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转染IL-3基因的骨髓基质细胞促进骨髓移植小鼠造血功能重建 被引量:4
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作者 蒋激扬 李爱玲 +4 位作者 王光明 马建波 郝洁 关志强 谢蜀生 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2003年第6期633-638,共6页
为了探讨可调控表达IL 3基因的骨髓基质细胞系对异基因骨髓移植小鼠造血功能重建的促进作用 ,建立了可诱导表达IL 3基因的工程化骨髓基质细胞系QXMSC1tet on +IL 3,加入多西环素 (Dox)诱导骨髓基质细胞系表达IL 3并检测其活性。C5 7BL/ ... 为了探讨可调控表达IL 3基因的骨髓基质细胞系对异基因骨髓移植小鼠造血功能重建的促进作用 ,建立了可诱导表达IL 3基因的工程化骨髓基质细胞系QXMSC1tet on +IL 3,加入多西环素 (Dox)诱导骨髓基质细胞系表达IL 3并检测其活性。C5 7BL/ 6 (H 2 b)小鼠经γ射线致死剂量照射后 ,输入供体BALB/C(H 2 d)小鼠去除T细胞的骨髓细胞 1× 10 7/只 ,同时输注骨髓基质细胞QXMSC1tet on +IL 35× 10 5/只 ,并灌服多西环素诱导IL 3表达。在第 30天 ,6 0天检测骨髓移植小鼠外周血红细胞 ,白细胞数 ,骨髓有核细胞数 ,骨髓CFU S ,CFU GM ,CFU E和CFU GEMM数。结果表明 :成功建立可诱导表达IL 3基因的骨髓基质细胞系QXMSC1tet on +IL 3,异基因骨髓移植共输注基质细胞系QXMSC1tet on +IL 3可使异基因骨髓移植小鼠外周血红细胞、血小板、白细胞明显恢复 ,骨髓中有核细胞数 ,CFU S ,CFU GM ,CFU E ,CFU GMEE明显增加。结论 :输注基因工程化基质细胞 ,并诱导细胞因子IL 展开更多
关键词 il-3基因 骨髓基质细胞 骨髓移植 造血功能 治疗 小鼠 细胞数
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安徽汉族人群IL-1F10-3基因rs3811058位点单核甘酸多态性与强直性脊柱炎患者遗传易感性研究 被引量:3
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作者 张立 潘发明 +9 位作者 曾臻 段振华 王笙 李建平 刘萍 李桂兴 徐胜前 徐建华 张天琛 邹延峰 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2012年第3期308-310,共3页
目的了解IL-1F10-3基因rs3811058位点的单核苷酸多态性与强直性脊柱炎遗传易感性的关系。方法采用病例对照研究设计,通过聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法对基因型筛查并进行基因组测序验证,检测151例强直性脊柱炎患者... 目的了解IL-1F10-3基因rs3811058位点的单核苷酸多态性与强直性脊柱炎遗传易感性的关系。方法采用病例对照研究设计,通过聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法对基因型筛查并进行基因组测序验证,检测151例强直性脊柱炎患者和155例正常对照基因型,并分析基因型及等位基因频率在两组中的分布。结果 IL-1F10-3基因rs3811058位点的等位基因频率和基因型频率在病例组和对照组中的分布差异均无统计学意义。结论安徽地区汉族人群强直性脊柱炎患者遗传易感性可能与IL-1F10-3基因rs3811058位点单核苷酸多态性无关。 展开更多
关键词 强直性脊柱炎 单核苷酸 多态性 il-1F10-3基因
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复制缺陷型鼠IL-3重组腺病毒的构建和鉴定 被引量:2
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作者 刘林 罗成基 +1 位作者 袁良平 粟永平 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1999年第4期242-244,共3页
构建以CMV启动子控制鼠IL-3基因表达的复制缺陷型腺病毒(AdCMVIL-3)。将含全部编码序列的鼠IL-3cDNA克隆于腺病毒穿梭质粒pMH4的CMV启动子下游,再与含腺病毒基因组的质粒pBHG10共转染293细... 构建以CMV启动子控制鼠IL-3基因表达的复制缺陷型腺病毒(AdCMVIL-3)。将含全部编码序列的鼠IL-3cDNA克隆于腺病毒穿梭质粒pMH4的CMV启动子下游,再与含腺病毒基因组的质粒pBHG10共转染293细胞,经细胞内同源重组后产生7个病毒空斑,取其中4个空斑扩增后经双引物PCR检测,结果均含有IL-3及腺病毒特有片段,表明成功地构建了携带鼠IL-3基因的复制缺陷型重组腺病毒。 展开更多
关键词 白细胞介素3 腺病毒 载体 基因治疗
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IL-23生物活性与自身免疫性疾病关系的研究 被引量:2
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作者 刘丽 黄燕萍 《中国妇幼健康研究》 2013年第2期238-240,共3页
白介素(IL)-23是由p19和p40通过二硫键形成的异源二聚体分子,主要由抗原提呈细胞分泌,可促进辅助性T细胞17(Thl7)的分化及产生白介素-17,是连接固有免疫和适应性免疫的重要桥梁,参与多种自身免疫性炎症性疾病的发病机制。白介素... 白介素(IL)-23是由p19和p40通过二硫键形成的异源二聚体分子,主要由抗原提呈细胞分泌,可促进辅助性T细胞17(Thl7)的分化及产生白介素-17,是连接固有免疫和适应性免疫的重要桥梁,参与多种自身免疫性炎症性疾病的发病机制。白介素-23、白介素-23受体、白介素-23/白介素~17轴已作为临床治疗自身免疫性疾病的潜在靶向位点。白介素-23受体是造血细胞因子受体家族的成员,其单核苷酸多态性参与炎症的防御机制,是人类自身免疫重要的基因多态性位点。近年来研究显示白介素-23R基因多态性与多种自身免疫性疾病均有相关性。该文对IL-23生物学活性与自身免疫炎症性疾病的关系进行了综述。 展开更多
关键词 白介素-23 白介素-17 自身免疫性疾病 基因多态性
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腺病毒介导的IL-24基因对胶质瘤细胞系U251拓扑异构酶Ⅱα及Caspase-3表达的影响 被引量:2
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作者 韩硕 崔慧先 +3 位作者 李文玲 赵俊霞 曹翠丽 闫蕴力 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期48-52,共5页
目的探讨腺病毒介导的IL-24基因(Ad5F35-hIL-24)对胶质瘤细胞系U251拓扑异构酶Ⅱα(topoⅡα)及Caspase-3表达的影响。方法应用腺病毒载体将IL-24基因转染U251细胞后,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)方法观察Ad5F35-hIL-24对U251细胞的抑制作用... 目的探讨腺病毒介导的IL-24基因(Ad5F35-hIL-24)对胶质瘤细胞系U251拓扑异构酶Ⅱα(topoⅡα)及Caspase-3表达的影响。方法应用腺病毒载体将IL-24基因转染U251细胞后,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)方法观察Ad5F35-hIL-24对U251细胞的抑制作用;Hoechst33258荧光染色,以及流式细胞术测定细胞凋亡;应用免疫组织化学方法检测topoⅡα表达;免疫印迹法检测topoⅡα和Caspase-3蛋白质表达变化;Transwell实验观察Ad5F35-hIL-24对U251细胞侵袭力的影响。结果与对照组相比,Ad5F35-hIL-24对胶质瘤细胞有明显抑制作用,能显著诱导细胞凋亡,且呈浓度依赖性;免疫组织化学法显示,Ad5F35-hIL-24能明显抑制topoⅡα表达;免疫印迹检测表明,topoⅡα表达明显降低,而Caspase-3蛋白的表达水平增加;Transwell实验表明,Ad5F35-hIL-24能明显降低U251细胞的侵袭能力。结论外源性IL-24基因能显著抑制胶质瘤细胞增殖,诱导细胞凋亡;topoⅡα及Caspase-3是其重要的作用靶点。该结果对于IL-24基因用于临床治疗胶质瘤有一定参考意义。 展开更多
关键词 白细胞介素-24基因 拓扑异构酶Ⅱα CASPASE-3 胶质瘤 免疫印迹法 流式细胞术 人胶质瘤细胞系U251
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多西环素诱导表达下IL-3基因转染小鼠骨髓基质细胞促进造血 被引量:4
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作者 蒋激扬 李爱玲 谢蜀生 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2003年第4期335-340,共6页
本研究探讨用多西环素调控IL 3基因表达的小鼠骨髓基质细胞系对小鼠造血干细胞增殖分化的促进作用。构建含小鼠IL 3基因逆转录病毒载体系统 ,转染小鼠骨髓基质细胞系 ,获得QXMSC1Tet on IL 3;体外加入多西环素诱导IL 3基因表达并检测IL ... 本研究探讨用多西环素调控IL 3基因表达的小鼠骨髓基质细胞系对小鼠造血干细胞增殖分化的促进作用。构建含小鼠IL 3基因逆转录病毒载体系统 ,转染小鼠骨髓基质细胞系 ,获得QXMSC1Tet on IL 3;体外加入多西环素诱导IL 3基因表达并检测IL 3表达活性 ;观察细胞培养条件上清液对造血祖细胞集落形成单位的作用及QXMSC1Tet on IL 3与骨髓细胞共培养对造血干细胞增殖分化的影响。结果表明 :多西环素提高了QXMSC1Tet on IL 3细胞系IL 3的表达 ,促进骨髓造血祖细胞克隆形成数 ;与骨髓细胞共培养可促进造血干细胞的增殖分化。结论 :应用多西环素诱导外源基因转染的骨髓基质细胞IL 3的表达 。 展开更多
关键词 多西环素 il-3 骨髓基质细胞 QXMSCl 造血干细胞 基因转染
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IBDV VP2/4/3-ChIL-2融合基因真核表达载体的构建及其在Vero细胞中的表达 被引量:1
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作者 万旺军 谢荣辉 +2 位作者 李龙 许健 于涟 《浙江大学学报(农业与生命科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期255-262,共8页
构建含有传染性法氏囊病病毒(InfectiousBursalDiseaseVirus,IBDV)VP2/4/3和鸡白细胞介素2(ChickenInterleukin2,ChIL2)融合基因的真核表达载体pCIVP2/4/3IL2、pCIIL2VP2/4/3,并在Vero细胞中进行表达.应用重叠延伸剪切技术(splicingbyov... 构建含有传染性法氏囊病病毒(InfectiousBursalDiseaseVirus,IBDV)VP2/4/3和鸡白细胞介素2(ChickenInterleukin2,ChIL2)融合基因的真核表达载体pCIVP2/4/3IL2、pCIIL2VP2/4/3,并在Vero细胞中进行表达.应用重叠延伸剪切技术(splicingbyoverlappingextension),分别经3次PCR获得融合基因片段VP2/4/3IL2、IL2VP2/4/3,定向插入真核表达载体pCI中,获得重组质粒pCIVP2/4/3IL2、pCIIL2VP2/4/3,在脂质体介导下,分别转染Vero细胞.RTPCR检测证实导入的外源基因在Vero细胞中得到了转录;间接免疫荧光试验(IFA)和Westernblot检测证实重组质粒在Vero细胞中正确表达了插入的外源基因编码的融合蛋白,且表达的融合蛋白具有免疫反应性.重组真核表达载体pCIVP2/4/3IL2、pCIIL2VP2/4/3的成功构建及其在Vero细胞中的有效表达,为进一步探讨ChIL2作为分子免疫佐剂对IBDVDNA疫苗的特异性免疫增强作用奠定了基础. 展开更多
关键词 传染性法氏囊病病毒 多聚蛋白 鸡白细胞介素2 融合基因 真核表达
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人IL-3、GM-CSF和Hly基因的cDNA克隆及测序
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作者 孙英民 孙朕 樊宝良 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2011年第4期91-94,共4页
试验利用PCR技术扩增并获得了人IL-3、GM-CSF和人溶菌酶(human lysozyme,Hly)基因组基因编码区序列,人IL-3和GM-CSF基因PCR产物与pMD19-T连接,Hly基因PCR产物同pEASY-Blunt载体连接,转化大肠杆菌JM109感受态细胞,蓝白斑筛选后经PCR及酶... 试验利用PCR技术扩增并获得了人IL-3、GM-CSF和人溶菌酶(human lysozyme,Hly)基因组基因编码区序列,人IL-3和GM-CSF基因PCR产物与pMD19-T连接,Hly基因PCR产物同pEASY-Blunt载体连接,转化大肠杆菌JM109感受态细胞,蓝白斑筛选后经PCR及酶切鉴定,选取测序正确的克隆连接到pIRESneo载体中构建相关真核表达载体,分别用这些基因的表达载体转染PK15细胞,48 h后提取转染细胞的总RNA,并采用RT-PCR方法获得了人IL-3、GM-CSF和Hly基因的cDNA,结果发现,所获得的cDNA序列同NCBI登录的序列完全同源。 展开更多
关键词 il-3基因 GM-CSF基因 Hly基因 CDNA 克隆 测序
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OSCC和OLK患者口腔黏膜组织中IL-12p35和Ebi3的表达及意义 被引量:1
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作者 王方方 江南 +1 位作者 罗亮 蔡扬 《贵州医科大学学报》 CAS 2021年第3期335-339,共5页
目的探讨口腔鳞状细胞癌(OSCC)和口腔白斑(OLK)患者口腔黏膜组织中白细胞介素35(IL-35)α链p35亚基(IL-12p35)和β链EB病毒诱导基因3亚基(Ebi3)的表达及意义。方法选取OSCC患者34例、OLK患者32例及正颌手术、良性非炎症性肿瘤切除术患... 目的探讨口腔鳞状细胞癌(OSCC)和口腔白斑(OLK)患者口腔黏膜组织中白细胞介素35(IL-35)α链p35亚基(IL-12p35)和β链EB病毒诱导基因3亚基(Ebi3)的表达及意义。方法选取OSCC患者34例、OLK患者32例及正颌手术、良性非炎症性肿瘤切除术患者15例分别作为OSCC组、OLK组及正常组,取3组患者口腔黏膜组织,采用苏木精-伊红染色法(HE)染色进行形态学观察和病理学诊断,采用免疫组织化学超敏二步法(IHC)检测IL-12p35和Ebi3蛋白的表达。结果OSCC、OLK组患者口腔黏膜组织Ebi3、IL-12p35蛋白阳性表达率均高于正常组(P<0.001),且OSCC与OLK组间Ebi3蛋白的阳性表达率差异有统计学意义(P<0.001);IL-12p35、Ebi3蛋白阳性表达分别与上皮异常增生程度呈正相关关系(r IL-12p35=0.370,P=0.001;r Ebi3=0.380,P<0.001);OSCC组中Ebi3、IL-12p35蛋白表达与患者淋巴结转移有关(P<0.05),但与其性别、年龄、分化程度及TNM分期无关(P>0.05)。结论IL-12p35和Ebi3在OSCC及OLK患者口腔黏膜组织中表达上调,IL-35可能在口腔黏膜癌变发展过程中起重要作用。 展开更多
关键词 白斑 口腔 口腔鳞状细胞癌 口腔黏膜 白细胞介素35 EB病毒诱导基因3 白细胞介素P35亚基
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小鼠IL-3 cDNA转化细胞移植体内表达的初步研究 被引量:2
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作者 刘昕 朱锡华 +3 位作者 谭骏 毛琼国 纪贤文 梁红 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1996年第1期31-34,共4页
随着基因治疗技术的发展和多个细胞因子基因的克隆,人们提出了供细胞因子的基因治疗的设想,以期为肿瘤、老年性痴呆、严重的造血功能障碍等这样一类难治疾病的治疗另辟蹊径。为改善放射损伤小鼠受抑制的造血功能,我们采用基因治疗的... 随着基因治疗技术的发展和多个细胞因子基因的克隆,人们提出了供细胞因子的基因治疗的设想,以期为肿瘤、老年性痴呆、严重的造血功能障碍等这样一类难治疾病的治疗另辟蹊径。为改善放射损伤小鼠受抑制的造血功能,我们采用基因治疗的方法,将小鼠IL-3基因cDNA与逆转录病毒载体重组,转染包装细胞PA317,用其分泌的含IL-3cDNA的复制缺陷逆转录病毒感染、转化NIH3T3细胞,从中筛选可在体外分泌IL-3的克隆,将可分泌IL-3的细胞种植到放射损伤小鼠体内后发现:受体小鼠血清中检出了IL-3的活性;其外周血白细胞计数升至55万/mm3,以成熟中性粒细胞为主;肝、脾脏内有大量各个分化阶段的中性粒细胞。这些结果表明:可以利用基因治疗技术,在体内表达IL-3,改善机体的造血功能。 展开更多
关键词 基因治疗 il-3 放射损伤 CDNA
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人白细胞介素-3突变体的构建及在大肠杆菌中表达的研究
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作者 王燕 朱锡华 +2 位作者 万瑛 纪贤文 刘昕 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1999年第1期16-19,共4页
目的:为了在大肠杆菌中高效表达hIL3cDNA,获得hIL3蛋白,拟对天然型hIL3进行构建以获得新的突变体,同时进行了活性测定,以便深入了解hIL3的结构与功能之间的关系。方法:利用PCR技术对天然型hIL... 目的:为了在大肠杆菌中高效表达hIL3cDNA,获得hIL3蛋白,拟对天然型hIL3进行构建以获得新的突变体,同时进行了活性测定,以便深入了解hIL3的结构与功能之间的关系。方法:利用PCR技术对天然型hIL3N末端第3位蛋氨酸(Met3)和C末端第17位蛋氨酸(Lys116)进行定点突变,获得突变体MhIL3和MVhIL3。结果:经Suger双脱氧法测序证实突变体MhIL3cDNA,MVhIL3cDNA的活性为6.9×104U/ml,而天然型的是1.5×104U/ml。天然型pSM53hNIL3表达量占菌体总蛋白的7%,突变型pSM53MVhIL3表达量占菌体总蛋白的16%。结论:人IL3cDNA可通过PCR技术进行定点突变。 展开更多
关键词 hil-3 CDNA 突变体 白细胞介素3 大肠杆菌
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SAA3启动子调控的炎症诱导表达系统体内表达及对内毒素响应特性研究
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作者 太光平 汪仕良 +2 位作者 王裴 王桂珍 黎鳌 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 1999年第11期777-779,共3页
目的:探索应用血清淀粉样蛋白启动子(SAA3)调控下游基因的可能性,利用构建的SAA3 启动子/氯霉素乙酰转移酶(CAT)表达载体观察SAA3 启动子/增强子应用于调控目的基因体内表达特性及对体内炎症信号刺激的响应特性... 目的:探索应用血清淀粉样蛋白启动子(SAA3)调控下游基因的可能性,利用构建的SAA3 启动子/氯霉素乙酰转移酶(CAT)表达载体观察SAA3 启动子/增强子应用于调控目的基因体内表达特性及对体内炎症信号刺激的响应特性。方法:小鼠随机分2组,采用腹腔注射法转染脂质体/DNA复合物,48 h 后LPS攻击,测定LPS攻击后不同时间CAT的诱导表达(ELISA法)及不同时间的血清IL-6 水平(ELISA法)。结果:LPS攻击可诱导转染小鼠CAT在肝、肺表达,LPS活化迅速诱导肝脏CAT表达,12 h 达3.74ng/mg 蛋白,36~48 h 维持较高的表达水平,96 h 下降;小鼠血清IL-6的水平与肝脏CAT表达显著正相关r= 0.87。结论:本研究证实SAA3 启动子转录调控序列(- 306~+ 47)在体内可响应炎症刺激灵敏启动、诱导下游的报告基因CAT表达,适合于构建自适应炎症诱导性表达载体。 展开更多
关键词 血清 淀粉样蛋白 启动子 炎症 内毒素 表达
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人白介素-3基因表达调节的研究 被引量:2
13
作者 陈鸿书 陈嵩 +1 位作者 曹廷兵 甘立霞 《生物化学杂志》 CSCD 1995年第1期6-10,共5页
报导了h-IL-3基因表达调节研究的结果:(1)人静止的外周血淋巴细胞几乎不表达IL-3mRNA,但受丝裂原PHA的刺激后则诱导IL-3mRNA表达,TPA与PHA联合处理,使IL-3mRNA的蓄积进一步增加,但TP... 报导了h-IL-3基因表达调节研究的结果:(1)人静止的外周血淋巴细胞几乎不表达IL-3mRNA,但受丝裂原PHA的刺激后则诱导IL-3mRNA表达,TPA与PHA联合处理,使IL-3mRNA的蓄积进一步增加,但TPA单独不足以诱导IL-3mRNA蓄积;(2)A23187/TPA能代替PHA/TPA的刺激,并直接诱导IL-3mRNA表达;(3)TREODN处理则显著抑制PHA/TPA诱导的IL-3mRNA表达。这些结果揭示:h-IL-3基因的表达在转录及转录后水平被调节,而且是可诱导的,诱导h-IL-3基因表达、需要Ca2+依赖及PKC依赖的两个信息转导系统,Fos蛋白是反式激活IL-3基因表达的转录因子,PKC依赖的转导系统,可能与IL-3mRNA的稳定性有关。 展开更多
关键词 白细胞介素3 基因表达 调节
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正常及肿瘤细胞中参与IL─3基因表达调节的转录因子研究 被引量:1
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作者 石统东 甘立霞 +1 位作者 曹廷兵 朱锡华 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1996年第3期155-158,共4页
应用凝胶迁移率分析法,以静止与激活的正常人原代T淋巴细胞和Jurkat细胞为材料,以IL-3基因5′侧翼含κB样位点的序列为探针,考证NF-κB是否参与IL-3基因表达的调节。结果表明:①在以PHA/PMA刺激及未刺... 应用凝胶迁移率分析法,以静止与激活的正常人原代T淋巴细胞和Jurkat细胞为材料,以IL-3基因5′侧翼含κB样位点的序列为探针,考证NF-κB是否参与IL-3基因表达的调节。结果表明:①在以PHA/PMA刺激及未刺激的Jurkat细胞和正常人T淋巴细胞中,都存在与这一序列结合的蛋白带,其中在刺激后的正常人T淋巴细胞中出现了一条新的蛋白结合带,而Jurkat细胞中则没有新带型出现,但刺激后的结合带强度显著高于未刺激组。②正常人T淋巴细胞和Jurkat细胞中,与此序列结合的蛋白带型是不相同的。③当用150倍克分子过量的未标记探针与32P标记的探针竞争结合核蛋白因子后,从凝胶迁移中清楚地看到Jurkat细胞和正常人T淋巴细胞中的蛋白带都特异地消失。以上结果提示:①IL-3基因5′侧翼的κB样序列的确存在与之特异结合的蛋白因子,且该蛋白因子的表达是可诱导的。②正常细胞和肿瘤细胞中,与κB样序列结合的转录因子是不完全相同的。从而提示:在正常细胞和肿瘤细胞中。 展开更多
关键词 肿瘤细胞 白细胞介素3 基因表达 转录因子
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构建重组质粒检测癌基因STAT3诱导表达活性
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作者 孟令战 刘永占 《中国公共卫生管理》 2007年第1期65-66,共2页
目的建立基于报告基因的检测方法,检测环境因子饮用水水源有机提取物对癌基因Stat3的诱导表达活性,发现异常活化癌基因的环境致癌因子,为进一步揭示肿瘤发生发展与环境因素的相互作用关系奠定基础。方法将Stat3特异结合序列CRP-APRE克... 目的建立基于报告基因的检测方法,检测环境因子饮用水水源有机提取物对癌基因Stat3的诱导表达活性,发现异常活化癌基因的环境致癌因子,为进一步揭示肿瘤发生发展与环境因素的相互作用关系奠定基础。方法将Stat3特异结合序列CRP-APRE克隆到诱导表达型载体pGL2转录启始位点上游,选择氯霉素乙酰转移酶基因(CAT)作为报告基因克隆在转录启始位点下游,构建重组质粒pTKS3-CAT。转染入表达IL-6受体的人肝癌细菌HepG2中,筛选报告基因CAT表达受IL-6诱导的阳性克隆,同时用无关药物检测模型的特异性。用建立的检测方法——ELISA法检测饮用水源有机提取物对CAT表达活性的影响,检测环境因子对Stat3的诱导表达活性。结果CAT的表达受IL-6诱导并呈现剂量依赖关系,EC50等于0.127nmol.L-1,而无关药物rhEPO不能诱导CAT表达。结论在96孔板上用ELISA法测定CAT基因的诱导表达水平,可在基因水平检测癌基因Stat3的诱导表达活性。 展开更多
关键词 转录信号转导子与激活子3 癌基因 白介素-6 报告基因 环境因子
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TGF⁃β1对炎症状态下人牙周膜成纤维细胞的调控作用 被引量:1
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作者 朱嘉皓 芦婷 钟良军 《口腔疾病防治》 2023年第2期94-103,共10页
目的探讨转化生长因子⁃β1(transforming growth factor⁃β1,TGF⁃β1)对在牙龈卟啉单胞菌来源脂多糖(lipopolysaccharide from Porphyromonas gingivalis,Pg⁃LPS)刺激模拟炎症状态下的人牙周膜成纤维细胞(human periodontal ligament fi... 目的探讨转化生长因子⁃β1(transforming growth factor⁃β1,TGF⁃β1)对在牙龈卟啉单胞菌来源脂多糖(lipopolysaccharide from Porphyromonas gingivalis,Pg⁃LPS)刺激模拟炎症状态下的人牙周膜成纤维细胞(human periodontal ligament fibroblasts,hPDLFs)的调控作用。方法获取hPDLFs并进行免疫组化鉴定,通过qRT⁃PCR与CCK⁃8确定Pg⁃LPS的刺激浓度。将hPDLFs分成4组:空白对照组,单纯100μg/mL Pg⁃LPS;低浓度组,1 ng/mL TGF⁃β1+100μg/mL Pg⁃LPS;中浓度组,10 ng/mL TGF⁃β1+100μg/mL Pg⁃LPS;高浓度组100 ng/mL TGF⁃β1+100μg/mL Pg⁃LPS。CCK⁃8检测细胞增殖情况;划痕实验与Transwell小室实验检测hPDLFs细胞迁移能力;流式细胞术检测hPDLFs的细胞周期;qRT⁃PCR检测hPDLFs的转录因子叉头盒p3(forkhead/winged helix transcription⁃al factor p3,Foxp3)、白细胞介素6(interleukin⁃6,IL⁃6)及EB病毒诱导基因3(Epstein⁃Barrvirus⁃induced gene 3,EBI3)mRNA表达;Western blot检测hPDLFs的Foxp3、IL⁃6及EBI3蛋白表达。结果免疫组化鉴定显示抗波形丝蛋白阳性及抗角蛋白阴性;Pg⁃LPS浓度为100μg/mL时,hPDLFs中IL⁃6 mRNA表达相比空白对照组显著上升(P<0.0001)且细胞增殖能力下降(P<0.0001),所以选择100μg/mL Pg⁃LPS用于模拟炎症状态。10、100 ng/mL TGF⁃β1能提高炎症状态下hPDLFs的增殖能力(P<0.0001);1、10、100 ng/mL TGF⁃β1能促进炎症状态下hPDLFs的迁移能力(P<0.0001);1、10、100 ng/mL TGF⁃β1可加快炎症状态下hPDLFs的细胞周期(P<0.0001);1、10、100 ng/mL TGF⁃β1可抑制炎症状态下hPDLFs的IL⁃6基因和蛋白表达量(P<0.0001),1、10 ng/mL TGF⁃β1可提高炎症状态下hPDLFs的EBI3基因及蛋白表达量(P<0.0001),1、10 ng/mL TGF⁃β1可提高炎症状态下hPDLFs的Foxp3基因表达量,10 ng/mL TGF⁃β1可提高Foxp3蛋白表达量(P<0.05)。结论TGF⁃β1可促进炎症状态下hPDLFs的增殖及迁移能力、上调EBI3表达,可能与转录因子Foxp3表达有关。 展开更多
关键词 转化生长因子⁃β1 牙龈卟啉单胞菌来源脂多糖 转录因子叉头盒p3 白细胞介素6 IL⁃35亚基 EB病毒诱导基因3 牙周炎 人牙周膜成纤维细胞 细胞周期 免疫治疗
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转IL-3基因骨髓基质细胞对异基因骨髓移植后小鼠造血重建的促进作用 被引量:2
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作者 蒋激扬 张敬妹 +1 位作者 郝洁 谢蜀生 《中华血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第8期407-410,共4页
目的 探讨转IL 3基因的小鼠骨髓基质细胞系QXMSC1对异基因骨髓移植 (allo BMT)小鼠造血功能的促进作用。方法 用重组逆转录病毒载体 (含小鼠IL 3cDNA)感染骨髓基质细胞系QXMSC1(H 2 d) ,构建骨髓基质细胞系QXMSC1IL 3,挑选表达量最高... 目的 探讨转IL 3基因的小鼠骨髓基质细胞系QXMSC1对异基因骨髓移植 (allo BMT)小鼠造血功能的促进作用。方法 用重组逆转录病毒载体 (含小鼠IL 3cDNA)感染骨髓基质细胞系QXMSC1(H 2 d) ,构建骨髓基质细胞系QXMSC1IL 3,挑选表达量最高的骨髓基质细胞系QXMSC1IL 3用于以后实验。供体小鼠BALB c(H 2 d)骨髓用抗T细胞单抗anti Thy1.2加补体去除骨髓中T细胞。受体小鼠C5 7BL 6 (H 2 b)经γ射线致死量照射后 ,输入供体骨髓细胞 (1× 10 7 只 )的同时输入QXMSC1IL 3(5× 10 6 只 )细胞。在骨髓移植后第 2 0 ,4 0天 ,分别检测受体小鼠外周血红细胞、白细胞、骨髓有核细胞数 ,CFU S、CFU GM、CFU E和CFU GEMM数以反映骨髓移植后受体小鼠的造血功能。结果 QXMSC1IL 3细胞系可稳定分泌IL 3。allo BMT同时输入QXMSC1IL 3细胞可使allo BMT小鼠外周血红细胞、白细胞明显恢复 ,骨髓中有核细胞数、CFU S、CFU GM、CFU E、CFU GEMM明显增加。结论 基质细胞QXMSC1可作为有效的基因载体进一步促进allo BMT小鼠造血功能重建。 展开更多
关键词 il-3基因 骨髓基质细胞 异基因骨髓移植 小鼠 造血重建 白细胞介素-3 基因疗法
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外源性SHIP基因表达抑制生长因子介导的K562细胞增殖及Akt磷酸化
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作者 杨琳 罗建民 +4 位作者 温树鹏 刘小军 姚丽 杨敬慈 杜行严 《中山大学学报(医学科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期269-274,共6页
【目的】探讨SHIP基因对IL-3诱导K562细胞系增殖的抑制作用,阐明SHIP对K562细胞作用的机制。【方法】将慢病毒质粒pReceiver-Lv31-FIV和pReceiver-Lv31-SHIP转染K562细胞;转染细胞与IL-3共培养,Western blot法检测K562细胞Akt磷酸化;观... 【目的】探讨SHIP基因对IL-3诱导K562细胞系增殖的抑制作用,阐明SHIP对K562细胞作用的机制。【方法】将慢病毒质粒pReceiver-Lv31-FIV和pReceiver-Lv31-SHIP转染K562细胞;转染细胞与IL-3共培养,Western blot法检测K562细胞Akt磷酸化;观察转染野生型SHIP基因对K562细胞增殖的影响;末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺失末端标记(TUNEL)法检测细胞凋亡。【结果】重组慢病毒载体pReceiver-Lv31-FIV和pReceiver-Lv31-SHIP转染K562细胞,GFP阳性率为74.6%。野生型SHIP基因阻断了IL-3对K562细胞的增殖作用,对照组(K562/FIV)细胞增殖抑制率(3.26%)明显低于转染SHIP基因组细胞增殖抑制率(26.42%,P<0.05);集落形成实验显示SHIP能显著抑制K562细胞集落形成能力[IL-3作用组K562/SHIP细胞形成集落为60.3±6.6,明显低于IL-3诱导的K562/FIV组(91.7±4.2)](P<0.01)。细胞形态观察发现凋亡增加,Western blot检测发现转染SHIP基因组前凋亡酶pro-caspase-3降解增加,TUNEL法证实SHIP蛋白促进细胞凋亡。IL-3作用不同时间段(3h,6h,12h),转染野生型SHIP组细胞增殖明显减弱,且Akt磷酸化水平均低于对照组(P<0.05)。【结论】SHIP基因负调控生长因子(IL-3)介导的K562细胞增殖及其蛋白激酶活化。 展开更多
关键词 基因 肌醇5’磷酸酶 慢病毒载体 细胞增殖 磷酸化蛋白激酶B 生长因子
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重组hβc基因的慢病毒颗粒的包装及其在NB4细胞过表达研究
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作者 杨荣辉 吴勇 +3 位作者 字友梅 李先芳 廖晓莹 陈元仲 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2011年第3期706-710,共5页
本研究旨在通过慢病毒介导的基因转移方法,使NB4细胞稳定过表达hβc基因,观察过表达hβc基因的NB4细胞在IL-3或GM-CSF作用下分化行为的改变,探讨hβc基因与NB4细胞分化之间的关系。以本实验室前期构建的携带hβc基因ORF的克隆质粒为模板... 本研究旨在通过慢病毒介导的基因转移方法,使NB4细胞稳定过表达hβc基因,观察过表达hβc基因的NB4细胞在IL-3或GM-CSF作用下分化行为的改变,探讨hβc基因与NB4细胞分化之间的关系。以本实验室前期构建的携带hβc基因ORF的克隆质粒为模板,用带PmeI和BstBI酶切位点的引物PCR获得目的基因,酶切PCR产物,定向克隆至慢病毒载体pRRLSIN.cPPT.PGK/IRES/GFP.WPRE,构建含hβc基因的慢病毒载体,经酶切及测序鉴定其正确性,将构建好的重组质粒与包装质粒一起共转染293T细胞,收集培养液上清,感染NB4细胞,用Western blot鉴定目的基因在NB4细胞中的表达情况。以转染空载体慢病毒的NB4细胞(简称NB4-blank细胞)为对照,观察过表达hβc基因的NB4细胞(简称NB4-hβc细胞)在IL-3、GM-CSF、全反式维甲酸(ATRA)作用下分化行为的改变。结果表明:含有hβc基因的重组慢病毒载体能高效转染NB4细胞,并使NB4细胞稳定过表达hβc基因。NB4-hβc细胞,在IL-3或GM-CSF作用下CD11b表达水平上调,但上调的幅度均低于ATRA作用下的上调幅度,且未观察到形态学改变。NB4-Blank细胞在IL-3或GM-CSF作用下CD11b表达水平无明显变化。结论 :通过慢病毒介导的基因转移方法,成功地使NB4细胞稳定过表达hβc基因,IL-3或GM-CSF在一定程度上能诱导过表达hβc基因的NB4细胞向中性粒细胞分化,但不能使其完全分化成熟。 展开更多
关键词 hβc基因 慢病毒 NB4细胞 il-3 GM—CSF
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JAK3 mediates c-myc gene expression induced by interleukin-2 被引量:1
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作者 Zhu Jinfang Lu Linrong +3 位作者 Ji Hongbin Zheng Zhongcheng J. Thèze Liu Xinyuan 《Chinese Science Bulletin》 SCIE EI CAS 1998年第4期308-311,共4页
C myc gene expression can be rapidly induced by IL 2 through intracellular signal transduction which is triggered by the interaction between IL 2 and its receptor (IL 2R). JAK3 which associates to the intracellular ... C myc gene expression can be rapidly induced by IL 2 through intracellular signal transduction which is triggered by the interaction between IL 2 and its receptor (IL 2R). JAK3 which associates to the intracellular domain of IL2R γ may play a critical role in this process. To reveal the action of JAK3 in c myc induction, a chimeric receptor gene IL2R α/γ/Δ NJAK3 is constructed which consists of extracellular domain derived from IL 2R α subunit (IL2R α), the transmembrane sequence derived from IL2R γ and the cytoplasmic domain derived from the catalytic domain of JAK3 (Δ NJAK3), and then transfected this chimeric gene into mouse fibroblast cell line L929 β which had been transfected with IL2R β gene and stably expressed IL2R β in high level. In the transfectants coexpressing IL2R β and α/γ/Δ NJAK3, the stimulation of IL2 could intensively induce c myc gene expression. Because the whole cytoplasmic domain of IL2R γ which could recruit signaling molecules was replaced by JAK3 and the c myc could be still induced by IL2 in this situation, the results here gave the direct evidence demonstrating that JAK3 plays an important role in c myc gene expression induced by IL2. 展开更多
关键词 INTERLEUKIN 2(IL 2) JAK3(Janus KINASE 3) c MYC gene signal transduction.
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