ILT3在冠心病患者外周血单核细胞的表达及意义

目的探讨冠心病患者外周血单个核细胞(PBMC)中免疫球蛋白样转录子(ILT)3的表达与临床意义。方法依据临床资料将100例冠心病患者分为稳定型心绞痛(SAP)组45例,急性冠状动脉综合征(ACS)组55例。用流式细胞术(FACS)检测PBMC中ILT3的表达百分比,分离培养各组外周血树突细胞脐周血分离的CD4^+T淋巴细胞混合培养(MLR),用FACS法检测CD4^+CD25^+T百分比和酶联免疫吸附试验(ELISA)检测混合液中的白细胞介素(IL)-10、干扰素(IFN)-γ和肿瘤坏死因子(TNF)-β细胞因子含量。结果SAP组与ACS组PBMC中ILT3阳性百分比分别为〔(80.13±2.10)%、(1.83±0.91)%〕,差异有统计学意义(P<0.01)。SAP组CD4^+CD25^+T淋巴细胞百分比〔(89.2±2.3)%〕,较ACS组〔(39.5±5.3)%〕显著升高(P<0.01)。MLR上清液中SAP组较ACS组IL-10浓度明显升高,IFN-γ和TNF-β浓度明显降低,有统计学意义(P<0.01)。结论SAP患者的PBMC中ILT3表达明显升高,能诱导CD4+T淋巴细胞的CD4+CD25+T亚型表达增加,ILT3可能参与维持冠状动脉斑块稳定的免疫抑制。

携带人ILT-3基因重组慢病毒载体的构建与鉴定

目的:构建携带人ILT3基因重组慢病毒载体并检测其生物学功能。方法:从已构建好的含ILT3的质粒pB lue-scriptR-ILT3为模板,利用聚合酶链反应(PCR)方法扩增目的基因ILT3;将该基因与慢病毒载体表达质粒pLVX-AcGFP-N1连接,得到重组的pLVX-AcGFP-ILT3,通过酶切和测序分析比对验证ILT3基因后,将pLVX-AcGFP-ILT3质粒利用慢病毒转染系统转染人胚胎肾上皮细胞株Lenti-X 293T细胞获得携带ILT3慢病毒载体;转染人脐静脉血管内皮细胞,利用流式细胞仪检测目的基因ILT3的表达。结果:经PCR扩增获得1 844 bp的目的基因片段,构建的重组质粒经酶切及测序和分析比对鉴定正确;该质粒与包装质粒共转染293T细胞获取的慢病毒,纯化、浓缩后滴度达5×1012转导单位pfu/L;转染的HUVECs,流式细胞检测ILT3阳性率为98%,可判断目的基因ILT3在靶细胞HUVECs中表达。结论:成功构建转载质粒pLVX-AcGFP-ILT3及携带ILT3基因慢病毒载体。

冠心病患者外周血免疫蛋白球样转录子的表达及意义

目的 探讨冠心病患者外周血T淋巴细胞免疫球蛋白样转录子3(Ig-like transcripts,ILT3)在的表达与临床意义。方法 依据临床资料将100例冠心病患者分为稳定型心绞痛(SAP)组45例,急性冠状动脉综合征(ACS)组55例。免疫磁珠阴性分选外周血的CD4+T细胞,用流式细胞术(FACS)测外周血CD4+T淋巴细胞亚群中ILT3 的表达百分比,采用实时荧光定量 PCR 检测CD4+T淋巴细胞的ILT3mRNA表达。结果(1)用免疫磁珠阴性分选外周血的CD4+T细胞,流式细胞仪分析纯度为98.46%。(2)SAP组与ACS组比较分析,CD4+T淋巴细胞亚群中ILT3阳性率的表达百分比分别为(80.13±2.10)%和(1.83±0.91)% ,差异有统计学意义,(P<0.05);(3)比SAP组和ACS组外周血CD4+T淋巴细胞C 的 ILT3 mRNA相对表达量分别为(8.234±0.394)和(2.584±0.183),差异有统计学意义(P<0.05)。结论 SAP患者外周血的CD4T淋巴细胞ILT3表达明显升高,提示ILT3可能参与维持动脉粥样硬化的免疫稳态。

黄芪甲苷基于ILT4-PI3K/Akt-B7-H3通路对NSCLC免疫逃逸机制影响的实验研究

目的:探究黄芪甲苷通过ILT4-PI3K/Akt-B7-H3通路抑制非小细胞肺癌(NSCLC)免疫逃逸的机制。方法:A549人肺腺癌细胞株,对细胞进行复苏、培养和传代。选取对数生长期细胞行MTT实验,细胞传代后用黄芪甲苷进行干预。根据药物浓度分为对照组及黄芪甲苷低、中、高浓度组,药物干预后进行Western blot实验、qRT-PCR实验、划痕实验、MTT试验。结果:各组D(λ)值随时间及黄芪甲苷浓度的增加而降低,40μmol/L以上各给药组间差异不明显。各浓度黄芪甲苷均能抑制A549细胞增殖,且抑制作用随药物浓度升高及时间延长而增强。黄芪甲苷低、中、高浓度组ILT4、PI3K、Akt蛋白表达显著低于对照组(P<0.05),低、中浓度组B7-H3蛋白表达显著低于对照组,ILT4、PI3K、Akt、B7-H3 mRNA表达显著低于对照组(P<0.05)。各组细胞划痕愈合率均随着时间的延长而提高,随着黄芪甲苷浓度的升高而降低(P<0.05)。结论:黄芪甲苷在蛋白水平和基因水平上均能显著降低A549细胞ILT4的表达,抑制PI3K/Akt通路,影响B7-H3的表达,抑制ILT4-PI3K/Akt-B7-H3通路,可进一步影响肺癌免疫逃逸的后续阶段,从而抑制NSCLC的发生发展。