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M13-IN5重组噬菌体的构建与鉴定及其对沙眼衣原体的作用研究
被引量:
4
1
作者
练婷婷
魏世娟
+6 位作者
刘原君
任杰
王生
郭媛丽
郭睿
刘全忠
邵丽丽
《中华皮肤科杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2018年第12期859-864,共6页
目的 构建针对沙眼衣原体的活性噬菌体,并评估其对沙眼衣原体的作用.方法 将衣原体噬菌体phiCPG1衣壳蛋白VP1的IN5序列与M13噬菌体重组,获得重组M13-IN5噬菌体.利用PCR扩增、酶切、测序重组噬菌体基因,验证目的片段是否成功插入;通过噬...
目的 构建针对沙眼衣原体的活性噬菌体,并评估其对沙眼衣原体的作用.方法 将衣原体噬菌体phiCPG1衣壳蛋白VP1的IN5序列与M13噬菌体重组,获得重组M13-IN5噬菌体.利用PCR扩增、酶切、测序重组噬菌体基因,验证目的片段是否成功插入;通过噬菌斑形成实验检测重组噬菌体的活性.利用CCK8法检测效价为1011噬斑形成单位(PFU)/ml的M13噬菌体和M13-IN5重组噬菌体对Hela细胞增殖的影响,同时设置空白对照组(未感染衣原体的Hela细胞).Western印迹检测重组噬菌体、M13噬菌体、对数期大肠杆菌ER2738中IN5环蛋白的表达.在沙眼衣原体E型标准株的培养过程中,分别加入效价为1011PFU/ml的M13噬菌体、M13-IN5重组噬菌体进行干预,并设置衣原体对照组.感染后36 h,共聚焦显微镜下观察M13噬菌体和M13-IN5重组噬菌体定位情况;在感染后36、48、60、72 h碘染色观察计数包涵体.两样本均数间比较用t检验;多组样本均数间比较采用方差分析,两两比较采用Bonferroni检验.结果 成功构建含有IN5环基因的具有生物活性的重组M13噬菌体,Western印迹证实重组噬菌体表达IN5环/pⅢ融合蛋白,重组噬菌体效价达3.05×1011 PFU/ml.CCK8法检测显示,空白对照组、M13噬菌体组、M13-IN5噬菌体组A450值分别为3.63±0.01、3.55±0.02、3.70±0.01,组间差异无统计学意义(F=12.0,P>0.05).共聚焦显微镜定位显示,噬菌体荧光与衣原体包涵体荧光存在重叠;衣原体感染后36、72h,M13-IN5噬菌体组和M13噬菌体组包涵体数目较对照组减少(均P< 0.05),且M13-IN5噬菌体组包涵体数目较M13噬菌体组有明显降低(P<0.05);衣原体感染后48、60h,M13噬菌体组、M13-IN5噬菌体组与对照组包涵体数目差异无统计学意义(P>0.05).结论 构建的M13-IN5重组噬菌体具有生物学活性,且能够成功表达IN5环蛋白;体外实验中,该噬菌体能进入衣原体包涵体内,且能明显抑制沙眼衣原体感染.
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关键词
沙眼衣原体
细菌噬菌体M13
DNA
重组
包涵体
in5环
原文传递
题名
M13-IN5重组噬菌体的构建与鉴定及其对沙眼衣原体的作用研究
被引量:
4
1
作者
练婷婷
魏世娟
刘原君
任杰
王生
郭媛丽
郭睿
刘全忠
邵丽丽
机构
天津医科大学总医院皮肤性病科
出处
《中华皮肤科杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2018年第12期859-864,共6页
基金
国家自然科学基金(31500157).
文摘
目的 构建针对沙眼衣原体的活性噬菌体,并评估其对沙眼衣原体的作用.方法 将衣原体噬菌体phiCPG1衣壳蛋白VP1的IN5序列与M13噬菌体重组,获得重组M13-IN5噬菌体.利用PCR扩增、酶切、测序重组噬菌体基因,验证目的片段是否成功插入;通过噬菌斑形成实验检测重组噬菌体的活性.利用CCK8法检测效价为1011噬斑形成单位(PFU)/ml的M13噬菌体和M13-IN5重组噬菌体对Hela细胞增殖的影响,同时设置空白对照组(未感染衣原体的Hela细胞).Western印迹检测重组噬菌体、M13噬菌体、对数期大肠杆菌ER2738中IN5环蛋白的表达.在沙眼衣原体E型标准株的培养过程中,分别加入效价为1011PFU/ml的M13噬菌体、M13-IN5重组噬菌体进行干预,并设置衣原体对照组.感染后36 h,共聚焦显微镜下观察M13噬菌体和M13-IN5重组噬菌体定位情况;在感染后36、48、60、72 h碘染色观察计数包涵体.两样本均数间比较用t检验;多组样本均数间比较采用方差分析,两两比较采用Bonferroni检验.结果 成功构建含有IN5环基因的具有生物活性的重组M13噬菌体,Western印迹证实重组噬菌体表达IN5环/pⅢ融合蛋白,重组噬菌体效价达3.05×1011 PFU/ml.CCK8法检测显示,空白对照组、M13噬菌体组、M13-IN5噬菌体组A450值分别为3.63±0.01、3.55±0.02、3.70±0.01,组间差异无统计学意义(F=12.0,P>0.05).共聚焦显微镜定位显示,噬菌体荧光与衣原体包涵体荧光存在重叠;衣原体感染后36、72h,M13-IN5噬菌体组和M13噬菌体组包涵体数目较对照组减少(均P< 0.05),且M13-IN5噬菌体组包涵体数目较M13噬菌体组有明显降低(P<0.05);衣原体感染后48、60h,M13噬菌体组、M13-IN5噬菌体组与对照组包涵体数目差异无统计学意义(P>0.05).结论 构建的M13-IN5重组噬菌体具有生物学活性,且能够成功表达IN5环蛋白;体外实验中,该噬菌体能进入衣原体包涵体内,且能明显抑制沙眼衣原体感染.
关键词
沙眼衣原体
细菌噬菌体M13
DNA
重组
包涵体
in5环
Keywords
Chlamydia trachomatis
Bacteriophage M13
DNA,recombinant
Inclusion bodies
in5
loop
分类号
R759 [医药卫生—皮肤病学与性病学]
原文传递
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
M13-IN5重组噬菌体的构建与鉴定及其对沙眼衣原体的作用研究
练婷婷
魏世娟
刘原君
任杰
王生
郭媛丽
郭睿
刘全忠
邵丽丽
《中华皮肤科杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2018
4
原文传递
已选择
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参考文献
引证文献
统计分析
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