鹅FSH-α和INH-α基因在不同生殖时期的表达差异分析

为检测不同生殖时期鹅FSH-α、INH-α的变化规律。采用RT-PCR和RT-qPCR技术检测FSH-α、INH-α在不同生殖时期的鹅不同组织中的表达量。结果表明:FSH-α、INH-α在心、肝、脾、下丘脑、肾、大肠、小肠、大脑、小脑、输卵管、腺胃、垂体、肺、卵巢和胸肌等组织中均有表达,在生殖相关组织中表达较高;在生殖周期中鹅FSH-α表达量为产蛋期>开产前期>抱窝期;在垂体中,开产前期和产蛋期的表达量均显著高于抱窝期(P<0.05),在输卵管中,产蛋期的表达量显著高于开产前期和抱窝期(P<0.05),在下丘脑和卵巢中,3个时期的FSH-α表达量没有显著差异(P>0.05);在生殖周期中鹅INH-α表达量为抱窝期>开产前期>产蛋期,在卵巢中,产蛋期表达量显著低于开产前期和抱窝期(P<0.05),在垂体、下丘脑和输卵管中,3个时期的INH-α表达量没有显著差异(P>0.05)。本研究结果揭示了鹅FSH-α和INH-α基因在鹅不同产蛋时期的变化规律,为提高鹅产蛋量提供实验依据。

INH-α对BMP9诱导间充质干细胞成骨分化的作用

为了研究抑制素α亚基(inhibinα-subunit INH-α)对骨形态发生蛋白9(bone morphogenetic protein9,BMP9)诱导的间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)成骨分化的影响,本研究采用细胞化学染色法检测第3天、第5天、第7天细胞中碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性的变化。利用RT-PCR和Western blotting检测细胞中的成骨分化早期标志物(Runx2)和晚期标志物(OPN)的mRNA含量及蛋白表达水平。茜素红S染色法检测第21天细胞中的钙盐沉积变化。发现BMP9组ALP活性明显增高,INH-α组ALP活性与对照组相比无明显变化,但联合运用BMP9和INH-α组ALP活性较BMP9组明显降低。此外,BMP9组Runx2和OPN的mRNA含量和蛋白表达水平明显增高,而联用BMP9和INH-α组中的Runx2和OPN水平较BMP9组显著下降(p<0.01)。同样,在茜素红S染色实验中,BMP9组钙盐结节明显增多,染色深;而在联合运用BMP9和INH-α组钙盐结节较BMP9组明显减少,染色变浅。说明INH-α能够抑制BMP9诱导间充质干细胞成骨分化作用。

沉默INHα的RNAi转基因小鼠干扰效果及其繁殖性能的分析

抑制素(INH)主要是通过抑制促卵泡素(FSH)的合成与分泌来调节卵泡发育和精子发生,而INHα是其重要组成亚基。本实验室前期将INHα基因3个RNAi片段(分别命名为B、C和M)整合到小鼠基因组中得到了转基因小鼠;本研究分析这3个RNAi片段在转基因雌鼠中的抑制效果及对繁殖性能的影响。结果表明:B、C和M片段在转基因雌鼠F_3代中遗传率分别为81.3%、51.1%和77.6%,其3周时抑制效率分别为27.5%、96.1%和75.1%;转基因雌鼠F_0代的第1胎产仔数均高于野生型,而F_1、F_2代B和M片段升高,C片段减少,但差异不显著(P<0.05),此外其F_2代3周子鼠卵巢重和体重显著高于野生型(P<0.05)。综上,INH是体内必需的重要调控基因,不能缺少,过多抑制反而会降低其繁殖性能;遗传稳定性可能随着干扰抑制效率的提高而降低。