干扰INHBA-AS1通过抑制糖酵解途径促进宫颈癌细胞凋亡的作用及机制

目的观察干扰INHBA-AS1通过糖酵解对宫颈癌细胞Hela增殖和凋亡的影响,并探讨其可能的作用机制。方法将宫颈癌细胞Hela细胞分为空白对照组、阴性对照组、干扰INHBA-AS1组、Prosapogenin A(10μM,处理48 h)组、阴性对照+Prosapogenin A组(10μM,处理48 h后转染)和干扰INHBA-AS1+Prosapogenin A(10μM,处理48 h后转染)组。CCK8检测细胞增殖,TUNEL检测细胞凋亡,测试盒检测葡萄糖、乳酸和ATP含量,qRT-PCR检测细胞INHBA-AS1、HK2、PDK1、GLUT1、LDHA的mRNA表达,Western blot法检测HK2、PDK1、GLUT1、LDHA的蛋白表达情况。结果与对照组相比,干扰INHBA-AS1或Prosapogenin A组细胞的增殖被抑制(P<0.05),凋亡被促进,葡萄糖含量显著上升(P<0.05),乳酸、ATP含量显著下降(P<0.05),HK2、PDK1、GLUT1、LDHA的mRNA和蛋白表达均显著下降(P<0.05);而同时使用干扰INHBA-AS1和Prosapogenin A处理细胞会加重上述现象(P<0.05)。结论干扰INHBA-AS1通过抑制糖酵解使宫颈癌细胞Hela的增殖被抑制,凋亡被促进,其机制可能与PDK1相关。

INHBA-AS1通过c-Myc/SCD通路调控宫颈癌HeLa细胞的鸟氨酸代谢和EMT进程

目的:探讨抑制素β亚基A反义RNA1(INHBA-AS1)对宫颈癌HeLa细胞EMT和鸟氨酸代谢途径的影响及其机制。方法:体外常规培养HeLa细胞,实验分为10组:对照组、阴性对照(NC)组、sh-INHBA-AS1组、PluriSIn 1[硬脂酰辅酶A去饱和酶(stearyl CoA desaturase,SCD)抑制剂]组、NC+PluriSIn 1组、sh-INHBA-AS1+PluriSIn 1组、10058-F4(c-Myc抑制剂)组、NC+10058-F4组、sh-INHBA-AS1+10058-F4组、sh-INHBA-AS1+OE-c-Myc组。平板克隆实验检测各组细胞的增殖能力,FCM检测各组细胞的凋亡情况,Transwell小室实验检测各组细胞的侵袭、迁移能力,qPCR法检测各组细胞中INHBA-AS1、c-Myc、SCD和EMT相关基因(N-cadherin、TGF-β、ZEB1)mRNA的表达,WB法检测各组细胞中c-Myc、SCD、EMT相关(N-cadherin、TGF-β、ZEB1)、S-腺苷-甲硫氨酸脱羧酶(SAMDC)和亚精胺/精胺N1-乙酰转移酶(SSAT)蛋白的表达,ELISA检测各组细胞上清液中鸟氨酸脱羧酶(ODC)的含量。结果:敲减INHBA-AS1表达使HeLa细胞的增殖、侵袭和迁移能力显著降低(均P<0.05)而细胞凋亡率显著升高(P<0.05),q PCR、WB法检测结果显示,敲减INHBA-AS1均可显著抑制HeLa细胞中c-Myc、SCD、N-cadherin、TGF-β、ZEB1和SAMDC的表达(均P<0.05),而促进SSAT的表达(P<0.05),并降低HeLa细胞上清液中ODC的含量(P<0.05)。与c-Myc抑制剂和SCD抑制剂单独处理相比,其联合敲减INHBA-AS1后上述作用更加显著(均P<0.05);与sh-INHBA-AS1组相比,进一步过表达c-Myc后HeLa细胞的增殖能力显著升高(P<0.05)、SCD和N-cadherin蛋白表达水平显著升高(P<0.05)、细胞上清液中ODC含量显著升高(P<0.05)。结论:INHBA-AS1可通过c-Myc调控SCD的表达,从而影响HeLa细胞鸟氨酸代谢和EMT进程,进而促进HeLa细胞的增殖、侵袭和迁移能力。

鞣花酸通过调控lncRNA INHBA-AS1/miR-381-3p表达抑制结肠癌细胞的增殖、迁移、侵袭

目的探讨鞣花酸对结肠癌细胞的增殖、迁移、侵袭的影响及分子机制。方法实验设置对照(Con)组、鞣花酸低、中、高浓度组、pcDNA组、pcDNA-INHBA-AS1组、si-NC组、si-INHBA-AS1组、miR-NC组、miR-381-3p组、EA+pcDNA-INHBA-AS1组、EA+anti-miR-381-3p组。四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测细胞增殖抑制率;Transwell检测细胞迁移和侵袭;蛋白质印迹(Western blot)法检测细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂1A(p21)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)蛋白表达;实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测lncRNA INHBA-AS1和miR-381-3p的表达水平;双荧光素酶报告实验验证lncRNA INHBA-AS1和miR-381-3p的靶向关系。结果鞣花酸处理的结肠癌细胞中细胞增殖抑制率显著升高,迁移、侵袭细胞数显著降低,CyclinD1、MMP-2、MMP-9表达水平显著降低,p21表达水平显著升高,lncRNA INHBA-AS1表达水平显著降低,miR-381-3p表达水平显著升高,且呈浓度依赖性(P<0.05)。lncRNA INHBA-AS1靶向调控miR-381-3p,干扰lncRNA INHBA-AS1表达或过表达miR-381-3p均可抑制结肠癌细胞增殖、迁移和侵袭。lncRNA INHBA-AS1过表达或抑制miR-381-3p表达逆转了鞣花酸对结肠癌细胞增殖、迁移、侵袭的抑制作用。结论鞣花酸可通过调控lncRNA INHBA-AS1/miR-381-3p轴抑制结肠癌细胞的增殖、迁移和侵袭。