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牦牛白细胞介素2(IL2)基因cDNA的分子克隆和表达研究(英文) 被引量:3
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作者 付满良 李惠 +4 位作者 武梅 王丽焕 吴凯源 宁健可 高荣 《四川动物》 CSCD 北大核心 2005年第4期507-512,共6页
目的克隆牦牛免疫基因并研究其免疫特性。方法以伴刀豆球蛋白A(Con A)激活的体外培养的牦牛血液淋巴细胞,提取激活淋巴细胞的总RNA,用RT-PCR方法,从中克隆出白细胞介素2 cDNA,连接到T载体上测序,并亚克隆到pGEX4T-1表达质粒,在大肠杆菌... 目的克隆牦牛免疫基因并研究其免疫特性。方法以伴刀豆球蛋白A(Con A)激活的体外培养的牦牛血液淋巴细胞,提取激活淋巴细胞的总RNA,用RT-PCR方法,从中克隆出白细胞介素2 cDNA,连接到T载体上测序,并亚克隆到pGEX4T-1表达质粒,在大肠杆菌进行了重组表达,纯化融合表达YIL2产物,MTT比色法测定其体外刺激牦牛血液淋巴母细胞增殖的免疫活性。结果YIL2 cDNA序列分析显示:在其编码区442位点的一个碱基发生突变(由C突变为T),从而导致终止密码子(TAA)出现,使YIL2蛋白表达提前终止,与其它牛IL2蛋白相比少了8个氨基酸。MTT比色法测定结果表明重组牦牛IL2蛋白体外能显著促进牦牛淋巴母细胞的增殖。结论本实验成功克隆了牦牛IL2基因,其原核表达产物具有显著的免疫活性,这为研制新型免疫增强剂来提高牦牛对各种疾病的抵抗力,增强牦牛疫苗的免疫保护率奠定了基础。 展开更多
关键词 牦牛 白细胞介素2基因 克隆 原核表达 生物活性
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IL2-GMCSF融合蛋白高效表达条件的初步研究 被引量:5
2
作者 黄树其 林来兴妹 +5 位作者 齐锡位 殷志新 刘新垣 方向东 高基民 王小宁 《第一军医大学学报》 CSCD 1996年第3期224-226,共3页
已构建好的白细胞介素2-粒/巨噬细胞集落刺激因子(IL2-GMCSF)融合基因载体,转化大肠杆菌DH5α,进行热诱导表达条件的研究。工程菌在30℃培养活化至OD600nm=0.5±0.1时,融合蛋白的表达率最为稳... 已构建好的白细胞介素2-粒/巨噬细胞集落刺激因子(IL2-GMCSF)融合基因载体,转化大肠杆菌DH5α,进行热诱导表达条件的研究。工程菌在30℃培养活化至OD600nm=0.5±0.1时,融合蛋白的表达率最为稳定;而后转为42℃热诱导4±0.5h,蛋白表达效率最高。 展开更多
关键词 il2-GMCSF 融合基因 融合蛋白 高效表达
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ANTITUMOR EFFECTS INDUCED BY B7-1 GENE MODIFIED EL-4 LYMPHOMA COOPERATED WITH IL-2 IN VIVO AND IN VITRO
3
作者 武爱民 张跃建 +1 位作者 秦慧莲 何球藻 《Chinese Journal of Cancer Research》 SCIE CAS CSCD 1997年第4期22-25,共4页
Costimulation plays very important role in T cells activation and tumor immunity. B71 is alone of the major costimulatory molecules both in human and rodents. Previous work indicated that B71 gene transfected EL4 lymp... Costimulation plays very important role in T cells activation and tumor immunity. B71 is alone of the major costimulatory molecules both in human and rodents. Previous work indicated that B71 gene transfected EL4 lymphoma can induce antitumor immunity in vivo. This paper showed that inoculation of EL4B71+ plus IL2 could elicit an antitumor effects in vivo and in vitro. Immunization with EL4B71+ tumor cells or EL4B71+ tumor cells plus IL2 could significantly prolong the survival time of the EL4 tumorbearing mice and also delay the occurrence of the tumor node in vivo. A strong proliferation response and CTL activity as well as the increased IL2 and TNF production of the splenocyte from the immunized mice with EL4B71+ or EL4B71+ plus IL2 were seen in the in vitro TLMC system. These finding indicated that the costimulatory molecule is necessary for inducing an effective antitumor immunity and IL2 optimal production. 展开更多
关键词 B71 gene il2 EL4 lymphoma
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串联IL-2的犬瘟热病毒F-H融合基因重组乳酸杆菌的构建与表达 被引量:3
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作者 苏凤艳 李哲 +2 位作者 李艳芝 王春凤 曾范利 《上海交通大学学报(农业科学版)》 2017年第4期83-88,共6页
为了研发犬瘟热乳酸杆菌载体疫苗,更好地预防犬瘟热,试验采用重叠延伸PCR(SOEPCR)技术扩增IL2-F-H融合基因,将IL2-F-H融合基因亚克隆至穿梭载体pSIP409上,构建pSIP-IL2-F-H重组表达载体,并电转化至植物乳杆菌NC8感受态细胞中,构建串联... 为了研发犬瘟热乳酸杆菌载体疫苗,更好地预防犬瘟热,试验采用重叠延伸PCR(SOEPCR)技术扩增IL2-F-H融合基因,将IL2-F-H融合基因亚克隆至穿梭载体pSIP409上,构建pSIP-IL2-F-H重组表达载体,并电转化至植物乳杆菌NC8感受态细胞中,构建串联水貂白细胞介素-2(IL-2)的犬瘟热病毒(CDV)F-H融合基因重组乳酸杆菌;利用SDS-PAGE和Western-blot检测IL2-F-H融合蛋白的表达情况。检测表明,重组乳酸杆菌表达了分子量约为80.16kDa的IL2-F-H融合蛋白,且该融合蛋白能与CDV抗体发生反应,具有反应原性。 展开更多
关键词 犬瘟热病毒 il2-F-H融合基因 乳酸杆菌 表达
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腐蹄病节瘤拟杆菌纤毛蛋白与绵羊IL-2融合基因的分泌型表达
5
作者 刘艳环 苗利光 +2 位作者 王克坚 刘波 李理 《动物医学进展》 CSCD 2004年第2期69-70,共2页
用改进的 Mg Cl2 法制备宿主菌株PAK/ 2 pfs感受态细胞 ;由 JM10 5工程菌中提取纤毛蛋白与绵羊白细胞介素 2 ( Pilin-IL-2 )融合基因表达载体 ,转化宿主细胞 PAK/ 2 pfs,筛选出具有 Pilin-IL-2融合基因表达载体的阳性克隆菌株 ;在营养... 用改进的 Mg Cl2 法制备宿主菌株PAK/ 2 pfs感受态细胞 ;由 JM10 5工程菌中提取纤毛蛋白与绵羊白细胞介素 2 ( Pilin-IL-2 )融合基因表达载体 ,转化宿主细胞 PAK/ 2 pfs,筛选出具有 Pilin-IL-2融合基因表达载体的阳性克隆菌株 ;在营养肉汤中进行 Pilin-IL-2融合基因的表达。培养 16~ 18h后 ,离心 ,向上清液中加入饱和 ( NH4) 2 SO4提取 Pilin-IL-2融合基因表达蛋白。用羊抗兔 E型节瘤拟杆菌抗血清与提取的融合蛋白进行对流免疫电泳 。 展开更多
关键词 腐蹄病 节瘤拟杆菌 纤毛蛋白 绵羊 融合基因工程疫苗 分泌型表达 白细胞介素2 免疫佐剂
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人白细胞介素-2 cDNA导入对卵巢癌耐药细胞株耐药性的逆转 被引量:1
6
作者 江凤 王一理 +3 位作者 司履生 耿宜萍 李旭 任延平 《西安医科大学学报》 CSCD 1999年第2期160-162,254,共4页
为了构建pcDNA-IL-2真核表达质粒,并探讨白细胞介素-2(IL-2)cDNA导入对顺铂诱导的卵巢癌耐药细胞株耐药性的影响。我们采用PCR技术扩增人IL-2cDNA片段,构建pcDNA-IL-2真核表达质粒。导入... 为了构建pcDNA-IL-2真核表达质粒,并探讨白细胞介素-2(IL-2)cDNA导入对顺铂诱导的卵巢癌耐药细胞株耐药性的影响。我们采用PCR技术扩增人IL-2cDNA片段,构建pcDNA-IL-2真核表达质粒。导入顺铂诱导的人卵巢癌耐药细胞株,观察其耐药性的改变。结果成功构建了pcDNA-IL-2真核表达质粒,并在Cos-7细胞高效表达,导入卵巢癌耐药细胞后其对顺铂的敏感性显著升高。说明转导pcD-NA-IL-2基因的人卵巢癌耐药细胞株其耐药性有明显逆转。 展开更多
关键词 白细胞介素2 卵巢肿瘤 耐药性 CDNA
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ANTI-METASTATIC EFFECT OF ONCOLYSATES FROM MURINE MELANOMA CELLS TRANSFECTED WITH RECOMBINANT VACCINIA VIRUS ENCODING HUMAN IL-2
7
作者 万涛 曹雪涛 +3 位作者 鞠佃文 于益芝 陶群 雷虹 《Chinese Journal of Cancer Research》 SCIE CAS CSCD 1997年第4期26-30,共5页
Oncolysates, debris of tumor cells, have been proven to be effective in active immunotherapy of cancer. In this experiment, the oncolysates from murine melanoma cells B16F10 transfected by recombinant vaccinia viruses... Oncolysates, debris of tumor cells, have been proven to be effective in active immunotherapy of cancer. In this experiment, the oncolysates from murine melanoma cells B16F10 transfected by recombinant vaccinia viruses encoding human IL2(IL2VBO) were used as vaccine. After treatment of tumor bearing mice with pulmonary metastases by intravenous injection of IL2VBO or rVVIL2, higher level IL2 activity was detected in the serum of IL2VBO or rVVIL2 treated mice at 8h. Further experiment results demonstrated that IL2VBO significantly reduced the number of pulmonary metastases and prolonged the survival time of tumorbearing mice when compared with other preparations. Fresh peripheral blood lymphocytes from IL2VBO treated mice showed potent cytotoxicity to B16F10 cells and YAC1 cells. But only cytotoxicity to B16F10 cells is more marked than that in rVVIL2 group, indicating that the IL2VBO could induce specific and non specific antitumor immunity. Because IL2 expression was at the same level in the serum of IL2VBO or rVVIL2 treated mice, the results suggested that the specific antitumor immunity induced by IL2VBO might contribute to the enhanced therapeutic effect of IL2VBO. 展开更多
关键词 Vaccinia virus il2 Oncolysate gene therapy Tumor vaccine Active immunotherapy MELANOMA
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猪IL2基因重组对PPV VP2-PCV2 ORF2真核质粒免疫原性增强的研究 被引量:1
8
作者 魏浩澈 徐志文 +4 位作者 徐凯 郭万柱 朱玲 唐玉香 陈燕凌 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期315-318,322,共5页
将猪IL2成熟肽基因、PPV VP2基因和PCV2 ORF2抗原多肽基因定向克隆至真核表达载体pCI-neo,构建重组质粒pCI-ORF2-VP2和pCI-IL2-ORF2-VP2,用脂质体介导法将其转染PK15细胞,采用RT-PCR法和间接免疫荧光法检测重组质粒在体外的表达情况。... 将猪IL2成熟肽基因、PPV VP2基因和PCV2 ORF2抗原多肽基因定向克隆至真核表达载体pCI-neo,构建重组质粒pCI-ORF2-VP2和pCI-IL2-ORF2-VP2,用脂质体介导法将其转染PK15细胞,采用RT-PCR法和间接免疫荧光法检测重组质粒在体外的表达情况。并以小鼠为动物模型,分别将pCI-IL2-ORF2-VP2质粒、pCI-ORF2-VP2质粒、pCI空载体、猪细小灭活苗和圆环亚单位苗通过肌注进行免疫,检测免疫小鼠脾脏淋巴细胞转化功能,外周血T淋巴细胞亚群的动态变化及血清抗体效价。结果表明,重组质粒在体外能正常表达,pCI-IL2-ORF2-VP2免疫小鼠脾脏淋巴细胞转化功能,CD4+、CD8+T淋巴细胞的数量和血清PPV/PCV2抗体的OD值在二免后均高于或显著高于pCI-ORF2-VP2对照组。结果表明,猪IL2基因重组能显著增强VP2/ORF2核酸疫苗诱导的免疫应答。 展开更多
关键词 细小病毒 圆环病毒2型 VP2基因 ORF2基因 il2基因
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联合肌注猪IL2真核质粒对PPV VP2-PCV2 ORF2核酸疫苗免疫效果的影响
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作者 朱玲 郭万柱 +3 位作者 徐凯 王印 陈燕凌 唐玉香 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期145-150,共6页
将猪IL2基因和PPV VP2基因、PCV2 ORF2截短基因克隆至真核表达载体pCI-neo,构建了重组质粒pCI-ORF2-VP2和pCI-IL2,用脂质体介导法将pCI-ORF2-VP2质粒转染PK15细胞,采用间接免疫荧光法检测在体外的表达情况。并以小鼠为动物模型,将pCI-IL... 将猪IL2基因和PPV VP2基因、PCV2 ORF2截短基因克隆至真核表达载体pCI-neo,构建了重组质粒pCI-ORF2-VP2和pCI-IL2,用脂质体介导法将pCI-ORF2-VP2质粒转染PK15细胞,采用间接免疫荧光法检测在体外的表达情况。并以小鼠为动物模型,将pCI-IL2和pCI-ORF2-VP2质粒联合肌注免疫小鼠,相同剂量免疫2次,间隔2周,同时设立pCI-ORF2-VP2、pCI空载体、猪细小灭活苗、圆环亚单位苗对照,检测免疫小鼠脾脏淋巴细胞的转化功能,外周血T淋巴细胞亚群的动态变化及血清抗体的滴度。结果显示,pCI-ORF2-VP2在PK15细胞中能正常表达,联合免疫组在第28天能够检测到PPV和PCV2抗体,第21~42天诱导淋巴细胞转化和CD4+、CD8+细胞的数量高于或显著高于pCI-ORF2-VP2质粒组。结果表明,猪IL2质粒联合肌注可以提高VP2/ORF2核酸疫苗的免疫效果。 展开更多
关键词 细小病毒 圆环病毒2型 VP2基因 ORF2基因 il2基因
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羊传染性脓疱病毒疫苗株和野毒株GIF基因比较分析 被引量:3
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作者 张大俊 卢炳州 +4 位作者 闫鸣昊 郝军红 郑海学 刘湘涛 张克山 《畜牧与兽医》 北大核心 2020年第3期91-96,共6页
羊传染性脓疱(orf)是由羊传染性脓疱病毒(orf virus,ORFV)感染引起的绵羊和山羊的一种接触性人兽共患病。粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)/白细胞介素(IL-2)抑制因子(GIF)基因为ORFV编码中晚期病毒基因,它能够与GM-CSF、IL-2结合... 羊传染性脓疱(orf)是由羊传染性脓疱病毒(orf virus,ORFV)感染引起的绵羊和山羊的一种接触性人兽共患病。粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)/白细胞介素(IL-2)抑制因子(GIF)基因为ORFV编码中晚期病毒基因,它能够与GM-CSF、IL-2结合并且抑制二者的活性,从而抑制宿主抗病毒作用。为了比较疫苗毒株和流行毒株间GIF的差异,本试验扩增并测定了ORFV疫苗株和野毒株的GIF基因序列,比较分析了ORFV疫苗弱毒株和野毒株GIF基因的核酸水平和氨基酸水平的差异情况,以及二、三级蛋白结构。结果表明:本次测定的ORFV疫苗株与野毒GIF基因核苷酸序列相似性为94.3%,氨基酸序列相似性为92.5%,两者的蛋白三级结构预测上也有差异。本研究结果为该病的防控提供了参考依据。 展开更多
关键词 羊传染性脓疱病毒 野毒株 疫苗株 GIF基因
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