大鼠压力性损伤皮肤皮下组织中IL-6受体表达及其意义

目的观察大鼠压力性损伤组织中膜结合型IL-6受体(mIL-6R)和可溶型IL-6受体(sIL-6R)及受其调控的细胞因子表达水平,探讨IL-6受体对压力性损伤发生发展的影响及机制。方法将60只雄性SD大鼠随机分为正常对照组(n=20)、压力性损伤模型组(n=20)、sgp130Fc(特异性IL-6反式信号通路阻断剂)预处理组(n=20)。正常对照组不做任何处理;压力性损伤模型组在麻醉下于股薄肌处建立压力性损伤模型;sgp130Fc预处理组大鼠在麻醉前30 min给予sgp130Fc 250 ng腹腔内注射,随后在麻醉下采取与压力性损伤模型组相同的方法建立压力性损伤模型。大鼠建立压力性损伤模型成功后分别取股薄肌处组织及血液,运用ELISA法检测血液中IL-6、sIL-6R表达水平,运用免疫组化法检测组织中mIL-6R、细胞间黏附分子-1(ICAM-1)、血管内皮生长因子(VEGF)及凋亡因子(Bcl-2、Bax、Caspase-3)的表达。运用Tunel法观察组织中细胞凋亡水平。结果与正常对照组大鼠相比,压力性损伤模型组大鼠血液中IL-6、sIL-6R及组织中ICAM-1、Bax、Caspase-3表达明显增加(P<0.05),而组织中mIL-6R、VEGF表达减少(P<0.05)。sgp130Fc预处理组大鼠组织中mIL-6R、VEGF、Bcl-2的表达与压力性损伤模型组大鼠相比无明显差异(P>0.05),ICAM-1、Bax、Caspase-3的表达及细胞凋亡指数明显低于压力性损伤模型组大鼠(P<0.05)。结论压力性损伤大鼠组织中mIL-6R表达减少,血液中sIL-6R水平异常升高。异常升高的sIL-6R可上调炎症因子和凋亡因子表达,促使压力性损伤发生。

冠心病患者血浆hs-CRP、IL-6和可溶性IL-6受体水平的变化及意义

目的探讨高敏C反应蛋白(high sensitivity C reactive protein,hs-CRP)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)及可溶性IL-6受体(soluble IL-6receptor,sIL-6R)与冠心病(coronary heart disease,CHD)患者临床症状及冠状动脉病变严重程度之间的关系。方法收集CHD患者522例,分为稳定性心绞痛(SAP)、不稳定性心绞痛(UAP)及急性心肌梗死(AMI)组,并设正常对照(NC)组102例。收集其临床资料并根据冠脉造影结果计算Gensini积分,比较不同组间hs-CRP、IL-6及sIL-6R水平之间的差异,并与Gensini积分进行相关性分析。结果与NC组相比,SAP、UAP及AMI组的hs-CRP、IL-6水平明显增高而sIL-6R水平明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。多元线性回归结果显示IL-6水平与Gensini评分呈正相关,而sIL-6R水平与Gensini评分呈负相关(P<0.05)。结论CHD患者血浆hs-CRP、IL-6及sIL-6R水平与CHD临床症状及冠状动脉病变程度相关,对CHD的发展及预后有一定的预测价值。

IL-6/IL-6受体与类风湿关节炎关联性研究新进展

IL-6是一种多效性前炎症细胞因子,有多种生物活性,包括介导炎症反应,免疫反应等。IL-6在许多炎症性疾病中高表达,如RA,SLE,Crohn’s病等。IL-6的产生受多种因素的调节如NF-κB,Lin28,let-7 microRNA,IL6阳性反馈环,JunB等。IL-6受体(IL-6R)包括特异性IL-6Rα及IL-6Rβ即IL-6家族成员共有的信号转导蛋白gp130。IL-6可通过两种途径向细胞内传导信号:传统途径及反式信号途径,LMO4可参与反式信号途径的调节。IL-6/IL-6R在T、B细胞的发生中起重要作用。IL-6可抑制Th1、Treg的分化,促进Th2的分化;而且IL-6是CD4+T细胞分化为Th17细胞所必需;在B细胞中IL-6可诱导RAG基因的表达,促进抗体的产生。近年来越来越多的证据表明IL-6/IL-6R与RA存在密切关联性。RA患者血清及滑液中IL-6及sIL-6R的浓度升高,并且IL-6水平与疾病活性及临床表现密切相关,这可以解释RA患者的许多症状。因此可将IL-6信号转导途径相关的分子作为RA的治疗靶点,目前也研制出几种药物,其中之一为抗sIL-6R的人源化抗体Tocilizumab。临床试验中,该药可减轻RA患者的症状,降低疾病活性,可是也带来一定的副作用,这就限制了该药在临床中的应用。正在研制的另一种抗IL-6R的抗体可能为干预RA带来新的希望。

IL-6受体α亚单位mRNA和蛋白在人白血病细胞中的表达

为了探讨IL 6R的α亚单位基因与蛋白在人白血病细胞中的表达 ,为临床利用IL 6 /IL 6R系统介导重组IL 6 PE4 0外毒素融合蛋白靶向杀伤白血病细胞提供可靠依据 ,采用RT PCR半定量技术、直接免疫荧光标记及流式细胞术检测了IL 6R的α亚单位基因及蛋白在多种人白血病细胞细胞系中的表达。结果表明 ,粒系、单核系、红白血病细胞系HL 6 0 ,KG 1,U937和TF 1均高表达IL 6R的α亚单位基因和蛋白 ;淋巴系白血病细胞系Raji亦有一定量的基因表达 ;而淋巴系细胞等CEM和HuT2 8以及慢性粒细胞白血病细胞系K5 6 2无论是IL 6Rα亚单位的基因还是蛋白均为阴性。相对表达丰度依次为KG 1>TF 1>U2 6 6 >U937>HL 6 0 >Raji。鉴于粒系、单核系、红白血病细胞高表达IL 6Rα亚单位的基因和蛋白 ,而IL 6Rα亚单位蛋白在正常人外周血细胞均为阴性表达这一事实 ,提示可以利用IL 6 /IL 6R系统介导重组IL 6 PE4 0外毒素融合蛋白进行靶向杀伤和治疗这些白血病 。

IL-6受体在人白血病细胞膜上的表达及亲和力

目的 :研究各种白血病细胞膜IL 6R的表达、密度及亲和力 ,为深入探讨对IL 6 /IL 6R系统介导IL 6 PE40外毒素融合蛋白靶向杀伤白血病细胞的敏感性提供可靠依据。方法 :采用放射性配基结合实验 (RBA)并结合Scatchard作图法 ,系统分析IL 6R在 8种极具代表性的人类白血病细胞系U937,HL 6 0 ,KG1,TF1,K5 6 2 ,CEM ,HuT2 8和Raji上的表达密度及亲和力 ,同时应用流式细胞术 (FACS)检测IL 6R的α和 β亚单位蛋白在这些白血病细胞上的表达。结果 :RBA表明 ,粒、单、红白血病细胞系HL 6 0 ,U937,KG1和TF1表面存在着高亲和力IL 6R ,平均IL 6R密度 /细胞分别为 2 5 0 2个 ,2 874个 ,2 319个及 932 9个 ,而淋系白血病细胞系CEM ,HuT2 8和Raji以及慢粒K5 6 2细胞系则未测到IL 6R。FACS显示 ,HL 6 0 ,KG1,U937和TF1均高表达IL 6R的α亚单位蛋白 ,而CEM ,HuT2 8及K5 6 2则不表达IL 6Rα亚单位蛋白 ;IL 6Rβ亚单位蛋白在U937,KG1,TF1,HuT2 8及CEM中呈阳性表达 ,而在HL 6 0 ,Raji和K5 6 2细胞中则为阴性。结论 :鉴于粒、单、红白血病细胞异常高表达IL 6R ,而淋系和慢粒白血病呈阴性表达这一事实 ,提示急非淋白血病可能更适合用重组IL 6 PE40外毒素融合蛋白进行IL 6 /IL 6R介导的靶向治疗。

大鼠IL-6受体基因的克隆及在大肠杆菌中的表达

目的 获取大鼠IL 6受体 (IL 6R)的基因并高效表达。方法 用PCR技术 ,从正常成年大鼠脑的cDNA文库中 ,获得编码IL 6R基因的序列。测序后 ,通过PCR扩增和基因重组 ,分别构建IL 6R基因全长和羧基端部分编码序列的表达载体 ,并导入大肠杆菌DH5α中 ,通过IPTG诱导表达重组融合蛋白。对表达的羧基端序列编码的融合蛋白过谷胱甘肽琼脂糖柱进行纯化。结果 获得正常成年大鼠IL 6R(98～ 1493位 )的基因 ,测序结果与已发表的基因序列相一致。重组蛋白以包涵体的形式进行表达。经SDS PAGE分析 ,在相对分子质量 (Mr)为 740 0 0和 430 0 0处 ,各有 1条特异的蛋白带。对羧基端基因表达的包涵体形式的蛋白进行变性、重折叠及纯化后 ,得到了高纯度融合蛋白。结论 成功地克隆正常成年大鼠IL 6R基因 ,并在E .coliDH5α中高效表达 ,为进一步制备抗IL

不同肌糖原含量对运动诱导的骨骼肌IL-6基因表达、血清IL-6及可溶性IL-6受体的影响

目的:探讨在不同肌糖原含量状态下,骨骼肌白细胞介素6(IL-6)基因表达、血清IL-6及可溶性IL-6受体(sIL-6R)的变化规律。方法:雄性SD大鼠88只随机分为空白对照组和运动前低肌糖原组、运动前正常肌糖原组3大组,后两个大组又分别分为安静时、运动30分钟、运动2小时、运动2小时后恢复3小时和运2小时后恢复6小时5个小组。各运动组大鼠先进行糖原消耗运动,在24小时恢复期按分组分别采取不同饮食干预(正常饲料和低糖饲料),再进行下一次定量负荷运动。分别在不同时间点宰杀大鼠,取血清、股四头肌,测血清IL-6与sIL-6R浓度、骨骼肌肌糖原含量与IL-6mRNA。结果:与安静对照组相比,运动组各时间点血清IL-6浓度、血清sIL-6R浓度及骨骼肌IL-6mRNA大多显著升高(P<0.05,P<0.01);运动前低肌糖原组与正常糖原组相比,血清IL-6浓度与骨骼肌IL-6mRNA大多显著升高(P<0.05,P<0.01),但血清sIL-6R浓度无显著性差异(P>0.05)。结论:运动引起血清IL-6和sIL-6R增加;运动前肌糖原含量可能调控运动诱导的骨骼肌IL-6基因的转录,但是对sIL-6R似乎没有调控作用;在特定的运动负荷下,骨骼肌IL-6基因转录的增加可能是在运动后,而不是在运动中。

IL-6受体mRNA反义寡核苷酸抑制骨吸收的体外研究

目的 :探讨IL 6RmRNA特异反义寡核苷酸 (ASON)在体外对骨吸收的影响及意义。方法 :采用器官培养法培养新生的小鼠颅盖骨 ,并分别用ASON、无义寡核苷酸 (NSO)、IL 6或ASON与IL 6联合处理颅盖骨 ,未加药组为对照。培养一定时间后 ,测定培养上清液的钙含量 ,将实验组钙含量与对照组钙含量比值作骨吸收指数。结果 :作用 4 8h后 ,不同剂量的ASON均可轻度降低骨吸收指数 ,但无剂量依赖关系 ,ASON(5 μmol/L)对正常培养的颅盖骨的骨吸收的抑制率为 8.6 % ;用IL 6培养颅盖骨使骨吸收指数呈剂量依赖关系升高 ,ASON(5 .0 μmol/L)可能明显抑制由IL 6 (4 0μg/L)引起的高骨吸收指数 ,其抑制率为 5 8.0 % ;NSO对骨吸收指数无影响。ASON(5 .0 μmol/L)分别作用 1 2、2 4、4 8h的骨吸收指数则随时间延长而降低。结论 :ASON阻断IL 6R表达后明显抑制IL 6刺激所致的新生小鼠颅盖骨骨吸收 。

用于筛选人IL-6受体拮抗剂生物学活性的M1细胞模型的建立

目的 建立用于筛选人ＩＬ－６受体拮抗剂的Ｍ１细胞模型，并在该细胞模型上筛选具有人ＩＬ－６受体拮抗活性的化合物。方法 用反转录ＰＣＲ，检测Ｍ１细胞系上ＩＬ－６Ｒα／ｇｐ１３０ ｍＲＮＡ的表达情况，然后应用ＭＴＴ比色法检测在体外液体培养中，Ｍ１细胞对ｒｈＩＬ－６的反应性和多种小分子化合物对ｒｈＩＬ－６的拮抗活性。 结果 Ｍ１细胞有高丰度的ＩＬ－６Ｒα／ｇｐ１３０ ｍＲＮＡ表达；并对ｒｈＩＬ－６具有较为灵敏的反应性；经对１１３个化合物的筛选，发现两个化合物能部分地拮抗人ＩＬ－６受体的生物学活性。 结论 以Ｍ１细胞作为筛选人ＩＬ－６受体拮抗剂的细胞模型，筛选出具有一定人ＩＬ－６受体拮抗活性的两个化合物。

IL-6/IL-6受体mRNA反义寡核苷酸抑制骨吸收的实验研究

目的 探讨 IL- 6及其受体反义寡核苷酸在体外对骨吸收的影响及意义。方法 分离培养新生小鼠颅盖骨器官 ,分别用 IL- 6m RNA反义寡核苷酸 (ASON- 1 )、IL- 6受体 m RNA反义寡核苷酸 (ASON- 2 )、无义寡核苷酸 (NSO)、IL- 6或 IL- 6联合 ASON- 1及 ASON- 2作用培养颅盖骨 ,未加药组为对照。培养 48h后 ,取培养上清液测定钙含量 ,将实验组钙含量与对照组钙含量比值作骨吸收指数。结果 ASON- 1和 ASON- 2均可轻度降低培养颅盖骨的骨吸收指数。二者在浓度为 5μmol/ L时对骨吸收指数的抑制百分率分别为 1 0 .8%和 8.6% ,且 ASON- 1的作用有一定的剂量依赖关系 ;IL- 6作用颅盖骨使骨吸收指数呈剂量依赖性升高 ;当 IL- 6(40 ng/ ml)分别与 5μmol/ L ASON- 1或 5μmol/ L ASON- 2共同作用颅盖骨时 ,IL - 6对骨吸收的刺激性作用均受到抑制 ,其抑制百分率分别为 1 9.3%和 58.0 % ,ASON- 2对 IL- 6的抑制作用明显强于 ASON- 1 ;NSO对骨吸收指数无影响。结论 ASON- 1和 ASON- 2均能轻度抑制正常的颅盖骨骨吸收 ;对 IL- 6刺激导致的颅盖骨骨吸收 ,ASON- 2的抑制作用明显强于ASON- 1。

生物素标记的人IL-6受体基因探针的制备及在细胞原位杂交中的应用

制备了人IL-6受体cDNA 1.7 kb片段及其胞外区近膜侧区段0.5kb片段,分别用生物素标记制备了人IL-6受体基因探针,用斑点杂交分析了探针的灵敏度和特异性,并将探针用于四种白血病细胞系的原位杂交。结果表明,探针的灵敏度可达15～125pg/μl、特异性较好,所检测的四种细胞的IL-6受体mRNA表达水平与其细胞膜表面IL-6受体表达水平相一致。

天疱疮患者外周血单一核细胞IL-6受体TNFα受体mRNA的表达

目的:研究天疱疮患者外周血单一核细胞(PBMCs)促炎性细胞因子受体mRNA的表达及其意义。方法:用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法,对37例寻常型天疱疮患者及30例健康对照者PBMCs上IL-6受体、TNFα受体mRNA进行检测。结果:所有天疱疮患者及健康对照者均可检测到IL-6受体及TNFα受体mRNA,IL-6受体mRNA表达量在患者组与对照组之间无显著性差异,TNFα受体mRNA的表达量在患者组为0.50±0.19,对照组为0.22±0.10,患者组的表达量显著高于对照组(P<0.001)。结论:天疱疮患者PBMCs的TNFα受体mRNA表达升高,可能在天疱疮的发病机制中起一定的作用。

鼠IL-6受体融合蛋白的表达及初步鉴定

目的构建以及表达鼠白介素6(IL-6)受体融合蛋白。方法采用基因重组技术将鼠IL-6受体融合基因克隆到杆状病毒质粒Bacmid上,重组杆状病毒质粒在脂质体的介导下转染昆虫细胞Sf9,转染后收集重组杆状病毒,采用空斑实验检测第3代重组杆状病毒的滴度,并通过Western blot来确定目的蛋白的表达。结果重组杆状病毒质粒在DH10Bac大肠杆菌中包装成功,并转染Sf9细胞后得到重组杆状病毒,第3代重组杆状病毒的滴度为5×107pfu/ml,Western blot表明目的蛋白在Sf9细胞中表达。结论成功表达了鼠IL-6受体融合蛋白,为进一步研究IL-6在炎症性疾病中的作用奠定了实验基础。

慢性乙型肝炎患者血清中IL-6和IL-6受体的检测及其临床意义

目的探讨慢性乙型肝炎(CHB)患者血清中白细胞介素(IL)-6和IL-6受体含量的变化及其临床意义。方法采用ELISA方法检测55例CHB患者和32例健康人血清中IL-6和IL-6受体含量的变化,并进行相关性分析。结果 CHB患者血清IL-6和IL-6受体含量均明显高于健康人(P<0.01)。相关性分析表明,血清IL-6和IL-6受体含量呈正相关(P<0.01)。结论检测CHB患者血清中IL-6和IL-6受体的含量有助于CHB临床诊断、治疗和预后分析。

自身免疫性风湿病患者血浆sIL-6受体的检测及临床意义

目的探究自身免疫性风湿病患者血浆中s IL-6受体的表达量和临床意义。方法采用ELISA技术检测了我院2013年1月1日至2013年12月31日间收治的60例自身免疫性风湿病患者和30例健康的体检者血浆中s IL-6受体和自身抗体的表达情况。结果自身免疫性风湿病患者血浆中s IL-6受体的表达量明显高于对照组(P<0.05),且与自身抗体滴度水平呈正相关(r=0.78或r=0.36)。结论自身免疫性风湿病患者血浆中s IL-6受体的表达量有诊断价值,且与炎症、异常免疫反应有密切关联。

IL-6/IL-6受体轴及其靶向抑制剂研究进展

白细胞介素6(IL-6)是一种多效性细胞因子,参与免疫调节、炎症和肿瘤发生等多种生物功能,当与跨膜型IL-6受体(mIL-6R)结合时,通过经典信号通路发挥抗炎作用,而与可溶型IL-6R(sIL-6R)结合时,通过反式信号通路发挥促炎作用。因此,IL-6/IL-6R轴的失调可导致多种炎性疾病的发生和发展。近年来以IL-6/IL-6R轴为靶点的治疗方式已被证明能成功改善包括类风湿性关节炎、巨细胞动脉炎等部分自身免疫性疾病。IL-6还可通过调节肿瘤微环境、肿瘤干细胞等方式,参与肿瘤的发生、发展和转移,因此靶向阻断IL-6信号转导的策略可能为多种恶性肿瘤提供一种潜在的治疗策略。我们主要总结了IL-6/IL-6R轴及其靶向制剂的相关研究进展。

卵巢癌细胞IL-6、IL-8及其受体表达的研究

目的分析比较五种常见的上皮性卵巢癌细胞系IL-6、IL-8及其受体表达的差异。方法IL-6、IL-8的表达分别采用RT-PCR和ELISA法进行检测,IL-6受体(IL-6Rα和gp130)及IL-8受体(IL-8RA和IL-8RB)的表达采用免疫印迹技术进行测定。结果①五种上皮性卵巢癌细胞均组成性表达IL-6和IL-8。IL-6和IL-8在CAOV-3细胞中的表达水平均最高,而在HO-8910PM细胞中的表达水平均最低,IL-6在SKOV-3、HO-8910、OVCAR-3细胞中的表达水平依次降低,IL-8在OVCAR-3、SKOV-3、HO-8910细胞中的表达水平依次降低。②五种上皮性卵巢癌细胞均表达IL-6Rα、gp130及IL-8RA;除CAOV-3细胞外,其它细胞均表达IL-8RB。结论本研究旨在筛选表达IL-6和IL-8及其相应受体的细胞株,为研究IL-6、IL-8与卵巢癌发生、发展关系奠定基础,同时也为今后卵巢癌的免疫治疗提供一个新的思路。

IL-6/IL-6受体与相关临床疾病的研究进展

IL-6作为一个多效的细胞因子,在损伤、修复、免疫应答、炎症反应以及造血中担任重要角色,且影响着许多疾病的发生发展,如自身免疫病、肿瘤、神经系统疾病等。因此,调节IL-6有可能成为治疗某些疾病的新战略。

原代白血病细胞IL-6受体α表达的实验研究

目的 :分析不同类型原代白血病细胞IL 6R基因及IL 6R蛋白的表达情况。方法 :采用RT PCR方法对取自 2 9例白血病患者的原代白血病细胞和 8例健康人外周血单个核细胞的IL 6R基因表达情况进行了分析 ,并应用原位杂交技术和免疫组织化学方法对细胞表面的IL 6受体蛋白进行了检测。结果 :2 0例急性髓细胞白血病均明显表达IL 6RmRNA ;9例急性淋巴细胞白血病中有 2例为阳性 ,其余 7例为阴性 ;8例正常人PBMC中 6例阴性 ,2例有弱表达。免疫组化和原位杂交结果与RT PCR实验结果相一致。结论 :IL 6R可作为急性髓系白血病免疫治疗的候选靶位点。