IL-6R抗体调节PMMA骨水泥介导的滑膜成纤维细胞MMPs和血管化因子mRNA表达

目的探讨IL-6R抗体对PMMA骨水泥介导的滑膜成纤维细胞MMP-1和MMP-3、VEGF和PDGF mRNA表达的调节。方法从全髋关节置换术中获取滑膜组织消化并传代培养。倒置相差显微镜对滑膜细胞进行形态学观察,免疫细胞化学(SABC法)染色对滑膜成纤维细胞进行鉴定。根据加入不同培养物,实验分为3组:PMMA组:75μg/mL PMMA骨水泥颗粒;IL-6R抗体组:10 ng/mL IL-6R抗体+75μg/mL PMMA骨水泥颗粒;空白对照组。采用细胞计数试剂盒-8(Cell Counting Kit-8,CCK-8)检测IL-6R抗体、PMMA对滑膜成纤维细胞增殖活力影响;实时荧光定量PCR(real timefluorescence quantitative polymerase chain reaction,FQ-PCR)检测MMP-1、MMP-3、VEGF和PDGF mRNA表达。结果原代滑膜细胞贴壁后,初期为短梭形。连续3次传代后,95%以上细胞为长梭形成纤维细胞样细胞。SABC法染色检测结果显示:上述成纤维样细胞抗CD68抗体阴性,抗vimentin抗体呈棕黄色,为阳性反应。CCK-8检测显示:与PMMA组和空白对照组相比,IL-6R抗体组吸光度(A)值明显降低(P<0.01);而空白对照组与PMMA组间吸光度(A)值无统计学差异(P>0.05)。FQ-PCR检测发现:与PMMA组和空白对照组相比,IL-6R抗体组中MMP-1和MMP-3、VEGF和PDGF mRNA的表达明显受到抑制(P<0.01);PMMA组中MMP-1和MMP-3、VEGF和PDGF表达较空白对照组升高(P<0.05)。结论 IL-6R抗体能显著抑制滑膜成纤维细胞MMP-1和MMP-3、VEGF和PDGFmRNA的表达,为生物制剂预防和治疗假体无菌性松动提供分子生物学的理论依据。

IL-6对TNF-α的细胞杀伤作用影响的实验研究

目的 :研究IL - 6在肿瘤细胞对TNF -α耐受中的作用。方法 :检测SMMC - 772 1细胞在TNF -α作用下IL - 6的分泌。同时应用MTT实验检测细胞存活率 ,观察IL - 6和阻断IL - 6活性对细胞存活率的影响。结果 :SMMC - 772 1细胞能分泌IL - 6 ,TNF -α能促进细胞分泌IL - 6。外源加入的IL - 6对SMMC - 772 1细胞生长起促进作用。但加入抗IL - 6抗体或抗IL - 6R抗体时 ,与对照组相比 ,SMMC - 772 1细胞对TNE -α的敏感性也显著增加 ,10ng/mLTNF -α对SMMC - 772 1细胞就有显著的杀伤作用 ,P <0 0 1。随着浓度的增加 ,细胞存活率显著降低。结论 :抗IL - 6抗体和抗IL- 6R抗体可以抑制SMMC - 772 1细胞生长 ,能明显增加SMMC - 772 1细胞对TNF -α的敏感性。IL - 6对SMMC -772 1细胞的生长起促进作用。