IL38促进牙周膜干细胞的炎症反应

目的利用牙周膜干细胞研究细胞因子IL38是否参与牙周炎的炎症反应过程。方法利用20μg/mL牙龈卟啉单胞菌脂多糖Pg-LPS刺激牙周膜干细胞24 h建立牙周炎炎症体外模型;利用IL38 siRNA、IL38过表达质粒及相应对照进行牙周膜干细胞的转染,进而研究IL38对牙周膜干细胞炎症反应的影响;利用qPCR方法检测牙周膜干细胞中炎症细胞因子的释放,利用Western blot检测P50及P65蛋白质表达情况,利用CCK-8实验检测牙周膜干细胞的增殖情况。结果IL36亚家族中只有IL38在Pg-LPS刺激牙周膜干细胞中显著上升;在正常及炎症状态下,IL38沉默降低了细胞因子IL17A、TNFA及IL1B的mRNA表达水平,但IL38过表达逆转了上述结果;Western blot结果表明,IL38过表达促进P50及P65蛋白质表达水平;IL38过表达也增加了牙周膜干细胞的增殖,而IL38沉默抑制了其增殖能力。结论在体外实验中,IL38具有刺激牙周膜干细胞炎症细胞因子表达及增殖的能力。

高纯度白介素-3与假单胞菌外毒素融合蛋白的表达、纯化及质谱鉴定

旨在利用简单的表达纯化工艺,获得纯度较高、有活性的重组免疫毒素IL3-PE38KDEL并对其物理学及免疫学性质进行鉴定。利用PQE30-IL3-PE38KDEL/SG12009工程菌表达重组免疫毒素IL3-PE38KDEL,在提取包涵体后经一步强阳离子柱层析得到纯度较高的免疫毒素复性纯化产物,用Westenblotting、质谱、氨基测序等先进技术对产物鉴定。结果显示,发酵后目的蛋白表达量占总菌体的17.56%,经强阳离子柱层析纯化复性后的目的蛋白纯度达到90%以上,Western blotting、质谱、氨基测序结果均表明,纯化产物分子量为54.9kD且具有相应的免疫学活性,序列与预期序列完全一致。纯化复性方法对重组免疫毒素IL3-PE38KDEL的生物性质及纯度有较大影响,因此选择一种适当的纯化复性方法至关重要。

可抗脑瘤的化合物

成胶质细胞瘤是常见的恶性脑瘤.长期以来,它的治疗包括外科手术、放射治疗,偶尔也用化学治疗.但上述治疗无一能延长生存期.

重组靶向毒素hIL6(T22)-PE38在大肠杆菌中的表达及其细胞毒性

目的 在大肠杆菌中表达、纯化重组靶向毒素hIL6(T22)-PE38,并检测其细胞毒性。方法以PHis-hIL6(T22)-PE38质粒为模板,PCR扩增hIL6(T22)-PE38基因,插入表达载体pET-28a(+)的NcoⅠ和XhoⅠ多克隆位点,构建重组表达质粒,分别转化至大肠杆菌BL21(DE3)、Rosettablue(DE3)和BL21(DE3)pLysS中,IPTG诱导表达,并对表达条件进行优化。表达产物经亲和层析纯化后,检测其细胞毒性。结果重组表达质粒pET-28a-hIL6(T22)-PE38经双酶切和测序证明构建正确。表达的重组毒素相对分子质量约56 000,在大肠杆菌Rosettablue(DE3)中表达量最高。最适诱导表达条件为:1 mmol/L IPTG 28℃诱导4 h。重组毒素能选择性地杀伤人骨髓瘤细胞U266和鼠骨髓瘤细胞SP2/0,体外对U266和SP2/0细胞的IC50分别为0.5～1.0和1.0～1.5μg/ml。结论重组靶向毒素hIL6(T22)-PE38在大肠杆菌中成功获得可溶性表达,纯化的蛋白可明显选择性杀伤U266和SP2/0细胞。