绵羊IL-6启动子的克隆及pIL6-TLR4载体构建

为生产抗病转基因绵羊,并确保转基因羊的安全性。克隆绵羊IL-6启动子序列,以IL-6为启动子构建TLR4过表达载体,转染绵羊成纤维细胞验证功能。用1μg·L-1的LPS刺激转染后的绵羊成纤维细胞,利用q PCR技术和ELISA方法检测受LPS刺激后的成纤维细胞TLR4 m RNA表达量和TLR4蛋白表达量。结果表明,转染后的TLR4 m RNA表达量在2、4、24、48 h显著高于对照组(P<0.05),其中2、4、24 h极显著高于对照组(P<0.01),TLR4蛋白表达量始终高于对照组。说明p IL6-TLR4过表达载体构建成功。

IL-6-572C/G、IL-6-174G/C基因多态性与梅毒感染的相关性分析

目的研究人白细胞介素6(interleukin-6,IL-6)基因多态性与梅毒感染的相关性。方法选择2020年5月—2021年5月于连云港市第二人民医院就诊的梅毒感染患者80例作为试验组,至体检中心就诊的健康人群120例作为对照组,分别收集血样。首先采用Sanger测序法对样本IL-6启动子区域基因rs1800796(IL-6-572C/G)、rs1800795(IL-6-174G/C)进行测序,然后通过Logistic回归分析IL-6基因多态性和梅毒感染的相关性。结果IL-6基因位点rs1800796、rs1800795的基因型分布符合哈迪-温伯格(Hardy-Weinberg)平衡检验(P>0.05)。2个位点的基因型和等位基因频率在试验组和对照组中差异均无统计学意义(P>0.05);在隐性遗传模式、共显性遗传模式、显性遗传模式下rs1800796位点基因型在两组间分布差异无统计学意义(P>0.05)。结论IL-6基因启动子区域-572C/G和-174G/C 2个位点基因多态性和梅毒感染无关。

DHT对卵巢癌细胞IL-6、IL-8及其受体表达的调节作用

目的初步探讨雄激素对卵巢癌细胞IL-6、IL-8及其受体表达的调节作用及作用机制。方法选择兼有雄激素受体(AR)、IL-6和IL-8及其受体表达的卵巢癌细胞系SKOV-3和OVCAR-3作为研究模型,观察5α-二氢睾酮(DHT)对IL-6、IL-8及其受体表达以及NF-κB转录的调节作用。结果DHT可促进卵巢癌细胞IL-6、IL-8分泌及相应mRNA表达,并增强IL-6基因启动子的转录活性,DHT的上述作用可被AR阻断剂氟他胺完全阻断。DHT显著提高卵巢癌细胞NF-κB亚单位p50、p65(RelA)mRNA的表达水平,其中对后者的作用与对IL-6、IL-8 mRNA的作用相平行。此外,DHT尚能调节IL-6、IL-8受体的表达。结论雄激素可能通过NF-κB信号传导途径促进卵巢癌细胞IL-6、IL-8的分泌,同时对二者受体的表达也有一定的调节作用。

雄激素调节卵巢癌细胞IL-6基因启动子活性的研究

目的探讨雄激素诱导卵巢癌细胞IL-6基因启动子活化的分子机制。方法选择SKOV-3细胞作为研究模型,应用ELISA、RT-PCR及荧光素酶检测技术观察5α-二氢睾酮(5α-dihydrotest- osterone,DHT)对IL-6表达水平及IL-6基因启动子活性的影响,并对DHT诱导IL-6基因启动子活化的机制进行研究。结果(1)DHT可促进SKOV-3细胞IL-6分泌及相应mRNA的表达,该作用可被雄激素受体(AR)阻断剂氟他胺(nutamide,Flu)完全阻断,提示DHT诱导上述作用是AR途径介导的。(2)IL-6本身能以剂量依赖性的方式增强SKOV-3细胞IL-6基因启动子的转录活性,DHT也具有与IL- 6相似的作用。DHT的这种作用可被Flu完全阻断,也可被抗IL-6中和抗体部分阻断。(3)转录因子NF-IL-6、NF-κB及其亚单位p50、p65均可诱导SKOV-3细胞IL-6基因启动子的活性。DHT不改变NF- IL-6介导的IL-6基因启动子的转录活化,而增强NF-κB(p50+p65)及其亚单位p50、p65介导的IL-6基因启动子的转录活化。结论雄激素增强的IL-6基因启动子转录活性是AR途径介导的,同时有部分是通过IL-6的作用而实现。雄激素很可能通过AR与转录因子NF-κB或其亚单位p50和p65之间蛋白-蛋白的相互作用反式激活IL-6基因启动子的活性。

IL-6基因启动子区-572C/G多态性与儿童脓毒症的相关性

目的 探讨儿童脓毒症疾病易感性及进展与白细胞介素-6(IL-6)基因启动子区-572C/G多态性间的关系。方法 回顾性选取2019年5月至2021年5月十堰市妇幼保健院收治的脓毒血症患儿117例为试验组,选取同期体检健康儿童126例作为对照组,并根据第三版脓毒症与感染性休克定义国际共识,将试验组分为脓毒症组57例和脓毒症休克组60例。检测各组受试者外周血血浆中IL-6、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、降钙素原(PCT)水平,采用聚合酶链式反应-限制性内切酶片段长度多态性(PCR-RELP)技术检测IL-6基因rs1800796(-572C/G)位点单核苷酸多态性(SNPs),分析以上基因多态性与脓毒症易感性及其进展的关系。结果 血浆IL-6、TNF-α和PCT水平试验组明显高于对照组(P<0.01),且试验组中脓毒症休克组高于脓毒症组(P<0.01)。IL-6基因位点rs1800796(-572C/G)的基因型CC及等位基因C频率试验组显著低于对照组(P<0.05),且试验组中脓毒症休克组显著低于脓毒症组(P<0.05);IL-6基因-572C/G位点基因型为CC患儿的血浆IL-6、TNF-α和PCT水平低于基因型为CG/GG患儿(P<0.05)。Logisitic回归分析显示,基因型GG是CC型脓毒症患病风险的2.36倍(95%CI:1.204~4.628,P<0.05)。结论 IL-6基因-572C/G多态性与儿童脓毒症的发病风险及其进展显著相关,CC基因型为脓毒症保护基因,GG基因型是易感基因型,其多态性影响PCT、IL-6和TNF-α的水平。