miR-519b-3p调控IL-6/STAT3通路对宫颈癌细胞凋亡、迁移、侵袭的影响

目的探讨miR-519b-3p调控IL-6/信号转导和转录激活因子3(STAT3)通路对宫颈癌细胞(SiHa)凋亡、迁移、侵袭的影响。方法qRT-PCR检测miR-519b-3p在宫颈癌组织中的表达。SiHa细胞分为miR-NC组、miR-519b-3p组、miR-NC+RhIL-6组、miR-519b-3p+RhIL-6组。流式细胞术评估SiHa细胞凋亡率,Transwell实验检测细胞迁移和侵袭情况。Western blotting检测B细胞淋巴瘤-2基因(Bcl-2)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-cadherin、Bcl相关x蛋白(Bax)、STAT3和p-STAT3蛋白水平。结果与癌旁组织比较,宫颈癌组织miR-519b-3p表达下调(P<0.05)。SiHa细胞凋亡率、Bax和E-cadherin蛋白水平miR-519b-3p组高于miR-NC组,miR-NC+RhIL-6组低于miR-NC组,miR-519b-3p+RhIL-6组低于miR-519b-3p组(P<0.05)。SiHa细胞迁移数、侵袭数、Bcl-2、N-cadherin、p-STAT3蛋白水平miR-519b-3p组低于miR-NC组,miR-NC+RhIL-6组高于miR-NC组,miR-519b-3p+RhIL-6组高于miR-519b-3p组(P<0.05)。结论miR-519b-3p通过抑制IL-6/STAT3通路来抑制宫颈癌细胞迁移和侵袭,并增加细胞凋亡。

颠倒散对玫瑰痤疮小鼠炎症反应及IL-6/STAT3/NF-κB通路的影响

目的探讨颠倒散(DDS)对玫瑰痤疮小鼠炎症反应、白细胞介素-6(IL-6)/信号转导子及转录激活因子3(STAT3)/核转录因子κB(NF-κB)通路的影响。方法皮内注射LL37建立玫瑰痤疮小鼠模型,随机分为模型组、DDS低剂量(DDS-L,0.5 g/mL DDS)、中剂量(DDS-M,1 g/mL DDS)、高剂量(DDS-H,2 g/mL DDS)组及DDS-H+重组IL-6蛋白(rIL-6)组(2 g/mL DDS+0.1 mg/kg rIL-6),并以皮内注射相同部位生理盐水的小鼠为对照组,每天1次,干预7 d;干预结束后,对小鼠注射部位皮肤红斑进行评分及面积测定;收集皮损组织,ELISA检测IL-6、干扰素-γ(IFN-γ)及肿瘤坏死因子-α(TNF-α),HE染色观察皮损组织病理学变化,甲苯胺蓝检测肥大细胞浸润,免疫组化检测CD4 T阳性细胞数,Western blot检测IL-6/STAT3/NF-κB通路相关蛋白表达。结果与对照组比较,模型组小鼠注射部位皮肤组织损伤严重,皮肤红斑评分及红斑面积增加,皮损组织中IL-6、IFN-γ及TNF-α水平增高,肥大细胞浸润数、CD4 T阳性细胞数增加,IL-6、STAT3及NF-κB蛋白表达显著增加(P均<0.05);与模型组比较,DDS-L组、DDS-M组、DDS-H组病理损伤不同程度减轻,皮肤红斑评分及红斑面积减小,皮损组织中IL-6、IFN-γ及TNF-α水平降低,肥大细胞浸润数、CD4 T阳性细胞数减少,IL-6、STAT3及NF-κB蛋白表达显著降低(P均<0.05),不同剂量DDS组间比较,差异有统计学意义(P均<0.05);rIL-6逆转了对DDS-H对玫瑰痤疮小鼠的保护作用。结论DDS减少玫瑰痤疮小鼠的炎症反应,可能与抑制IL-6/STAT3/NF-κB通路有关。

橄榄苦苷调节IL-6/STAT3信号通路对肺癌细胞恶性生物学行为的影响

目的 初步探讨橄榄苦苷(Ole)调节白细胞介素-6(IL-6)/信号转导与转录激活子3(STAT3)信号通路对肺癌细胞恶性生物学行为的影响。方法 MTT法检测细胞增殖抑制率,筛选Ole最佳干预浓度;将A549细胞分为对照组、Ole低、中、高剂量组、rIL-6组(Ole高剂量+IL-6/STAT3通路激活剂)。A549细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡依次用EdU染色、Transwell、流式细胞术检测;增殖细胞核抗原(PCNA)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、切割型半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-3(Cleaved Caspase-3)及IL-6/STAT3信号通路蛋白表达用Western Blot法检测;构建肺癌移植瘤模型,测定移植瘤的体积和质量,免疫组化检测移植瘤中Ki-67、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)蛋白表达,TUNEL染色检测肿瘤组织细胞凋亡。结果 与对照组比较,Ole低、中、高剂量组EdU阳性细胞率、迁移与侵袭细胞数、PCNA、MMP-2、IL-6、p-STAT3/STAT3表达显著降低,细胞凋亡率、Cleaved Caspase-3表达显著升高(P<0.05);IL-6/STAT3通路激活剂rIL-6减弱了Ole对A549恶性生物学行为抑制作用(P<0.05);体内实验表明,Ole显著降低移植瘤质量、体积及Ki-67、MMP-9、IL-6、p-STAT3/STAT3蛋白表达,升高肿瘤细胞凋亡率(P<0.05)。结论 Ole在体内体外可能通过抑制IL-6/STAT3信号通路,进而抑制A549细胞的恶性生物学行为。

基于IL-6/JAK2/STAT3信号轴研究阳和平喘颗粒调控哮喘大鼠气道重塑作用机制

目的:研究阳和平喘颗粒对哮喘大鼠气道重塑及白细胞介素-6(IL-6)/Janus蛋白酪氨酸激酶2(JAK2)/信号转导和转录活化因子3(STAT3)信号轴在其中的作用机制。方法:选取健康雄性SD大鼠42只,随机数字法分为正常对照组7只与造模组35只,造模组采用卵清蛋白(OVA)联合氢氧化铝腹腔注射2周的方式进行致敏,正常对照组采用等量的生理盐水;2周后将造模组随机分为模型组、阳和平喘高、中、低剂量组和地塞米松组,每组7只;后4周采用OVA雾化+灌胃的方式进行激发和治疗,阳和平喘高中低组每日分别予以15.48、7.74、3.87 g/kg阳和平喘颗粒灌胃,地塞米松组予以0.0625 mg/kg地塞米松进行灌胃,其余组灌胃等量生理盐水。HE、PAS、Masson染色观察大鼠肺组织病理学变化;ELISA检测大鼠血清中IL-6、IL-23、IL-17A水平;Western blot检测肺组织中JAK-2、P-JAK2、STAT3、P-STAT3蛋白表达量;qRT-PCR检测大鼠肺组织中IL-6、JAK2、STAT3的mRNA水平。结果:与正常对照组比较,模型组大鼠肺组织有大量炎性细胞浸润,杯状细胞增生、上皮下胶原纤维沉积、气道上皮增厚较为明显;血清中IL-6、IL-23、IL-17A水平显著升高(P<0.01),肺组织JAK-2、P-JAK2、STAT3、P-STAT3的蛋白表达量和IL-6、JAK2、STAT3的mRNA表达水平显著升高(P<0.01);与模型组比较,各给药组炎性细胞浸润、杯状细胞增生、上皮下胶原纤维沉积、气道上皮增厚程度明显减轻,血清中IL-6、IL-23、IL-17A水平显著降低(P<0.01),肺组织JAK-2、P-JAK2、STAT3、P-STAT3的蛋白表达量和IL-6、JAK2、STAT3的mRNA水平显著降低(P<0.01)。结论:阳和平喘颗粒可明显缓解哮喘大鼠气道重塑,其机制可能是通过抑制IL-6/JAK2/STAT3信号轴发挥作用。

大黄蛰虫丸调节IL-1β/NF-κB/NLRP3信号通路对动脉粥样硬化大鼠主动脉炎性损伤的影响

目的 探讨大黄蛰虫丸调节IL-1β/NF-κB/NLRP3信号通路对动脉粥样硬化(AS)大鼠主动脉炎性损伤的影响。方法 将40只大鼠分为正常对照组(NS)、模型组、地奥心血康干预组(阳性组)及大黄蛰虫丸干预组(大黄蛰虫丸组),每组各10只。除正常组外,余下3组小鼠均构建AS模型。应用油红染色对主动脉病理切片情况进行观察,采用EILSA法检测血清脂质水平[甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)]、血清炎症指标(IL-6、IL-1β、TNF-α水平);应用流式细胞术对外周血Th17/Treg细胞水平进行检测,并通过RT-qPCR法和Western blot分别检测IL-1β/NF-κB/NLRP3信号通路mRNA和蛋白表达水平,并计算AI指数。结果 除NC组大鼠以外,其他各组大鼠动脉组织中均出现内膜增厚、斑块沉积和不连续、大量炎症细胞浸润等现象;其中模型组动脉组织损伤现象最为显著,阳性组和大黄蛰虫丸组较模型组明显改善,动脉组织结构情况与NC组相近。模型组血清TC[(9.82±1.46)mmol/L]、TG[(9.82±1.46)mmol/L]、LDL-C[(2.93±0.22)mmol/L]、IL-6[(97.65±9.11)ng/L]、TNF-α[(93.21±11.17)ng/L]水平及外周血Th17[(3.56±0.34)%]、Treg细胞[(4.41±0.38)%]水平高于NC组[分别为(3.71±0.57)mmol/L、(6.47±0.92)mmol/L、(0.94±0.15)mmol/L、(16.52±2.76)ng/L、(5.45±0.84)ng/L、(1.83±0.16)%、(7.72±0.73)%](均P<0.05),HDL-C水平[(2.92±0.31)mmol/L]低于NC组[(0.95±0.08)mmol/L](P<0.05);与模型组相比,大黄蜇虫丸组和阳性组血清TC[分别为(3.92±0.72)mmol/L、(3.71±0.65)mmol/L]、TG[分别为(6.71±0.83)mmol/L、(6.83±0.72)mmol/L]、LDL-C[分别为(1.15±0.11)mmol/L、(1.11±0.13)mmol/L]、IL-6[分别为(19.83±2.55)ng/L、(18.51±3.72)ng/L]、TNF-α[分别为(17.08±1.72)ng/L、(15.92±1.56)ng/L]水平及外周血Th17[分别为(2.11±0.25)%、(2.06±0.22)%]、Treg细胞[分别为(7.45±0.76)%、(7.31±0.72)%]水平偏低,HDL-C偏高[分别为(2.18±0.72)mmol/L、(2.23±0.61)mmol/L],趋近于NC组(均P<0.05)。与NC组AI指数(0.35±0.08)比较,模型组、阳性组和大黄蛰虫丸组(分别为9.71±2.04、1.21±0.15、0.83±0.17)均明显升高(均P<0.05),其中阳性组和大黄蛰虫丸组AI指数低于模型组(均P<0.05)。模型组大鼠的IL-6、TNF-α水平和外周血IL-1β、NF-κB、NLRP3 mRNA和信号通路蛋白表达水平均较NC组、阳性组和大黄蛰虫组明显偏高(均P<0.05)。结论 大黄蛰虫丸对动脉粥样硬化大鼠主动脉的炎性损伤可能具有明显的改善作用,可能是通过抑制IL-1β/NF-κB/NLRP3信号通路来实现治疗效果。

复方葛根汤调控IL-6/STAT3和铁死亡通路抑制在体结肠癌发展

目的 探究复方葛根汤在体抗结肠癌的分子机制。方法 建立HCT116细胞荷瘤小鼠模型,每日以1.0 g·kg^(-1)的剂量灌胃给予复方葛根汤或等体积生理盐水,每3日测量一次体重和瘤体大小,连续给药23 d;Western blot检测铁死亡通路、IL-6通路和细胞迁移相关蛋白。结果 与对照组相比,复方葛根汤显著抑制HCT116细胞衍生瘤体增长,显著上调铁死亡相关蛋白ACSL4、PTGS2,而明显下调SLC7A11、GPX4,还显著下调IL-6、p-STAT3/STAT3比及其下游蛋白MMP2、TWIST和MMP7水平。结论 复方葛根汤能显著抑制体内结肠癌发展,其机制可能为通过抑制IL-6/STAT3和诱导铁死亡通路。

补肾化瘀方对PCOS患者血清半乳糖凝集素-3、IL-6及CRP水平的影响

目的 探讨补肾化瘀方治疗肾虚血瘀型多囊卵巢综合征(PCOS)患者的临床疗效及可能的作用机制。方法 将2020年9月至2021年9月期间,首次就诊于浙江省中西医结合医院生殖医学科门诊的60例肾虚血瘀型PCOS患者按照随机数字表法分为对照组和治疗组,各30例。对照组给予二甲双胍治疗,治疗组给予补肾化瘀方治疗,两组均治疗3个月经周期。观察治疗前后中医证候积分、性激素、糖脂代谢相关指标及半乳糖凝集素-3(Galectin-3)、白介素6(IL-6)、C反应蛋白(CRP)水平的变化情况。结果 治疗前,两组患者性激素、糖代谢相关指标、脂代谢相关指标、炎症因子水平比较,差异无统计学意义(P>0.05)。治疗后,治疗组PCOS患者排卵率较对照组高(76.83%比49.43%,P<0.01)。与治疗前相比,两组患者中医证候积分[(4.18±2.58)分比(12.50±2.17)分,(6.07±2.94)分比(11.97±2.44)分,P<0.01]、空腹血糖[(5.05±0.45)mmol/L比(5.27±0.70)mmol/L,(4.92±0.56)mmol/L比(5.44±0.37)mmol/L,P<0.05]、空腹胰岛素[(9.66±4.54)mU/L比(13.48±4.73)mU/L,(8.44±2.81)mU/L比(12.20±5.19)mU/L,P<0.05]及胰岛素抵抗指数[(2.18±1.05)比(3.17±1.24),(1.89±0.76)比(2.99±1.42),P<0.05]降低。与对照组比较,治疗组中医证候积分降低[(4.18±2.58)分比(6.07±2.94)分,P<0.05],黄体生成素[(10.12±1.72)mIU/mL比(12.54±2.56)mIU/mL,P<0.05]、黄体生成素/卵泡刺激素[(1.65±0.32)比(1.95±0.40),P<0.05]、睾酮[(0.47±0.12)ng/mL比(0.57±0.16)ng/mL,P<0.05]水平降低,三酰甘油[(1.31±0.62)mmol/L比(1.66±0.56)mmol/L,P<0.05]、总胆固醇[(3.91±0.98)mmol/L比(4.40±0.70)mmol/L,P<0.05]、低密度脂蛋白[(2.60±0.61)mmol/L比(3.05±0.79)mmol/L,P<0.05]水平降低,高密度脂蛋白水平升高[(1.41±0.17)mmol/L比(1.31±0.17)mmol/L,P<0.05]。与对照组比较,治疗组Galectin-3 [(8.71±1.67)ng/mL比(9.91±2.23)ng/mL,P<0.05]、IL-6 [(30.24±3.85)pg/mL比(32.62±4.97)pg/mL,P<0.05]、CRP[(2.80±0.91)mg/L比(3.32±0.64)mg/L,P<0.05]水平降低。结论 补肾化瘀方可有效缓解肾虚血瘀型PCOS临床症状,降低血清炎症指标Galectin-3、IL-6及CRP水平,改善糖脂代谢紊乱,调节性激素水平,促进排卵。

雄黄对宫颈癌细胞增殖、凋亡及对HPVE6/IL-6/STAT3通路的影响

目的探讨雄黄对宫颈癌细胞增殖、凋亡的影响,并研究其与E6和IL-6/STAT3通路的关系。方法采用CCK8法检测不同浓度(0、25μg/mL、50μg/mL、75μg/mL、100μg/mL)的雄黄对宫颈癌HeLa、Caski细胞增殖的影响,流式细胞术检测HeLa、Caski细胞凋亡情况。Western blot检测不同浓度的雄黄对两种细胞中STAT3和p-STAT3蛋白表达的影响,qPCR法检测E6、IL-6、PARP、Bcl-xL基因表达水平。结果雄黄对上述2种宫颈癌细胞的增殖有显著的抑制作用,并促进凋亡,且呈现一定的浓度依赖性。Western blot和qPCR结果显示STAT3、p-STAT3、E6、IL-6、PARP、Bcl-xL表达均下调(P<0.05),并呈一定的浓度依赖性。结论雄黄可以抑制HeLa和Caski细胞的增殖,促进凋亡,且可能与通过E6介导的IL-6/STAT3通路有关。

苦参碱调节IL-6/STAT3信号通路对炎症性肠病大鼠肠黏膜损伤的影响

【目的】观察苦参碱调节白细胞介素6(IL-6)/信号转导子和转录激活子3(STAT3)信号通路对炎症性肠病(IBD)大鼠肠黏膜损伤的影响。【方法】以三硝基苯磺酸(TNBS)结肠灌注法构建IBD大鼠模型,随机分为模型组,苦参碱低、高剂量组,苦参碱高剂量+colivelin(STAT3激活剂)组,每组10只;再选10只大鼠结肠灌注等体积生理盐水作为正常组。经苦参碱和colivelin处理后,检测各组大鼠体质量和疾病活动指数(DAI),采用苏木素-伊红(HE)染色法检测大鼠结肠黏膜组织病理学变化,透射电镜观察大鼠结肠黏膜组织超微结构变化,采用酶联免疫吸附分析(ELISA)和比色法分别检测大鼠血清和结肠黏膜组织白细胞介素6(IL-6)、C-反应蛋白(CRP),超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)水平,采用蛋白免疫印迹(Western Blot)法检测大鼠结肠黏膜组织IL-6/STAT3通路相关蛋白表达。【结果】与正常组比较,模型组大鼠结肠黏膜组织发生严重病理损伤且其超微结构受损明显,DAI,结肠黏膜组织病理评分,血清和结肠黏膜组织CRP、IL-6、MDA水平,结肠黏膜组织IL-6蛋白表达及p-STAT3/STAT3比值显著升高(P<0.05),体质量、血清和结肠黏膜组织SOD水平显著降低(P<0.05);与模型组比较,苦参碱低、高剂量组大鼠结肠黏膜组织病理损伤及其超微结构受损均减轻,DAI,结肠黏膜组织病理评分,血清和结肠黏膜组织CRP、IL-6、MDA水平,结肠黏膜组织IL-6蛋白表达及p-STAT3/STAT3比值均降低(P<0.05),体质量、血清和结肠黏膜组织SOD水平均升高(P<0.05),且呈剂量依赖性;与苦参碱高剂量组比较,苦参碱高剂量+colivelin组大鼠结肠黏膜组织病理损伤及其超微结构受损加重,DAI,结肠黏膜组织病理评分,血清和结肠黏膜组织CRP、IL-6、MDA水平,结肠黏膜组织IL-6蛋白表达及p-STAT3/STAT3比值升高(P<0.05),体质量、血清和结肠黏膜组织SOD水平降低(P<0.05)。【结论】苦参碱可通过阻止IL-6/STAT3信号通路激活降低炎症及氧化应激水平,进而减轻IBD大鼠肠黏膜损伤。

基于IL-6/STAT3和IL-2/STAT5信号通路探讨伏九贴敷药物调控Th17/Treg免疫平衡的抗哮喘作用机制

目的考察伏九贴敷药物(白芥子、甘遂、延胡索、细辛组成)通过IL-6/信号转导器和转录激活因子3(STAT3)、IL-2/信号转导器和转录激活因子5(STAT5)信号通路对哮喘大鼠CD4+T辅助细胞17(Th17)/CD4+CD25+调节性T细胞(Treg)平衡的调节作用,揭示其抗哮喘的作用机制。方法采用卵白蛋白(OVA)和氢氧化铝混合液致敏激发造模,然后于大鼠大椎穴、肺俞穴和肾俞穴敷上伏九贴敷药物,每次贴敷4 h,隔日1次,共给药7次。采用免疫组化检测肺组织Th17特异细胞因子IL-17、Treg转录因子Foxp3的阳性表达;流式细胞术检测外周血中Th17、Treg细胞比例;免疫蛋白印迹法检测肺组织IL-6/STAT3和IL-2/STAT5通路相关蛋白的表达。结果与模型组比较,伏九贴敷组大鼠肺中IL-17的阳性表达量明显减少(P<0.01),Foxp3的阳性表达明显增加(P<0.05);同时IL-6蛋白和STAT3磷酸化蛋白表达水平明显降低(P<0.01),而IL-2蛋白和STAT5磷酸化蛋白表达水平明显升高(P<0.01),但总STAT3和STAT5蛋白表达均没有明显变化(P>0.05)。此外,伏九贴敷组大鼠外周血中Th17细胞比例低于模型组,而Treg细胞比例高于模型组,差异均具有统计学意义(P<0.01)。结论哮喘大鼠存在Th17/Treg免疫失衡,伏九贴敷药物可通过抑制哮喘大鼠IL-6表达,下调磷酸化STAT3的表达,降低产生IL-17的Th17细胞水平;同时增加IL-2表达,介导STAT5磷酸化,升高表达Foxp3的Treg细胞水平,促进Th17/Treg趋于平衡,抑制大鼠哮喘免疫应答,从而发挥抗哮喘效应。

基于IL-6/STAT3信号通路探讨山楂酸对小鼠结肠癌CT26细胞增殖、凋亡的影响

目的从IL-6/STAT3信号通路探讨山楂酸(MA)对小鼠结肠癌CT26细胞增殖、凋亡的影响。方法体外培养CT26细胞,设置空白组、10、20、30、35、40μmoL·L^(-1)MA组。干预24 h后,采用CCK-8法检测山楂酸对细胞活力的影响,采用RT-PCR检测IL-6 mRNA表达水平,采用流式细胞仪检测各组细胞凋亡率,采用Western blotting检测各组细胞中STAT3通路相关蛋白的表达水平。设置空白组、IL-6(20 ng·μL^(-1))刺激组、不同浓度MA与IL-6共刺激组,采用Western blotting检测各组细胞p-STAT3、STAT3蛋白的表达水平。设置空白组、MA组、磷酸酶抑制剂(正钒酸钠)组和MA+正钒酸钠组,采用Western blotting检测各组细胞p-STAT3、STAT3蛋白的表达水平。结果与空白组相比,CCK-8结果显示20、30、35、40、45、50μmoL·L^(-1)浓度的山楂酸均能降低CT26细胞活力(P<0.05),IC50=37.32μmoL·L^(-1);RT-PCR结果显示30、35、40μmoL·L^(-1)给药组细胞中IL-6 mRNA水平下降(P<0.05);流式细胞术结果显示30、35、40μmoL·L^(-1)给药组细胞凋亡率增加(P<0.05);Western blotting结果显示35、40μmoL·L^(-1)给药组细胞中STAT3通路相关蛋白p-STAT3、Bcl-2蛋白表达水平下降(P<0.05),MA+正钒酸钠组能恢复MA单独给药组中被降低的p-STAT3蛋白水平(P<0.05)。结论MA可能通过降低IL-6的表达水平,抑制STAT3的磷酸化,从而降低抗凋亡蛋白Bcl-2的表达,促进肿瘤细胞凋亡,抑制其增殖。

IL-6/JAK2/STAT3通路中葛花解酲汤对脾虚湿热型溃疡性结肠炎“炎-癌转化”的预防作用

目的:探讨葛花解酲汤对脾虚湿热型溃疡性结肠炎“炎-癌转化”(UC-UCAC)小鼠结肠组织IL-6/JAK2/STAT3信号通路的影响。方法:80只SPF级C57BL/6雄性小鼠随机选出10只作为空白组,其余70只为造模组。造模组在建立脾虚湿热模型后随机分为模型组(第1、2、3周期)、葛花解酲汤高、中、低剂量组、美沙拉嗪组,10只/组,以氧化偶氮甲烷(AOM)/葡聚糖硫酸钠(DSS)继续建立UC-UCAC转化模型。各组给予相应药物治疗4周。观察小鼠一般状态;统计小鼠疾病活动指数(DAI)评分;HE染色观察小鼠结肠黏膜组织病理;Western blot、IHC和RT-q PCR检测小鼠结肠组织EGFR、IL-6、JAK2、STAT3、 p-STAT3蛋白和基因表达。结果:与空白组相比,模型组(第3周期)小鼠一般状态较差,结肠黏膜组织出现癌变,DAI评分、各目标蛋白及基因表达显著升高(P<0.01);与模型组(第3周期)相比,各治疗组小鼠一般状态有所恢复,结肠组织病理不同程度改善,除葛花解酲汤低剂量组外,其他各治疗组各目标蛋白及基因表达显著下降(P<0.01)。结论:葛花解酲汤可能通过抑制IL-6/JAK2/STAT3信号通路激活破坏肿瘤炎症微环境,修复受损结肠黏膜组织,延缓UC-UCAC进程,预防UCAC。

基于IL-6/JAK2/STAT3信号通路探讨电针对脑卒中肢体痉挛大鼠的影响

目的观察电针对脑卒中肢体痉挛(PSS)大鼠中枢炎症反应及神经递质释放的影响,基于IL-6/JAK2/STAT3信号通路探讨其治疗PSS的作用机制。方法30只雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组和电针组,每组10只。采用线栓+内囊注射N-甲基-D-天冬氨酸受体法制备PSS大鼠模型,电针组电针患侧“曲池”“阳陵泉”,30 min/d,连续7 d。假手术组、模型组仅固定不干预。治疗前后进行Zea Longa神经功能评分和改良Ashworth肌张力评分,HE染色观察缺血侧大脑皮质病理变化,ELISA检测缺血侧皮质白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、γ-氨基丁酸(GABA)含量,生化试剂盒检测缺血侧皮质谷氨酸(Glu)含量,Western blot检测缺血侧皮质酪氨酸激酶2(JAK2)、p-JAK2、信号转导和转录激活因子3(STAT3)、p-STAT3蛋白表达,RT-PCR检测缺血侧皮质JAK2、STAT3 mRNA表达。结果与假手术组比较,模型组大鼠神经功能评分、肌张力评分明显升高(P<0.01),大脑皮质神经元紊乱、细胞核固缩,IL-6、TNF-α、Glu含量明显增加,GABA含量明显减少(P<0.01),p-JAK2、p-STAT3蛋白及JAK2、STAT3 mRNA表达均明显升高(P<0.01,P<0.05);与模型组比较,电针组大鼠神经功能评分、肌张力评分明显降低(P<0.05),大脑皮质神经元损伤程度减轻,细胞轮廓清晰,IL-6、TNF-α、Glu含量明显减少,GABA含量明显增加(P<0.05,P<0.01),p-JAK2、p-STAT3蛋白及JAK2、STAT3 mRNA表达均明显降低(P<0.01)。结论电针可能通过抑制IL-6/JAK2/STAT3信号通路减轻PSS模型大鼠中枢炎症反应,改善肢体痉挛状态。

过表达膜定位IL-3的293T细胞外泌体的纯化及体外功能验证

目的体外验证过表达膜定位IL-3的293T细胞外泌体的功能,为在阿尔茨海默病模型动物的体内功能验证奠定基础。方法利用本课题组的专利结构,构建能定位于外泌体膜上的重组IL-3慢病毒载体,包装病毒感染293T细胞,筛选稳定表达细胞株。用流式细胞测量术和免疫荧光技术对IL-3的膜定位进行验证;超滤离心纯化IL-3外泌体,透射电镜观察外泌体形态;纳米流式测量术检测外泌体粒径分布及浓度;Western blot检测IL-3及外泌体相关标志蛋白质表达;免疫荧光技术检测其对小胶质细胞系BV-2吞噬Aβ淀粉样蛋白能力的影响。结果经过载体构建、病毒感染、嘌呤霉素筛选和验证,得到稳定过表达膜定位IL-3的293T细胞株;收集纯化外泌体,在透射电镜下可见直径50~100 nm的双层膜囊泡结构;免疫印迹结果显示CD63、ALIX、TSG101等多种外泌体标志蛋白质检测阳性,且与对照相比富含IL-3,提示IL-3外泌体纯化成功;免疫荧光技术检测结果显示IL-3外泌体能在体外促进BV-2细胞对Aβ淀粉样蛋白的吞噬作用。结论过表达膜定位IL-3的基因修饰293T细胞外泌体在体外兼具IL-3和外泌体的作用,能够促进小胶质细胞的吞噬作用,为阿尔茨海默病的临床治疗提供新的思路。

STIL基因通过调控IL-6/STAT3通路影响宫颈癌细胞增殖和凋亡

目的:探讨STIL基因对宫颈癌增殖和凋亡的影响并研究其机制。方法:RT-qPCR和Western blot检测STIL mRNA和蛋白在宫颈癌组织、癌旁组织、宫颈癌细胞系HeLa、SiHa、caski、人正常宫颈上皮细胞HUCEC中的表达。将HeLa细胞分为对照(NC)组、si-NC组、si-STIL组、si-STIL+IL-6组。CCK-8和平板克隆实验检测各组细胞增殖和克隆能力,流式细胞术检测各组细胞凋亡率。Western blot检测各组细胞IL-6、IL-6R和p-STAT3蛋白表达。将稳定转染sh-STIL的HeLa细胞注射到裸鼠背部,研究抑制STIL表达对肿瘤形成的影响。结果:宫颈癌组织中STIL mRNA和蛋白表达显著高于癌旁组织(P<0.05)。HeLa、SiHa、caski细胞中STIL mRNA和蛋白表达显著高于HUCEC细胞(P<0.05)。与si-NC组比较,si-STIL组细胞吸光度、克隆数及IL-6、IL-6R和p-STAT3蛋白水平显著降低(P<0.05),凋亡率显著升高(P<0.05)。与si-STIL组比较,si-STIL+IL-6组细胞吸光度、克隆数及IL-6、IL-6R和p-STAT3蛋白水平显著升高(P<0.05),凋亡率显著降低(P<0.05)。抑制STIL表达显著抑制体内肿瘤生长(P<0.05)。结论:STIL基因在宫颈癌中表达上调,抑制STIL表达通过抑制IL-6/STAT3通路抑制宫颈癌细胞增殖并诱导凋亡。

白术内酯Ⅰ调节IL-6/STAT3信号通路对子宫内膜癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的探讨白术内酯Ⅰ调节白细胞介素-6(IL-6)/信号传导及转录激活蛋白3(STAT3)信号通路对子宫内膜癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法用不同浓度白术内酯Ⅰ(0、25、50、75、100、150μmol/L)处理子宫内膜RL-952细胞,MTT法检测细胞存活率;将RL-952细胞分为对照组(无处理)、白术内酯Ⅰ(50μmol/L)组、IL-6组(10 ng/mL)、白术内酯Ⅰ(50μmol/L)+IL-6组(10 ng/mL),MTT法、Edu染色检测细胞增殖;qRT-PCR法检测细胞中IL-6、STAT3表达水平;Transwell实验检测细胞迁移和侵袭;采用流式细胞术检测细胞凋亡率;western blot检测MMP-2、Ki-67、IL-6、p-STAT3、STAT3蛋白表达水平。结果与0μmol/L比较,25μmol/L、50μmol/L、75μmol/L、100μmol/L、150μmol/L白术内酯Ⅰ干预的RL-952细胞存活率显著下降,呈浓度依赖性(P<0.05);与对照组比较,白术内酯Ⅰ组RL-952细胞活力、增殖率、迁移和侵袭个数、IL-6和STAT3 mRNA表达、MMP-2、Ki-67、IL-6、p-STAT3/STAT3蛋白表达水平显著性降低(P<0.05),细胞凋亡率显著性升高(P<0.05),IL-6组RL-952细胞活力、增殖率、迁移和侵袭个数、IL-6和STAT3 mRNA表达、MMP-2、Ki-67、IL-6、p-STAT3/STAT3蛋白表达水平显著性升高(P<0.05),细胞凋亡率显著性降低(P<0.05);与白术内酯Ⅰ组比较,白术内酯Ⅰ+IL-6组RL-952细胞活力、增殖率、迁移和侵袭个数、IL-6和STAT3 mRNA表达、MMP-2、Ki-67、IL-6、p-STAT3/STAT3蛋白表达水平显著性升高(P<0.05),细胞凋亡率显著性降低(P<0.05);与IL-6组比较,白术内酯Ⅰ+IL-6组RL-952细胞活力、增殖率、迁移和侵袭个数、IL-6和STAT3 mRNA表达、MMP-2、Ki-67、IL-6、p-STAT3/STAT3蛋白表达水平显著性降低(P<0.05),细胞凋亡率显著性升高(P<0.05)。结论白术内酯Ⅰ可能通过抑制IL-6/STAT3信号通路来抑制子宫内膜癌RL-952细胞增殖、迁移和侵袭。

基于Gal-3/NLRP3/IL-1β信号通路探讨异荭草苷治疗溃疡性结肠炎的作用机制

目的探讨异荭草苷对葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导的溃疡性结肠炎(UC)小鼠的治疗效果及其作用机制。方法将48只C57BL/6J小鼠随机分为正常组、模型组、美沙拉嗪组(600 mg·kg^(-1))、异荭草苷低剂量组(25 mg·kg^(-1))、异荭草苷高剂量组(50 mg·kg^(-1))及异荭草苷对照组(50 mg·kg^(-1)),每组8只。小鼠自由饮用2%DSS溶液复制UC模型,实验进行3周后,各给药组给予相应药物灌胃治疗4周。给药结束后,称取体质量,摘眼球取血,剖取结肠组织。采用苏木素-伊红(HE)、阿利新蓝-过碘酸-雪夫染色(AB-PAS)法观察小鼠结肠组织病理形态变化;透射电子显微镜观察小鼠结肠组织超微结构;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测小鼠血清白细胞介素(IL)-6、IL-8、IL-10、IL-1β、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、脂多糖(LPS)和髓过氧化物酶(MPO)水平;免疫组化法检测小鼠结肠组织中半乳糖凝集素(Gal-3)蛋白表达;免疫荧光法检测黏蛋白(MUC2)表达及NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)和凋亡相关斑点样蛋白(ASC)共定位情况;免疫印迹(Western Blot)法检测小鼠结肠组织中Gal-3、NLRP3、ASC、半胱氨酸蛋白酶1(Caspase-1)、IL-1β、IL-18、闭合蛋白(Occludin)、闭锁小带蛋白1(ZO-1)蛋白表达。结果与正常组比较,模型组小鼠体质量明显下降,结肠长度明显缩短,肠质量指数明显增加(P<0.01);小鼠肠黏膜结构紊乱,微绒毛稀疏,隐窝结构见大量炎性细胞浸润,线粒体肿胀明显,杯状细胞明显减少;血清IL-6、IL-8、IL-1β、TNF-α、LPS和MPO水平明显升高,IL-10水平明显降低(P<0.01);结肠组织MUC2蛋白阳性表达减少及NLRP3和ASC共定位增强;结肠组织中Gal-3、NLRP3、ASC、Caspase-1、IL-1β和IL-18蛋白表达明显增加,Occludin和ZO-1蛋白表达明显降低(P<0.01)。与模型组比较,异荭草苷低、高剂量组小鼠体质量明显上升,结肠长度明显增长,肠质量指数明显降低(P<0.05,P<0.01);肠黏膜、微绒毛及线粒体结构明显恢复,炎性浸润减轻,杯状细胞明显增加;血清IL-6、IL-8、IL-1β、TNF-α、LPS和MPO水平明显降低,IL-10水平明显升高(P<0.05,P<0.01);结肠组织MUC2蛋白阳性表达增加,NLRP3和ASC共定位减弱;结肠组织中Gal-3、NLRP3、ASC、Caspase-1、IL-1β和IL-18蛋白表达明显降低,Occludin和ZO-1蛋白表达明显增加(P<0.05,P<0.01)。结论异荭草苷对DSS诱导的UC小鼠具有良好的治疗效果,其机制可能与抑制Gal-3/NLRP3/IL-1β信号通路,保护肠黏膜屏障有关。

桑色素抑制NLRP3/Caspase-1/IL-1β信号通路对慢性阻塞性肺疾病大鼠肺泡上皮细胞焦亡的影响

目的:探讨桑色素(MH)抑制核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)/半胱氨酸天冬氨酸酶-1(Caspase-1)/IL-1β信号通路对慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠肺泡上皮细胞焦亡的作用机制。方法:采用烟熏法建立COPD模型大鼠,将其随机分模型组(COPD组)、MH低、中、高剂量组(MH-L、MH-M、MH-H组)(50、100、200 mg/kg)、阳性对照组(地塞米松组,DXMS,0.09 mg/kg),另取10只健康大鼠作为正常对照组(NC组)。检测大鼠肺功能指标[潮气量(TV)、肺活量(FVC)和呼气峰流速(PEF)];HE染色观察肺组织病理学变化;免疫荧光双染观察肺泡上皮细胞焦亡情况;ELISA检测肺泡灌洗液(BALF)中炎症因子水平;RT-qPCR检测NLRP3、Caspase-1、消皮素D(GSDMD)、IL-1βmRNA水平;Western blot检测肺组织SP-C、NLRP3、C-Caspase-1、GSDMD、GSDMD-N、IL-1β蛋白表达。结果:与COPD组比较,DXMS组、MH各组肺组织管腔狭窄、黏液分泌和支气管黏膜上皮细胞坏死等病理学变化明显改善,肺功能指标(TV、FVC、PEF)显著上升(P<0.05),且MH-L、MH-M、MH-H组依次上升(P<0.05);TNF-α、IL-6、IL-8水平、NLRP3及C-Caspase-1免疫荧光表达、NLRP3、Caspase-1、GSDMD、IL-1βmRNA水平、NLRP3、C-Caspase-1、GSDMD、GSDMD-N、IL-1β蛋白水平显著下降,SP-C蛋白表达逐渐上升(P<0.05)。结论:MH可抑制NLRP3/Caspase-1/IL-1β信号通路及其介导的炎症因子释放和细胞焦亡,减轻COPD大鼠的肺组织病变。

射干麻黄汤对支气管哮喘大鼠巨噬细胞活化及IL-21/STAT3通路调节作用研究

目的探讨射干麻黄汤对支气管哮喘大鼠巨噬细胞活化及白细胞介素(IL)-21/信号转导和转录活化因子3(STAT3)通路调节作用。方法取雄性SD大鼠36只,随机选择6只作为正常组,其余大鼠采用卵清白蛋白致敏法建立支气管哮喘模型。将造模成功大鼠随机分为哮喘组、射干麻黄汤低剂量组、射干麻黄汤中剂量组、射干麻黄汤高剂量组及地塞米松组,每组6只。射干麻黄汤低、中、高剂量组大鼠分别给予1 g/kg、2 g/kg、4 g/kg(以生药含量计)射干麻黄汤灌胃,地塞米松组大鼠给予1 mg/kg地塞米松灌胃,正常组及哮喘组大鼠灌胃等量蒸馏水,均1次/d,连续灌胃20 d。末次灌胃结束后,使用肺功能检测系统测定大鼠肺活量、肺动态顺应性及呼气峰值流速,ELISA法测定肺泡灌洗液中干扰素-γ(IFN-γ)、IL-2、IL-4、IL-13水平,计算肺泡灌洗液中嗜酸性粒细胞及中性粒细胞占比,HE染色法观察肺组织病理学形态,免疫组化法观察肺组织中F4/80蛋白阳性表达情况,Western blot法测定肺组织中IL-21、p-STAT3、STAT3蛋白表达情况。结果与正常组比较,哮喘组大鼠肺活量、肺动态顺应性、呼气峰值流速及肺泡灌洗液中IFN-γ、IL-2水平均明显降低(P均<0.05),肺泡灌洗液中嗜酸性粒细胞占比、中性粒细胞占比、IL-4水平、IL-13水平及肺组织中F4/80蛋白阳性表达相对积分光密度和IL-21蛋白相对表达量、p-STAT3/STAT3比值均明显升高(P均<0.05),肺组织炎症损伤。与哮喘组比较,射干麻黄汤各组及地塞米松组大鼠肺活量、肺动态顺应性、呼气峰值流速及肺泡灌洗液中IFN-γ、IL-2水平均明显升高(P均<0.05),肺泡灌洗液中嗜酸性粒细胞占比、中性粒细胞占比、IL-4水平、IL-13水平及肺组织中F4/80蛋白阳性表达相对积分光密度和IL-21蛋白相对表达量、p-STAT3/STAT3比值均明显降低(P均<0.05),肺组织病理改变明显恢复,且各指标随射干麻黄汤剂量的增加改善更明显。结论射干麻黄汤能够显著改善支气管哮喘大鼠肺功能,缓解气道炎症反应,减轻肺组织病变,其机制可能与抑制肺组织巨噬细胞活化、调节IL-21/STAT3通路有关。

Mechanism of Yanghe Pingchaun granules on airway remodeling in asthmatic rats based on IL-6/JAK2/STAT3 signaling axis

Objective: To investigate the effects of Yanghe Pingchuan Granules on airway remodeling in asthmatic rats, and to explore the mechanism of Interleukin-6/Janus kinase 2/ Signal transducing activator of transcription 3(IL-6/JAK2/STAT3) signal axis. Methods: We separated 42 healthy male SD rats into two groups, a control group (7) and a model group (35).The model group was sensitized with a combination of ovalbumin (OVA) and aluminum hydroxide for 2 weeks, while the control group was given an equal amount of physiological saline.After 2 weeks, the modeling group was randomly divided into Model group, Yanghe Pingchuan Granules high, medium and low dose groups and Dexamethasone group, each group consisted of 7 animals. After 4 weeks, OVA atomization and gavage were used for stimulation and treatment. Yanghe Pingchuan Granules high, middle and low groups were given 15.48, 7.74, 3.87 g∙kg-1 Yanghe Pingchuan Granules daily, dexamethasone group was given 0.0625 mg∙kg-1 dexamethasone daily, and the other groups were given the same amount of normal saline. HE, PAS and Masson staining were used to observe the lung histopathological changes in rats. The levels of interleukin-6, IL-23 and IL-17A were detected by ELISA. The expression levels of JAK-2, P-JAK2, STAT3 and P-STAT3 in lung tissues were detected by Western blot. Real-time quantitative polymerase chain reaction (qRT-PCR) was used to detect the mRNA expression levels of IL-6, JAK2 and STAT3 in rat lung tissue. Results: The lung tissue structure of the model group was severely damaged compared to the control group, accompanied by a great many of inflammatory cell infiltration, goblet cell hyperplasia, subepithelial collagen fiber deposition and airway epithelial thickening were more obvious. The expressions of IL-6, IL- 23 and IL-17A in serum were significantly increased (P<0.01), the protein expression levels of JAK-2, P-JAK2, STAT3 and P-STAT3 and the mRNA expression levels of IL-6, JAK2 and STAT3 in lung tissue were significantly increased (P<0.01);Compared with the model group, inflammatory cell infiltration, goblet cell proliferation, subepithelial collagen fiber deposition and airway epithelial thickening were significantly reduced in each administration group, and the expressions of IL-6, IL-23 and IL-17A in serum were significantly decreased (P< 0.01). The protein expression levels of JAK-2, P-JAK2, STAT3 and P-STAT3 and mRNA expression levels of IL-6, JAK2 and STAT3 in lung tissue were significantly decreased (P<0.01). Conclusion: Yanghe Pingchuan Granules can significantly alleviate airway remodeling in asthmatic rats, and its mechanism may be through inhibiting the IL-6/JAK2/STAT3 signal axis.