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牛源犬新孢子虫IMP1基因的克隆与序列分析
1
作者
张蕾
贾立军
鲁承
《安徽农业科学》
CAS
2014年第15期4566-4568,共3页
[目的]为了解牛源犬新孢子虫IMP1基因生物学特性,分析牛源犬新孢子虫IMP1基因的克隆与序列。[方法]应用PCR技术扩增IMP1基因,将纯化的PCR产物和pMD18-T Simple Vector连接,构建pMD18-IMP1重组克隆质粒,进行PCR鉴定和酶切鉴定,将鉴定为...
[目的]为了解牛源犬新孢子虫IMP1基因生物学特性,分析牛源犬新孢子虫IMP1基因的克隆与序列。[方法]应用PCR技术扩增IMP1基因,将纯化的PCR产物和pMD18-T Simple Vector连接,构建pMD18-IMP1重组克隆质粒,进行PCR鉴定和酶切鉴定,将鉴定为阳性的质粒进行测序分析。[结果]PCR扩增犬新孢子虫IMP1基因大小为762 bp,克隆质粒经测序分析与GenBank(XM_003879531.1)中IMP1基因的同源性为99.9%。[结论]该试验为犬新孢子虫IMP1基因的表达及后续研究奠定了基础。
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关键词
犬新孢子虫
imp1基因
克隆
序列分析
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职称材料
巨型艾美耳球虫IMP1基因的原核表达及多克隆抗体的制备
被引量:
1
2
作者
林倩
黄驹辉
+3 位作者
唐牧之
江和基
黄志坚
殷光文
《福建农林大学学报(自然科学版)》
CSCD
北大核心
2016年第3期290-295,共6页
免疫映射蛋白1(IMP1)是一种从巨型艾美耳球虫中发现的蛋白,具有良好的免疫原性和免疫保护性.本试验通过Em IMP1基因的克隆、原核表达以及多克隆抗体的制备,为后续深入研究该蛋白的生物学及免疫学功能奠定基础.首先,从未孢子化的巨型艾...
免疫映射蛋白1(IMP1)是一种从巨型艾美耳球虫中发现的蛋白,具有良好的免疫原性和免疫保护性.本试验通过Em IMP1基因的克隆、原核表达以及多克隆抗体的制备,为后续深入研究该蛋白的生物学及免疫学功能奠定基础.首先,从未孢子化的巨型艾美耳球虫新疆株卵囊中提取总RNA,反转录合成c DNA,PCR扩增Em IMP1基因片段.其次,将Em IMP1基因扩增片段连接到原核表达载体p ET-28a构建表达质粒p ET-28a-Em IMP1,转化至大肠杆菌BL21(DE3)菌株并进行表达;将纯化后的蛋白与等量弗氏佐剂乳化后皮下注射至2只新西兰大白兔体内,每隔2周免疫一次,一共免疫4次后取得的兔血清即为多克隆抗体.最后,用所获得的多克隆抗体,对纯化后的Em IMP1进行免疫印迹试验鉴定,用酶联免疫吸附测定法检测多克隆抗体的效价.结果表明,克隆出的Em IMP1基因的全长为1 140 bp,诱导出的蛋白大小为70 ku,且该蛋白在上清液和包涵体中均有存在.免疫印迹试验检测结果显示,用上述方法制备的多克隆抗体具有良好的特异性,酶联免疫吸附测定法检测结果表明该多克隆抗体具有高效价.因此,可通过原核表达蛋白Em IMP1免疫兔子制备特异性好且效价高的多克隆抗体.
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关键词
巨型艾美耳球虫
imp1基因
原核表达
多克隆抗体
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职称材料
题名
牛源犬新孢子虫IMP1基因的克隆与序列分析
1
作者
张蕾
贾立军
鲁承
机构
延边大学农学院动物医学系
出处
《安徽农业科学》
CAS
2014年第15期4566-4568,共3页
基金
国家自然科学基金(31160501
31360605)
+1 种基金
吉林省重点科技攻关项目(20140204078NY)
吉林省青年科研基金(201201076)
文摘
[目的]为了解牛源犬新孢子虫IMP1基因生物学特性,分析牛源犬新孢子虫IMP1基因的克隆与序列。[方法]应用PCR技术扩增IMP1基因,将纯化的PCR产物和pMD18-T Simple Vector连接,构建pMD18-IMP1重组克隆质粒,进行PCR鉴定和酶切鉴定,将鉴定为阳性的质粒进行测序分析。[结果]PCR扩增犬新孢子虫IMP1基因大小为762 bp,克隆质粒经测序分析与GenBank(XM_003879531.1)中IMP1基因的同源性为99.9%。[结论]该试验为犬新孢子虫IMP1基因的表达及后续研究奠定了基础。
关键词
犬新孢子虫
imp1基因
克隆
序列分析
Keywords
Neospora caninum
imp
1
gene
Clone
Sequential analysis
分类号
S188 [农业科学—农业基础科学]
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职称材料
题名
巨型艾美耳球虫IMP1基因的原核表达及多克隆抗体的制备
被引量:
1
2
作者
林倩
黄驹辉
唐牧之
江和基
黄志坚
殷光文
机构
福建农林大学动物科学学院/福建省动物药物工程实验室
出处
《福建农林大学学报(自然科学版)》
CSCD
北大核心
2016年第3期290-295,共6页
基金
国家自然科学基金--青年基金项目(31502058)
福建省科技厅引导性项目(2015N0017)
大学生创新创业训练计划项目(201510389187)
文摘
免疫映射蛋白1(IMP1)是一种从巨型艾美耳球虫中发现的蛋白,具有良好的免疫原性和免疫保护性.本试验通过Em IMP1基因的克隆、原核表达以及多克隆抗体的制备,为后续深入研究该蛋白的生物学及免疫学功能奠定基础.首先,从未孢子化的巨型艾美耳球虫新疆株卵囊中提取总RNA,反转录合成c DNA,PCR扩增Em IMP1基因片段.其次,将Em IMP1基因扩增片段连接到原核表达载体p ET-28a构建表达质粒p ET-28a-Em IMP1,转化至大肠杆菌BL21(DE3)菌株并进行表达;将纯化后的蛋白与等量弗氏佐剂乳化后皮下注射至2只新西兰大白兔体内,每隔2周免疫一次,一共免疫4次后取得的兔血清即为多克隆抗体.最后,用所获得的多克隆抗体,对纯化后的Em IMP1进行免疫印迹试验鉴定,用酶联免疫吸附测定法检测多克隆抗体的效价.结果表明,克隆出的Em IMP1基因的全长为1 140 bp,诱导出的蛋白大小为70 ku,且该蛋白在上清液和包涵体中均有存在.免疫印迹试验检测结果显示,用上述方法制备的多克隆抗体具有良好的特异性,酶联免疫吸附测定法检测结果表明该多克隆抗体具有高效价.因此,可通过原核表达蛋白Em IMP1免疫兔子制备特异性好且效价高的多克隆抗体.
关键词
巨型艾美耳球虫
imp1基因
原核表达
多克隆抗体
Keywords
Eimeria maxima
imp
1
gene
prokaryotie expression
polyclonal antibody
分类号
S855.9 [农业科学—临床兽医学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
牛源犬新孢子虫IMP1基因的克隆与序列分析
张蕾
贾立军
鲁承
《安徽农业科学》
CAS
2014
0
下载PDF
职称材料
2
巨型艾美耳球虫IMP1基因的原核表达及多克隆抗体的制备
林倩
黄驹辉
唐牧之
江和基
黄志坚
殷光文
《福建农林大学学报(自然科学版)》
CSCD
北大核心
2016
1
下载PDF
职称材料
已选择
0
条
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引用分析
参考文献
引证文献
统计分析
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