青霉素过敏反应与IL-4Rα基因多态性

目的：青霉素类抗生素临床应用十分广泛，但其过敏反应发生率居各类药物之首。青霉素过敏反应的发生，通常伴有血清总IgE或特异性IgE的升高。白细胞介素4（IL-4）是目前已知最强的IgE调节因子，其生物学效应是通过与靶细胞表面的白介素4受体（IL-4R）结合而发挥的。因此，本试验以白介素4受体α链（IL-4Rα）基因为研究对象，重点讨论该基因的部分多态性位点与青霉素过敏反应及血清特异性IgE的关系。方法：采用RAST检测了242例过敏病人和86例正常对照血清中4种药物青霉素G、青霉素V、氨苄西林和阿莫西林（PG、PV、AP、AX）的8种抗原决定簇（BPO—PLL、PVO。PLL、APO-PLL、AXO-PLL、BPA—PLL、PVA—PLL、APA-PLL、AXA-PLL）的特异性IgE抗体：采用PCR-RFLP检测了242例过敏病人和220例正常对照IL-4RαQ576R和IL-4Rα175V多态性位点的基因型。结果：IL-4RαQ576R位点，与正常对照相比，AA基因型频率在过敏病人特别是皮试阳性的过敏病人中显著升高（P〈0．05），在特异性IgE阳性的过敏病人中显著升高（P〈0．05），在主、次要抗原决定簇抗体阳性的过敏病人中均显著升高（P〈0．05），在APO抗体阳性过敏病人中显著升高（p=0．05）。

靶向融合肽IL-4Rα-lytic对原发性渗出性淋巴瘤的抑制作用

目的:探讨靶向融合肽IL-4Rα-lytic对卡波西肉瘤相关疱疹病毒(KSHV)阳性原发性渗出性淋巴瘤(PEL)细胞的体内外杀伤作用及其安全性。方法:应用MTT法检测IL-4Rα-lytic对KSHV阳性PEL细胞BCBL-1和BCP-1的杀伤能力。通过FCM检测IL-4Rα-lytic诱导KSHV阳性PEL细胞凋亡的情况。建立BCBL-1细胞小鼠移植瘤模型,连续3周(3次/周)腹腔注射IL-4Rα-lytic后,通过活体生物发光成像技术评估IL-4Rα-lytic对小鼠体内BCBL-1细胞移植瘤的抑制效果,并通过H-E染色和全血分析法检测其毒副作用。结果:靶向融合肽IL-4Rα-lytic在体外对两种KSHV阳性PEL细胞BCBL-1和BCP-1均有选择性杀伤作用(均P<0.01),并且可以在短时间内发挥杀伤作用(均P<0.01)。靶向融合肽IL-4Rα-lytic可诱导KSHV阳性PEL细胞BCBL-1和BCP-1凋亡(均P<0.05)。靶向融合肽IL-4Rα-lytic显著抑制BCBL-1细胞小鼠移植瘤的生长,与对照组比较差异具有统计学意义(P<0.05),并且无明显的器官毒性(均P>0.05),同时不会造成体质量异常(P>0.05)。结论:靶向融合肽IL-4Rα-lytic在体内外均显著抑制KSHV阳性PEL细胞的生长,且无明显毒副作用,有望为PEL的治疗提供一种新的治疗方案。

重组IL-4R蛋白对SD大鼠过敏性哮喘干预作用的研究

目的探索重组IL-4R蛋白对过敏性哮喘动物模型的干预作用。方法选择6周龄SD大鼠60只,采用安全随机分组法分成哮喘模型组、IL-4R组、布地奈德组和对照组,每组15只。哮喘模型组在腹部选取3处于皮下注射10%鸡卵清白蛋白(OVA)混合液1ml(OVA 100mg、氢氧化铝100mg及灭活的百日咳杆菌5×109个)进行致敏,1周后用上述同样药物再进行致敏,第2次致敏1周后将大鼠分别放入不完全封闭的箱中,用5%OVA与0.9%氯化钠混合溶液,连续10d超声雾化激发30min。IL-4R组和布地奈德组同法造模,但每次雾化激发前30min,IL-4R组腹腔注射重组IL-4R蛋白稀释液(400μg/d)。布地奈德组腹腔注射布地奈德稀释液(400μg/d),对照组用0.9%氯化钠溶液连续10d超声雾化激发30min。取4组大鼠肺组织作HE染色的光镜病理切片,观察肺组织病理变化。建立间接ELISA方法,检测实验中4组大鼠肺泡灌洗液中的IL-4和IFN-γ的含量。结果哮喘模型组大鼠肺组织有大量嗜酸性粒细胞浸润,对照组大鼠肺组织几乎无嗜酸性粒细胞浸润,IL-4R组和布地奈德组大鼠肺组织嗜酸性粒细胞浸润明显少于哮喘模型组。IL-4R组和布地奈德组肺泡灌洗液中IL-4和IFN-γ的含量明显高于哮喘模型组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论研究结果提示IL-4R蛋白对过敏性哮喘有良好的干预作用。

IL-4Rα胞外段的真核表达及鼠源单克隆抗体的制备与鉴定

目的表达IL-4Rα胞外段蛋白(IL-4 receptor α extracellular domain, IL-4Rα ECD),并制备对IL-4及IL-13与IL-4R结合具有阻断能力的抗IL-4Rα鼠源单克隆抗体(单抗)。方法构建含IL-4Rα ECD DNA序列的真核表达质粒,转染Expi293F细胞,对上清中的IL-4Rα ECD进行纯化。采用SDS-PAGE及Western blot对该蛋白进行纯度分析及鉴别;将其免疫小鼠后,筛选相应的鼠源单抗;分别采用SDS-PAGE、Western blot、ELISA、流式细胞法及细胞抑制法对单抗的纯度、特异性、结合活性、阻断活性进行鉴定。结果酶切及测序结果表明,IL-4Rα ECD重组表达质粒构建正确;蛋白成功表达,相对分子质量为43 000~48 000,纯度在95%以上;免疫后小鼠血清效价在107以上;制备的1株鼠源单抗6-G2与IL-4Rα的ELISA半最大效应质量浓度(concentration for 50%of maximal effect, EC50)为10.4 ng/mL;竞争ELISA检测结果显示,6-G2单抗对IL-4与IL-4Rα结合的最大抑制率为27.3%;流式细胞法检测结果显示,6-G2单抗能阻断IL-13与相应受体的结合;细胞增殖抑制法检测结果显示,6-G2单抗几乎能完全抑制细胞的增殖。结论成功表达并纯化了IL-4Rα ECD,制备的抗IL-4Rα鼠源单抗6-G2单抗能同时阻断IL-4及IL-13与IL-4R的结合,为后续开发针对抗IL-4Rα的治疗性抗体药物奠定了基础。

IL-4 rs2243250和IL-4R rs1805010基因多态性和复发性流产的相关性

目的:探讨IL-4和IL-4R基因单核苷酸多态性和复发性流产(RSA)的关系。方法:选取2019年1月至2020年8月甘肃省妇幼保健院收治的150例RSA患者(RSA组)和同期150例女性健康志愿者(对照组),采用SNaPshot SNP分型技术检测外周血中IL-4 rs2243250和IL-4R rs1805010基因多态性,研究组间基因型分布差异,分析IL-4 rs2243250和IL-4R rs1805010基因多态性和RSA易感的相关性。结果:IL-4R rs1805010位点GA基因型和等位基因A分布在RSA和对照组间的差异有统计学意义(P<0.05)。携带有A等位基因的人群RSA发病风险降低(OR=0.71,95%CI=0.51~0.99),携带有AA和GA基因型的人群RSA发病风险低于GG基因型(OR=0.49,95%CI=0.29~0.85)。结论:IL-4R rs1805010位点A等位基因和AA、GA基因型可能是RSA发病的保护因素,但仍有必要进一步开展质量更高、样本量更大的病例对照研究进行验证。

温经活血外用药穴位贴敷联合关节腔内注射玻璃酸钠治疗膝骨关节炎的临床疗效及血清IL-4和s IL-4R的介导作用

目的:探讨温经活血外用药穴位贴敷治疗膝骨关节炎的临床疗效及IL-4和sIL-4R的水平的变化及意义。方法:将2015年3月至2017年8月期间在辽宁中医药大学附属医院纳入的100例患者按随机数字表法分为对照组、观察组各50例,对照组采用膝关节腔内注射玻璃酸钠治疗,观察组在对照组基础上采用温经活血外用药穴位贴敷方法治疗,比较2组治疗前后疗效改善情况、治疗前后Lysholm膝关节评分改善情况、血清生化学指标水平变化评价穴位贴敷治疗的效果。结果:治疗后,观察组治疗有效率、Lysholm膝关节评分、血清中IL-4、sIL-4R水平各项指标改善均优于对照组,2组患者血清IL-4、sIL-4R水平与Lysholm膝关节评分呈负相关。结论:温经活血外用药穴位贴敷能显著改善症状,提高膝骨关节炎的临床疗效与预后。

IL-4R基因rs1805012、rs1801275、rs1805010多态性与哮喘患者大鱼际掌纹特应征的相关性研究

目的：探讨白细胞介素4受体（interleukin-4 receptor,IL-4R）基因多态性与青岛地区汉族成人哮喘患者大鱼际掌纹特应征的相关性。方法：引入计算机识别系统,实现大鱼际掌纹特应征客观量化分级,应用SNaPshot方法对400例哮喘患者和200名正常对照的IL-4R基因的rs1805012、rs1801275和rs1805010共3个多态位点的基因多态性进行检测。结果：哮喘组大鱼际掌纹特应征阳性比例明显高于对照组,差异有统计学意义（χ2=163.459,P〈0.001）。对于rs1805010,假设为Log-additive模型时,掌纹阴性组等位基因A的频率高于掌纹阳性组,差异有统计学意义（OR=0.76,95%CI：0.59~0.98,P〈0.05）。以掌纹分层,仅在大鱼际掌纹阴性分层中,对于rs1805012,相对于TT基因型,对照组CT基因型频率高于哮喘组,差异有统计学意义（OR=0.33,95%CI：0.13~0.81,P〈0.05）。结论：大鱼际掌纹特应征和青岛地区汉族成人哮喘之间具有显著相关性,但IL-4R基因的rs1805012、rs1801275和rs1805010这3个多态位点与大鱼际掌纹特应征阳性没有相关性。

IL-4R基因rs12925861、rs3024613多态性与哮喘患者大鱼际掌纹特应征的相关性研究

目的:探讨白细胞介素4受体(interleukin-4 receptor,IL-4R)基因多态性与青岛地区汉族成人哮喘患者大鱼际掌纹特应征的相关性。方法:采用SNa Pshot方法检测研究对象IL-4R基因的rs12925861和rs3024613两个多态位点的基因型和等位基因频率。结果:rs12925861和rs3024613两个位点单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphisms,SNP)在掌纹阴性组与掌纹阳性组间差异无统计学意义(P>0.05)。结论:IL-4R基因rs12925861和rs3024613多态性与大鱼际掌纹特应征不存在相关性。

IL-4R基因E375A、C406R、Q576R多态性与哈尔滨地区儿童哮喘发生的相关性

目的探讨IL-4R基因E375A、C406R、Q576R位点多态性与哈尔滨地区儿童哮喘发生的相关性。方法采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法,检测91例哮喘患儿和42例正常儿童的IL-4R基因型。结果哮喘组与对照组IL-4R基因1124核苷酸位点A→C突变(肽链E375A氨基酸位点),1902核苷酸位点A→G突变(肽链Q576R氨基酸位点),2位点基因型和基因频率差异无统计学意义(P>0.05);1216核苷酸位点T→C突变(肽链C406R氨基酸位点),3种基因型(CC、CR、RR)差异有统计学意义(P<0.05);变异型R等位基因频率中,哮喘组为22.94%,对照组为6.58%,两者差异有统计学意义(P<0.05),但该位点不符合Hardy-Weinberg平衡。结论IL-4R基因E375A,Q576R位点多态性可能与哈尔滨地区儿童哮喘发生无直接相关性。C406R位点有必要作进一步研究。

IL-4R基因Q576R多态性与哈尔滨地区儿童哮喘的相关性研究

目的探讨IL_4R基因Q576R多态性与哈尔滨地区儿童哮喘发生的相关性。方法提取82例哮喘儿童和59例正常对照组儿童外周血DNA,采用聚合酶链反应—限制性片段长度多态性分析(PCR-RFLP)方法检测基因型,应用SAS软件对结果进行χ2分析。结果哮喘组与对照组3种基因型(QQ、QR、RR)在分布上差异无显著性(P>0.05);变异型R等位基因频率:哮喘组为16.46%,对照组为13.56%,两者差异无显著性(P>0.05)。结论IL_4R基因Q576位点多态性可能与哈尔滨地区儿童哮喘发生无直接相关性。

IL-4及其受体和IL-13基因多态性与儿童哮喘的相关性研究

目的探讨IL-4基因启动子C589T,IL-4R基因E375A、C406R、Q576R和IL-13基因Arg110Gln位点多态性与儿童哮喘发生的相关性。方法采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性分析(PCR-PFLP)方法检测122名哮喘儿童、144名健康儿童各个多态性位点的基因型,采用SPSS 13.0进行统计学分析。结果IL-4R基因E375A、C406R这两个位点的基因型及等位基因频率分布在哮喘组与正常对照组均存在显著性差异(P<0.05),哮喘组E375A位点等位基因A频率显著高于正常对照组;C406R位点的等位基因C频率分布在哮喘组显著高于正常对照组。IL-13基因Arg110Gln位点Gln等位基因携带者(GlnGln+ArgGln)的频率在哮喘组显著高于对照组。结论 IL-4R基因E375A和C406R位点可能与儿童哮喘的发病存在关系,其中,A和C等位基因可能分别是易感等位基因,而IL-13基因Gln携带者可能更易罹患哮喘。

对IL-4两种测活方法的比较及MTT法最适条件确定

目的建立一种稳定、灵敏的方法用于检测 IL - 4生物活性。方法比较人外周血 T淋巴细胞与 CTL L - 2 /IL - 4R细胞系对 rh IL - 4的增殖应答特点及 MTT法用于 rh IL - 4生物活性检测过程中的细胞浓度、细胞培养时间、MTT掺入浓度及时间等条件。结果两者均能对 rh IL - 4呈规律性增殖应答。 IL - 4活性测定时 ,人外周血 T淋巴细胞检测最低限为 8U /ml,CTL L - 2 /IL - 4R细胞系为 0 .73U /ml。确定了 MTT法用于 CTL L - 2 /IL - 4R细胞系检测 rh IL - 4生物活性时的最佳条件方案。结论就重复性和应答敏感性来说 ,CTL L - 2 /IL - 4R较之 T淋巴细胞更为优越 ,该细胞系可用于建立一种较灵敏而稳定的 IL -4测活方法。

IL-4受体阻断对小鼠急性感染肝片吸虫后肝脏单核细胞悬液中细胞因子的影响

本研究旨在探索肝片吸虫感染小鼠急性期肝脏单核细胞悬液中细胞因子表达模式及其原因。试验将小鼠分为4组,分别对感染抗体处置组、感染非抗体处置组、抗体处置非感染组和非抗体处置非感染组的肝脏单核细胞培养上清液中IL-4、IL-5、IL-13及IFN-γ进行测定;同时也对肝脏中IL-4及IL-12P40mRNA水平进行荧光定量PCR检测。结果显示,IL-4和IL-5的表达模式相似。在非感染状态下,无论是否进行抗体处置,两者都处于较低表达水平。在感染状态下,两者在非抗体处置小鼠中的表达显著高于抗体处置组(P<0.05)。IL-13与IL-4及IL-5的表达差异在于感染并用抗体处置后,小鼠肝脏单核细胞中的IL-13仍有较高水平表达。IFN-γ的表达量在感染后有所增加,但在有无抗体处理间无显著差异(P>0.05)。mRNA检测结果显示,在非感染状态下,抗体处置后的IL-4mRNA水平显著低于非抗体处置组(P<0.05)。感染后非抗体处置组小鼠中IL-4mRNA水平极显著高于抗体处置组(P<0.01),同时也极显著高于非感染非抗体处置组(P<0.01)。IL-12P40mRNA的水平在感染状态下,抗体处置组的IL-12P40mRNA虽较非抗体处置组低,但无显著差异(P>0.05)。但感染后非抗体处置组的IL-12P40mRNA水平均极显著高于感染组抗体处置和非抗体处置组(P<0.01)。本试验结果表明,IL-4Rα对肝片吸虫感染急性期IL-5和IL-4的表达极其重要,但对IL-13及IFN-γ的影响较小。

过敏性儿童白细胞介素4受体Q576R与血清总IgE相关性探讨

目的探讨过敏性儿童白细胞介素4（IL-4）受体Q576R与血清总IgE的关系。方法采用聚合酶链反应（PCR）和垂直电泳方法，检测80例患过敏性疾病的儿童和20例正常对照儿童IL-4R是否存在Q576R突变位点，并用测序进行确认。采用日本HITACHI的CLA-1过敏原分析仪检测80例患过敏性疾病的儿童和20例正常对照组儿童血清总IgE水平，然后进行X^2检验及成组t检验。结果IL-4受体Q576R突变位点和血清总IgE在过敏组与对照组相比差异有统计学显著性意义（均P〈0．05）。结论过敏性儿童IL-4受体QS76R与血清总IgE有相关性。

IL-13和乙醇促进人肺成纤维细胞胶原的表达

目的:研究乙醇和/或白细胞介素13(IL-13)对人肺成纤维细胞(HFL-1)Ⅰ、Ⅲ型胶原α1链基因(COL1A1、COL3A1)以及Ⅰ型胶原蛋白(CoⅠ)表达的影响,探讨肺纤维化的机制。方法:培养HFL-1,通过实时定量荧光RT-PCR检测乙醇和/或IL-13对HFL-1细胞IL-13受体(IL-13Rα1、IL-13Rα2、IL-4Rα)mRNA、COL1A1 mRNA和COL3A1 mRNA表达的影响,ELISA的方法检测乙醇和/或IL-13对HFL-1分泌CoⅠ的影响。结果:单独低浓度乙醇(25、50、100、200mmol/L)作用HFL-1后,与对照组相比IL-13Rα1 mRNA与IL-4Rα mRNA水平比对照组显著增高(P<0.05),而IL-13Rα2 mRNA水平比对照组显著降低(P<0.05)。单独低浓度乙醇(25、50、100、200 mmol/L)对HFL-1的COL1A1 mR-NA和COL3A1 mRNA表达无影响(P>0.05)。IL-13(10、20、50μg/L)可以促进HFL-1的COL1A1 mRNA和COL3A1 mR-NA的表达(P<0.05),且存在浓度依赖性。乙醇(200 mmol/L)与IL-13(10、20、50μg/L)共同作用刺激HFL-1促进COL1A1 mRNA和COL3A1 mRNA的表达比IL-13(10、20、50μg/L)单独作用强(P<0.05)。IL-13组(10、20、50μg/L)和乙醇(200 mmol/L)与IL-13(10、20、50μg/L)共同刺激组HFL-1均有CoⅠ的分泌,但共同刺激组HFL-1分泌CoⅠ量显著增加(P<0.05)。结论:单独低浓度乙醇(25、50、100、200mmol/L)不影响HFL-1细胞的COL1A1和COL3A1表达,但可以影响HFL-1细胞IL-4Rα、IL-13Rα1和IL-13Rα2的表达,而乙醇与IL-13共同刺激与单独IL-13刺激相比对HFL-1的COL1A1和COL3A1以及CoⅠ的表达有显著的促进作用。

白细胞介素4受体和哮喘

Th1 Th2亚群的失衡可能是哮喘发病的主要机制。本文主要对在哮喘发病过程中起主要作用的Th2型细胞因子IL - 4及其受体的生物学作用及其与哮喘的关系作一综述 ,对IL- 4及其受体的研究 ,不仅使我们深入了解过敏性疾病、自身免疫性疾病和感染性疾病的发病机制 ,而且为治疗这类疾病提供了一个新的思路。

白细胞介素4受体基因多态性与哮喘、过敏症研究进展

支气管哮喘是复杂的多基因遗传性疾病。白细胞介素4(IL鄄4)在哮喘发病机制中发挥重要作用。白细胞介素4受体基因(IL鄄4R)有6种错义突变致表达的氨基酸发生替换。IL鄄4R基因多态性与哮喘、过敏症有关。本文综述了IL鄄4R基因多态性与哮喘、过敏症相关性研究进展。

靶向重度哮喘的生物制剂研究进展

支气管哮喘是一种常见的慢性气道炎症疾病,约90%未控制的哮喘由2型炎症驱动。在我国,68%的重度哮喘为2型炎症型哮喘。2023年GINA指南强调推荐采取个体化靶向治疗重度哮喘,瞄准疾病炎症本质,采取精准治疗策略。当前靶向重度2型炎症型哮喘的生物制剂已成为研究热点,已有6种靶向2型炎症为主的生物制剂被获批应用于临床,包括抗IgE抗体(奥马珠单抗)、抗IL-5/IL-5R抗体(美泊利单抗、瑞利珠单抗、本瑞利珠单抗)、抗IL-4R抗体(度普利尤单抗)和抗TSLP抗体(特泽佩鲁单抗)。本文综述靶向重度哮喘的生物制剂的研究进展。