明显高于无aGVHD组和对照组(P<0.05);单因素分析显示,aGVHD组与无aGVHD组的患者年龄、患者体重、患者文化程度、供受者性别、供受体亲缘关系、ABO血型比较,差异无统计学意义(P>0.05),IL-2、TNF-α、sIL-2R水平比较,差异有统计学意义(P<0.05);多因素Logistic回归分析结果显示,IL-2、TNF-α、sIL-2R是aGVHD发生的危险因素(P<0.05).结论 SAA患者移植前后血清IL-2、TNF-α及sIL-2R水平无明显变化,但aGVHD患者血清IL-2、TNF-α及sIL-2R水平变化明显,临床中检测其水平有助于预测aGVHD的发生.

^(60)Co辐射后IL-2基因修饰肿瘤细胞生物学行为的改变

目的研究IL - 2基因修饰人肿瘤细胞生物学行为是否因辐射而发生变化。 方法分别从细胞形态结构、MHC分子表达、整合的基因IL - 2基因是否丢失、能否保持mRNA表达、能否分泌表达生物活性的IL - 2等方面进行了实验。结果未见整合的IL - 2基因丢失 ,能表达IL - 2mRNA且在一定时间内持续分泌具有生物活性的IL - 2 ;细胞膜表面MHC分子无明显改变 ;细胞形态结构无明显变化。结论经60 Co辐射修饰的肿瘤细胞致瘤性消失 ,但在一定时间内能分泌IL - 2 ,这为开展基因工程“瘤苗”的临床应用提供了依据。

IL-12基因转导EL-4细胞对C57BL/6小鼠的肿瘤疫苗作用

应用逆转录病毒构建了IL 12表达载体 ,以研究IL 12基因修饰的肿瘤细胞的肿瘤疫苗作用 ,将其转染EL 4胸腺瘤细胞并研究了该基因导入细胞的抗肿瘤免疫效果。当接种了EL 4 /IL 12转染细胞后 ,在C5 7BL/ 6同系鼠中其基因导入细胞的致瘤性比EL 4 /Wt和EL 4 /Neo组明显减少 (P <0 .0 1) ,在EL 4 /IL 12被排斥后 ,体内试验中实验动物诱发了抗EL 4 /Wt的系统性、保护性免疫 ,51Cr释放测定中 ,获得一个较强的抗EL 4 /Wt和一个较弱的抗同系Lewis肿瘤细胞的CTL活性 ,体内淋巴细胞消除分析的结果提示减少的致瘤性主要依赖于CD4 +,CD8+和NK细胞。这一研究结果提示应用IL 12进行血液肿瘤的治疗是有效的 ,在未来人类癌症的治疗中IL

IL-6通过激活JAK2/STAT3信号通路增强小鼠肺泡巨噬细胞的吞噬功能

目的 探讨白细胞介素6(IL-6)对MH-S小鼠肺泡巨噬细胞吞噬功能的影响及其相关机制。方法 脂多糖(LPS)经气道滴入激发构建小鼠急性肺损伤(ALI)模型,ELISA检测支气管肺泡灌洗液(BALF)中IL-6的含量。体外培养MH-S细胞,在信号转导子与转录激活子3 (STAT3)抑制剂Stattic(5μmol/L)存在与否的情况下,再加入IL-6(10 ng/mL~500 ng/mL)刺激6 h,加入荧光微球孵育2 h后,采用流式细胞术检测MH-S细胞吞噬荧光微球情况;Western blot法检测磷酸化的Janus激酶2(p-JAK2)、磷酸化的STAT3(p-STAT3)、肌动蛋白相关蛋白2(Arp2)、纤维型肌动蛋白(F-actin)的表达水平。结果 鼻腔滴入LPS后,小鼠BALF中IL-6含量显著升高。随着IL-6刺激剂量的增加,MH-S细胞吞噬荧光微球的作用增强,Arp2、 F-actin蛋白的表达水平升高。100 ng/mL IL-6刺激MH-S细胞后,p-JAK2和p-STAT3蛋白的表达水平升高。阻断MH-S细胞STAT3信号后,IL-6促进细胞吞噬的效应完全消失,IL-6诱导的Arp2、 F-actin蛋白表达增加被抑制。结论 IL-6通过激活JAK2/STAT3信号通路促进MH-S细胞Arp2、 F-actin蛋白的表达增强吞噬功能。

IL-2基因转导自身肿瘤特异性细胞毒T细胞对小鼠实体瘤作用的实验研究

许多研究发现自身肿瘤特异性细胞毒T细胞(CTL)能定位于体内肿瘤所在部位．其杀瘤细胞活性及特异性远在LAK细胞之上，来源和增殖性方面较TIL为优，因此可作为较为理想的载体细胞导入各种治疗基因。将IL-2基因导入CTL中表达并回输．通过其聚集在肿瘤发生局部持续分泌一定量的IL-2，激活机体肿瘤免疫反应或直接杀伤肿瘤细胞，

白细胞介素-2治疗肿瘤的研究进展

白细胞介素-2(IL-2)是最早发现且研究较为深入的细胞因子之一,通过与其受体相互作用发挥功能,激活多种信号转导通路,促进免疫细胞生长、活化与增殖;亦可促进其他细胞因子表达,具有显著的抗肿瘤作用。溶瘤病毒可靶向感染和裂解肿瘤细胞,IL-2武装的溶瘤病毒能够进一步增强机体的抗肿瘤免疫反应,提高抗肿瘤效果。为减少IL-2治疗产生的不良反应,可通过基因工程改造优化IL-2使其半衰期延长、毒性降低并提高抗肿瘤活性。本文就IL-2治疗肿瘤的研究进展做一综述,并重点阐述IL-2武装溶瘤病毒及改造优化的IL-2基因在肿瘤治疗中的作用。

IL-2、IL-4基因转染后肿瘤细胞表面ICAM-1分子的表达及其作用

为了进一步研究细胞因子基因转染后肿瘤细胞体内致癌原性、免疫原性变化的分子 机制，将ＩＬ－２、ＩＬ－４ 基因转染入Ｂ１６黑色素瘤细胞，观察了其体内接种后致瘤原性变化，通过 ＦＡＣＳ法检测了其细胞表面粘附分子－１（ＩＣＡＭ－１）的表达水平，分析了其细胞表面 ＩＣＡＭ－１表达水 平以及它们与肿瘤细胞对ＬＡＫ、ＣＴＬ等免疫效应细胞杀伤敏感性变化的关系。结果表明，ＩＬ－２、ＩＬ－ ４基因转染后Ｂ１６细胞体内致瘤原性明显降低，其细胞表面ＩＣＡＭ－１的表达高于野生型Ｂ１６细胞， 且对ＬＡＫ、ＣＴＬ细胞的杀伤敏感性增加。抗ＩＣＡＭ－１单抗可以阻断ＩＬ－２、ＩＬ－４基因转染后Ｂ１６细 胞对ＬＡＫ、ＣＴＬ杀伤敏感性的增强效应。表明细胞因子基因转染后Ｂ１６细胞体内致瘤原性改变除 与其诱导或增强机体的抗肿瘤免疫反应有关外，还与细胞表面ＩＣＡＭ－１分子的表达增加从而使其 对免疫效应细胞的杀伤敏感性增强有关。

联合应用成纤维细胞介导的G-CSF基因疗法及IL-2基因疗法对肿瘤的治疗作用

本研究探讨了成纤维细胞介导的G-CSF基因疗法联合应用IL-2基因疗法及时对小鼠Ⅰ期肾癌的治疗作用。经NIH3T3-IL-2基因疗法、NIH3T3-G-CSF基因疗法单独治疗后的荷瘤小鼠存活期明显延长,而经以上两者联合治疗后的荷瘤小鼠存活期的延长更为明显,且有75％荷瘤小鼠长期存活。对经G-CSF基因疗法及IL-2基因疗法联合治疗后的荷瘤小鼠体内抗肿瘤免疫功能的检测表明,经治疗后第14天,荷瘤小鼠脾脏明显增大,脾脏淋巴细胞数量明显增多;肿瘤局部的常规病理检查可见数量较多的嗜酸性粒细胞浸润。荷瘤小鼠脾细胞NK活性、经诱导后的LAK活性及CTL杀伤活性均明显升高,小鼠腹腔巨噬细胞杀伤活性在NIH3T3-IL-2基因疗法治疗组升高,而在NIH3T3-G-CSF基因疗法组未见明显升高。以上结果表明,联合应用成纤维细胞介导的G-CSF基因疗法与IL-2基因疗法可因对小鼠体内抗肿瘤免疫功能的联合增强作用而取得更佳的抗肿瘤效果。

肝癌TIL细胞转导IL-2基因的生物学变化研究

目的：为探讨ＩＬ２基因导入肝癌浸润淋巴细胞及对其生物学活性的影响。方法：应用逆转录病毒载体介导ＩＬ２基因导入人肝癌浸润淋巴细胞（ＴＩＬ），同时对经转导ＩＬ２基因的肝癌浸润淋巴细胞的杀伤活性，增殖能力及表型等进行了观察。结果：转导ＩＬ２基因后的肝癌浸润淋巴细胞能表达一定量的ＩＬ２，明显高于未转导细胞，但其杀伤肿瘤细胞活性，增殖能力及表型等没有显著变化。结论：应用逆转录病毒载体介导ＩＬ２基因导入人肝癌浸润淋巴细胞获得成功，亦有ＩＬ２基因产物表达。

肿瘤抗原冲击致敏的IL-2基因修饰的巨噬细胞治疗肾癌的实验研究

目的 :观察体外肿瘤抗原冲击致敏的白细胞介素 2 (IL 2 )基因修饰的巨噬细胞对肾癌小鼠的治疗效果并探讨其相关的免疫机理。方法 :通过重组腺病毒的介导 ,将IL 2基因转入新鲜分离的小鼠腹腔巨噬细胞 ,经肿瘤抗原冲击致敏后回输治疗原位肾癌小鼠 ,采用 4h5 1 Cr释放法检测脾脏NK和CTL活性。结果 :IL 2基因修饰的巨噬细胞经肿瘤抗原冲击后体内回输可使肾癌小鼠肺转移结节明显减少 ,存活期明显延长 ,40 %肾癌小鼠达到长期存活。治疗后荷瘤小鼠脾脏NK和CTL活性显著提高。结论 :IL 2基因修饰的巨噬细胞经肿瘤抗原冲击后自体回输是治疗肾癌的有效方法。

成纤维细胞介导的IL-2及IL-6基因疗法增强常规瘤苗抗肿瘤作用的实验研究

研究表明，IL-2、IL-6单独或联合应用具有较强的抗肿瘤作用，但当大剂量使用时，却伴随着一系列毒副作用的发生，IL-6相对其它细胞因子具有毒性小功能广泛等优点，它能刺激T细胞的分化与增殖、诱导IL-2及IL-2R的表达，IL-2在免疫反应过程中也发挥了重要调节作用．其作用之一是能刺激杀伤性T细胞的增殖并增强其杀伤活性。

ERK1/2信号转导途径在低切应力上调人脐静脉内皮细胞IL-8基因表达中的作用

血管内皮细胞位于血流和血管壁之间,除受化学因素的调节外还受力学因素的影响。切应力可通过刺激相应的力学感受系统来调节内皮细胞某些基因的表达,其中包括诱导内皮细胞表达IL- 8。为了阐明MAPK信号途径中的ERK1/ 2信号通路是否参与调控低切应力上调人脐静脉内皮细胞IL- 8基因表达,采用Western blot分析了低切应力(4.2 0 dyne/ cm2 )处理不同时间内皮细胞ERK1/ 2的磷酸化水平及TPK抑制剂Genistein,MEK抑制剂PD980 5 9对其磷酸化的影响;采用定量RT- PCR检测内皮细胞经低切应力刺激或给予阻断剂后再行切应力刺激等处理后IL- 8基因的表达。结果显示:(1)低切应力处理可引起内皮细胞ERK1/ 2蛋白磷酸化水平上调,其磷酸化水平与切应力作用时间有关,具有快速、双向性的特点(在刺激10 min时达到高峰,2 h左右降至未刺激水平) ,阻断剂Genistein和PD980 5 9处理后,ERK1/ 2磷酸化水平与低切应力刺激10 min比较明显降低;(2 )阻断剂Genistein,PD980 5 9可显著抑制低切应力所致的内皮细胞IL- 8m RNA上调。结果表明低切应力可通过ERK1/ 2信号途径上调人脐静脉内皮细胞IL- 8基因的表达。

B淋巴细胞瘤-2关联永生基因3蛋白、多重肿瘤抑制基因1在宫颈癌癌前病变中表达及联合液基细胞学检查的临床意义

目的研究B淋巴细胞瘤-2关联永生基因3(BAG3)蛋白、多重肿瘤抑制基因1(P16)在宫颈癌癌前病变中表达及联合液基细胞学检查的临床意义。方法选择绵阳市中心医院2015年6月至2017年6月在妇科门诊筛查并确诊的120例宫颈病变病人为研究对象,根据其病变情况分为两组,其中癌前病变组病人69例,宫颈癌组病人51例。对比两组病人的BAG3、P16水平,将不同严重程度宫颈癌癌前病变病人的BAG3、P16水平进行比较,分析联合检测效能。结果宫颈癌组病人的BAG3(2.74±0.37)水平、P16(1.45±0.38)水平显著高于癌前病变组BAG3(1.70±0.51)、P16(0.53±0.16),差异有统计学意义(P<0.05)。不同严重程度宫颈癌癌前病变病人的BAG3和P16水平差异有统计学意义(P<0.05),其中宫颈上皮内瘤变Ⅰ级(CINⅠ)组的BAG3(1.01±0.24)水平低于CINⅡ组BAG3(1.78±0.79)和CINⅢ组的BAG3(2.33±0.88),且CINⅡ组低于CINⅢ组,差异有统计学意义(P<0.05);CINⅠ组的P16(0.21±0.06)水平低于CINⅡ组P16(0.45±0.10)和CINⅢ组的P16(0.72±0.17)水平,且CINⅡ组低于CINⅢ组,差异有统计学意义(P<0.05)。联合诊断对于宫颈癌的诊断特异度显著高于单独检测,差异有统计学意义(P<0.05)。通过ROC曲线分析结果发现联合检测对于宫颈癌癌前病变的诊断ROC曲线下面积显著高于单独检测(P<0.05)。结论随着宫颈癌前病变的进展,P16、BAG3表达增加,BAG3蛋白、P16联合液基细胞学检查对于病人的诊断具有积极的意义。

IL-2基因修饰的肿瘤细胞对小鼠体内巨噬细胞数量和功能的影响

目的 探讨IL - 2基因修饰的肿瘤细胞对小鼠体内巨噬细胞 (M)数量和功能的影响 .方法 应用腺病毒载体介导的小鼠IL - 2基因 (Ad -mIL - 2 )修饰CT2 6小鼠结肠腺癌细胞 (CT2 6 -mIL - 2 )后皮下接种小鼠 ,计数小鼠腹腔M的数量 ,观察其吞噬功能 ,混合淋巴细胞反应法 (MLR)测定其抗原提呈能力 ,MTT法检测其杀伤活性 .结果 mIL - 2基因修饰的CT2 6细胞 (CT2 6 -mIL - 2细胞 )皮下接种后 ,小鼠腹腔M数量显著增加 ,吞噬能力明显增强 ,抗原提呈能力提高 ,并具有较强的杀伤活性 .结论 CT2 6 -mIL - 2细胞分泌的IL - 2能有效地激活M ,这可能是CT2 6 -mIL - 2细胞体内致瘤性下降的原因之一 .

IL-2、IL-4基因转染后B16细胞表面ICAM-1的表达及其肿瘤细胞致瘤原性的变化

IL-2、IL-4基因转染的肿瘤细胞接种至体内后致瘤原性显著下降甚至消失，但是由于所染的细胞因子基因、肿瘤细胞、细胞因子表达水平及动物模型等方面的差异这些细胞因子基因修饰的肿瘤致瘤原性下降的免疫学机理也有不同，但均与这些肿瘤细胞体内接种后，机体肿瘤免疫功能的增强有关，

脂质体介导IL-2、TNF-α联合基因转导体内抗肝细胞癌的实验研究

目的 :探讨脂质体介导IL 2cDNA、TNF αcDNA联合基因转导体内抗肿瘤效果。方法 :建立裸鼠肝癌动物模型 ,在荷瘤部位将脂质体包裹的IL 2cDNA和TNF αcDNA直接注入瘤体中 ,观察肿瘤大小变化 ,并检测此 2种基因在肿瘤组织中的表达情况。结果 :IL 2基因和TNF α基因联合治疗组肿瘤生长明显受到抑制 ,抗肿瘤效果显著优于单纯治疗组和对照组。结论 :IL 2和TNF α基因联合治疗组对肿瘤生长抑制效果明显优于单纯治疗组与对照组 ,荷瘤鼠生存期明显延长 (P <0 0 5 )。

联合应用IL-2和IL-3的基因疗法增强骨髓移植后骨髓细胞毒活性及抗肿瘤效果的实验研究

目的：探讨联合应用成纤维细胞介导ＩＬ２和ＩＬ３的基因疗法对骨髓移植（ＢＭＴ）后荷瘤小鼠抗肿瘤作用的效果及机理。方法：将分别转染ＩＬ２基因及ＩＬ３基因的ＮＩＨ３Ｔ３细胞以单独或联合方式移植至ＢＭＴ的荷瘤小鼠腹腔内８ｄ后，取出小鼠骨髓细胞检测杀伤活性的变化以及ＩＬ２受体的表达，并观察荷瘤小鼠的存活期。结果：ＩＬ３基因治疗虽然可加速ＢＭＴ后造血重建过程，但对骨髓细胞的ＮＫ、ＬＡＫ活性具有一定的抑制作用；ＩＬ２基因治疗可明显提高骨髓细胞的杀伤活性；联合应用基因治疗后荷瘤小鼠骨髓ＮＫ、ＬＡＫ活性及骨髓细胞ＣＤ２５表达升高，明显延长大剂量化疗后接受ＢＭＴ的荷瘤小鼠的存活期。结论：联合应用ＩＬ２和ＩＬ３的基因疗法能协同提高骨髓细胞ＩＬ２受体表达水平，提高骨髓细胞毒活性，增强ＢＭＴ后的抗肿瘤效果。

IL-2基因转染的肿瘤细胞增强机体免疫功能的实验研究

目的:探讨小鼠接种腺病毒介导的IL-2基因转移的CT26小鼠结肠腺癌细胞后机体免疫功能的变化(包括CTL、LAK细胞、NK细胞、巨噬细胞的杀伤活性变化)。方法:体外将腺病毒介导的小鼠IL-2基因转染CT26细胞(CT26-mIL-2),然后将CT26-mIL2细胞接种于小鼠皮下。采用4h乳酸脱氢酸释放法检测荷瘤小鼠CTL、LAK、NK细胞的杀伤活性,MTT法检测巨噬细胞的杀伤活性。结果:接种CT26-mlL-2后第14d,小鼠脾细胞NK活性和诱导后的LAK活性和CTL活性均显著高于对照组(P<0.01);小鼠腹腔巨噬细胞数量显著增加,杀伤活性显著增强(P<0.01)。结论:IL-2基因转染的肿瘤细胞能诱导机体的特异性和非特异性免疫功能参与机体的抗肿瘤作用。

IFN-γ对IL-2基因转染B16细胞治疗肿瘤的增强作用

本实验在完成ＩＬ－２基因转染瘤苗的基础上，探索了重组ＩＦＮ－γ对其效果的增强作用。结果表明，ＩＬ－２基因转染使Ｂ１６细胞成瘤性显著降低；小鼠经ＩＬ－２基因修饰的Ｂ１６细胞免疫后，对接种的亲代Ｂ１６细胞有保护作用；ＩＬ－２基因转染的Ｂ１６细胞对接种亲代Ｂ１６细胞的小鼠有一定的治疗作用，与重组ＩＦＮ－γ联合应用后，治疗作用加强。上述结果表明，佐以合适的重组细胞因子，有可能提高单基因转染瘤苗的作用。

IL-12协同B7-1转基因细胞增强C57BL/6小鼠的抗肿瘤免疫

目的：应用逆转录病毒构建IL－12、B7－1表达载体，以研究基因修饰的肿瘤细胞的癌疫苗作用。方法：将两种表达载体分别转染EL－4胸腺瘤细胞，使该细胞能表达分泌B7－1或IL－12，并研究了该基因导入细胞的抗肿瘤免疫效果。结果：当接种了EL－4／IL－12转染细胞后，在C57BL／6同系鼠中其基因导入细胞的肿瘤原性比较EL－4／Wt和EL－4／Neo组明显减少（P＜0．01），在EL－4／IL－12组的肿瘤被排斥后，实验动物体内诱发了抗EL－4／Wt的全身性、保护性免疫，用51Cr释放测定法证明有一个较强的抗EL－4／Wt和一个较弱的抗同系Lewis肿瘤细胞的CTL活性，体内淋巴细胞消除分析的结果提示减少的肿瘤原性主要与CD4＋、CD8＋和NK细胞有关。用EL－4／IL－12基因转染的瘤细胞进行疫苗治疗比较用EL－4／Neo瘤细胞作疫苗治疗能更加有效地延缓已建立的EL－4／Wt肿瘤的生长（P＜0．005），EL－4／IL－12和EL－4／B7－1基因联合转染组比用单一的转基因细胞增强了治疗效果（P＜0．005）。结论：研究结果提示应用IL－12进行血液肿瘤的治疗是有效的，IL－12和B7－1联合使用在未来人类癌症的治疗中有一定的应用前景。