IL28RA在胃癌组织中的表达及其与临床病理特征和预后的关系

目的:分析胃癌组织中IL-28RA的表达情况,以及与患者临床病理特征和预后的关系。方法:对胃癌组织芯片进行IL28RA、CD8及PD-L1免疫组化染色并判读。采用χ^(2)检验分析IL28RA蛋白表达与胃癌患者临床病理特征的关系。采用Kaplan-Meier生存分析进行预后单因素分析,使用COX回归进行多因素分析。结果:共纳入94例胃癌患者,平均年龄62.4岁,其中男性55例,病理分级1-2级患者39例,肿瘤最大直径≤5 cm的54例,83%患者肿瘤发生于胃体及胃窦(78/94),Ⅲ-Ⅳ期患者56例。我们发现癌与癌旁组织IL28RA表达无统计学差异。将IL28RA评分>3及≤3分为高表达及低表达组,结果显示IL28RA表达在肿瘤TNM分期及PD-L1表达情况存在差异(P<0.05),而与性别、年龄、肿瘤部位、大小等方面无差异。IL28RA高表达的胃癌患者预后更好(P=0.01)。多因素分析显示TNM分期、CD8^(+)T细胞比例和IL28RA表达水平是影响胃癌预后的独立预测因素,HR分别为1.39(P=0.04)、0.55(P=0.04)和0.50(P=0.02)。TNM分期低、CD8^(+)T细胞浸润比例高以及IL28RA表达高的患者,预后更好。联合三个因素同时对生存进行预测时,ROC曲线下面积可达0.727。结论:本研究发现胃癌患者中IL28RA高表达预示预后较好,提示IL28RA可能作为胃癌的一种预后预测因子。

IL28RA真核表达载体的构建和对HaCaT细胞迁移能力的影响

目的构建白介素28受体ɑ(IL28RA)基因的真核表达载体,并转染HaCaT细胞,观察该基因对HaCaT细胞迁移能力的影响。方法从HepG2细胞中提取总RNA,逆转录后以其cDNA为模板PCR扩增IL28RA编码片段。将其插入质粒pCMV6构建pCMV6-IL28RA重组表达体;重组体经酶切分析及测序鉴定,将其转染至HaCaT细胞中,经G418筛选出稳定过表达IL28RA细胞株。为检测转染效率,反转录实时荧光定量多聚核苷酸链式反应(RT-qPCR)分析转染细胞中IL28RA mRNA相对表达水平。伤口愈合实验检测过表达IL28RA对HaCaT细胞迁移能力的影响。结果IL28RA基因成功构建并在HaCaT中表达,RT-qPCR检测转染效率显示与对照细胞相比,过表达细胞中IL28RA mRNA相对表达水平显著升高。细胞伤口愈合实验检测显示与对照细胞相比,IL28RA过表达抑制HaCaT细胞迁移能力。结论IL28RA基因过表达降低HaCaT细胞迁移能力。

siRNA靶向干扰IL28RA基因对缺氧复氧心肌细胞损伤的保护作用

目的:探讨小干扰RNA(small interference RNA,siRNA)靶向干扰白细胞介素28受体α(interleukin 28 receptor alpha,IL28RA)基因对心肌细胞缺氧复氧损伤的保护作用。方法 :设计合成干扰IL28RA基因表达的3对siRNA(siRNA-6158、siRNA-6160、siRNA-6162),采用脂质体转染原代乳大鼠心肌细胞,分为正常对照组、单纯缺氧复氧组、缺氧复氧+阴性对照转染组、缺氧复氧+siRNA-6158转染组、缺氧复氧+siRNA-6160转染组、缺氧复氧+siRNA-6162转染组,探索siRNA转染心肌细胞的合适浓度,检测心肌细胞存活率、培养液中LDH的水平及心肌细胞IL28RA蛋白表达,观察siRNA干扰IL28RA基因对心肌细胞缺氧复氧过程中的保护作用。结果:采用脂质体转染法,siRNA浓度在80 nmol/L对心肌细胞具有较高的转染效率。与单纯缺氧复氧组和缺氧复氧+阴性对照转染组比较,缺氧复氧+siRNA-6158转染组和缺氧复氧+siRNA-6160转染组的LDH活性明显降低(P<0.05),心肌细胞存活率明显升高(P<0.05),IL28RA蛋白表达明显减少(P<0.05)。结论 :干扰IL28RA基因的表达有望成为保护缺氧复氧心肌损伤的重要手段。