Characteristics of Antisense Non-coding RNA in the INK4 Locus and Its Roles in Disease

Abstract With the development of genome-wide sequencing technology, 195 types of functional long non-coding RNAs （lncRNAs） have so far been found, and their cellular roles are gradually being revealed. Now lncRNAs have become a hotspot in the life science. These small molecules exist in almost all higher eukaryotes, and have very important regulatory roles in these organisms. This review briefly summarizes recent progress in researches on antisense non-coding RNA in the INK4 locus.

肺癌p14ARF和p16INK4a基因协同表达缺失及其意义

目的 :研究抑癌基因位点INK4a ARF在肺肿瘤细胞中的表达状况 ,揭示p14ARF和p16INK4a协同表达缺失与肺癌发生发展的相关性。方法 :用RT PCR和Westernblot对 6株肺癌细胞 (SPC A 1,Calu 1,H44 6 ,SH77,A5 49,H46 0 )的INK4a ARF基因位点在mRNA、蛋白质水平上进行检测 ,对PCR产物进行纯化和测序分析。结果 :6株肺癌细胞中 ,有 3株细胞 (H46 0 ,Calu 1,A5 49)的p16INK4a基因表达缺失 ,其中 ,Calu 1表达正常p14ARF的mRNA ,而在H46 0和H5 49这两株非小细胞肺癌中 ,p14ARF和p16INK4a发生协同表达缺失。结论 :p14ARF基因与p16INK4a一样 ,是肺肿瘤细胞中的失活靶点之一。揭示了p14ARF缺失导致p5

非小细胞肺癌INK4a和ARF基因甲基化与其蛋白共表达关系的探讨

目的:分析INK4a和ARF基因启动子甲基化与其蛋白共表达之间的关系。方法:选择前期实验中p14ARF和p16INK4a蛋白共表达阴性的非小细胞肺癌(NSCLC)患者35例,共表达阳性的NSCLC患者20例作为研究对象,分别称为(p14+p16)阴性组和(p14+p16)阳性组。运用甲基化特异性PCR(MSP)方法对两组患者癌组织INK4a和ARF基因启动子的甲基化状态进行检测。结果:(p14+p16)阴性组有18例发生INK4a基因甲基化,(p14+p16)阳性组有2例发生INK4a基因甲基化,两组差异有显著意义(P<0.01)。(p14+p16)阴性组有8例发生ARF基因启动子甲基化,(p14+p16)阳性组有2例发生ARF基因启动子甲基化,两组差异无显著意义(P>0.05)。INK4a和ARF基因异常甲基化相互之间无显著相关性(P>0.05)。结论:NSCLC患者肺癌组织INK4a基因甲基化是导致p16INK4a蛋白表达阴性的重要机制;INK4a和ARF基因甲基化可能是相对独立的事件。

P14^(ARF)、P16^(INK4a)基因表达与高危型HPV感染的关系

目的探讨P14ARF、P16INK4a的基因表达与高危型人乳头瘤病毒DNA(HPV DNA)感染的关系。方法采用免疫组化EnVision法,对130例宫颈鳞癌、宫颈上皮内瘤变60例、20例正常宫颈组织进行P16INK4a、P14ARF蛋白基因检测,并采用原位杂交法检测130例宫颈鳞癌、宫颈上皮内瘤变60例、20例正常宫颈组织中的HPV DNA。结果宫颈鳞癌组中P16INK4a、P14ARF蛋白表达率分别为100.0%(130/130)和96.9%(126/130);在60例宫颈上皮内瘤变组中其表达率分别为85.0%(51/60)、81.7%(49/60);在20例正常宫颈组中其表达率分别为10.0%(2/20)、15.0%(3/20),宫颈鳞癌组显著高于正常对照组(P<0.01);正常宫颈组与宫颈上皮内瘤变及宫颈鳞癌组P16INK4a和P14ARF的表达呈显著差异(P<0.05)。HPV16/18在130例宫颈鳞癌中86例(66.2%)表达阳性;在宫颈上皮内瘤变中39例(65.0%)表达阳性;P16INK4a、P14ARF阳性率HPV DNA阳性宫颈鳞癌、宫颈上皮内瘤变组与HPV DNA阴性宫颈鳞癌、宫颈上皮内瘤变组比较无显著差异(P>0.05)。结论P16INK4a、P14ARF蛋白在宫颈上皮内瘤变及宫颈鳞癌组织中呈高表达,有较高的特异性和敏感性,可作为宫颈癌前病变及宫颈癌的诊断指标。

P14^(ARF)和P16^(INK4a)基因在鼻咽癌组织中异常甲基化及其临床意义

目的:通过检测P14ARF和P16INK4a基因启动子区甲基化情况,分析探讨其在鼻咽癌临床诊断和治疗中的意义。方法:运用甲基化特异性PCR对54例鼻咽癌组织和20例正常鼻咽上皮组织的P14ARF和P16INK4a基因启动子区甲基化状态进行检测。结果:鼻咽癌组织中P14ARF和P16INK4a基因启动子区甲基化阳性率分别为20.4%(11/54)和46.3%(25/54),二者总检出率为48.2%(26/54),26例甲基化的癌组织同时出现二者甲基化为10例;而在正常鼻咽上皮组织中未检测到P14ARF和P16INK4a基因启动子区甲基化。结论:鼻咽癌P14ARF和P16INK4a基因启动子区甲基化与患者临床病理特征无明显相关性,为早期事件,有望成为早期分子生物学诊断的标志物,将来还可能作为去甲基化基因治疗的靶点。二者在鼻咽癌发生发展中可能存在协同作用。

p16^(INK4a)/p14^(ARF)基因在细胞衰老和肿瘤抑制中的作用研究进展

细胞衰老发生后细胞在形态和生化成分都发生改变,进而发生生理性功能障碍,最终进入凋亡和死亡程序。细胞衰老是生命体在细胞水平防止永生化和恶变、预防肿瘤发生的一种机制。细胞衰老由多种原因引起,近年来的研究发现,p16INK4a-pRb(视网膜母细胞瘤抗癌蛋白)和p14ARF-p53这2条途径的活化与细胞衰老的启动和调节过程密切相关,对细胞衰老的信号传导通路及其调节因子等方面的深入研究,可以进一步认识细胞增生、衰老进程,以及防治肿瘤的规律,并为衰老相关疾病的治疗提示研究方向。

野生型INK4a/ARF基因共转染对A549细胞生物学行为的影响

背景与目的INK4a/ARF基因是重要的细胞周期调控基因,其表达产物p16INK4a和p14ARF蛋白分别在Rb和p53通路中发挥重要调节作用。本研究将野生型INK4a/ARF基因同时转染到该基因位点缺失的人肺腺癌A549细胞中,研究其对该细胞生物学行为的影响。方法利用阳离子脂质体介导的基因转染技术,将含有人全长野生型INK4a/ARF基因的真核表达重组质粒pcDNA3p16INK4a和pcDNA3p14ARF同时导入A549细胞系中,确定所编码蛋白p16INK4a和p14ARF稳定表达;在设立空白组和空质粒转染组的情况下,进行了转染前后细胞生长曲线、克隆形成率、周期分布、凋亡指数等指标的检测和分析。结果转染INK4a/ARF基因后的细胞G0/G1期比例为59.9%,与未转染(51.2%)及空质粒转染(50.3%)细胞相比差异显著(P值分别为0.043和0.025),同时S期和G2/M期的比例下降;转染后细胞克隆形成率为63%,未转染细胞和空质粒转染细胞分别为85%和87%(P值均<0.01),凋亡指数明显增加,转染INK4a/ARF基因后的细胞凋亡率为8.0%,另两种细胞均为2.7%,差异具有统计学意义(P<0.01)。结论阳离子脂质体可以有效地将INK4a/ARF基因导入A549细胞,并可以抑制A549细胞的生长,促进凋亡作用的增强,为将来肺癌的基因治疗提供了实验依据。

p16^(INK4A)、p14^(ARF)和Ki-67在宫颈癌中的表达特点

目的:研究p16INK4A、p14ARF蛋白和Ki-67在宫颈癌患者中的表达水平,探讨它们之间的相互关系及临床意义。方法:采用免疫组化法对55例宫颈癌标本,40例宫颈上皮内瘤变(CIN)标本和45例正常宫颈标本进行p16INK4A、p14ARF和Ki-67检测。根据细胞核中出现棕褐色染色为阳性细胞的比例分为(-)、(+)、(++)、(+++)。对比各组的阳性表达。结果:随着CIN分期的增高和宫颈癌的发生,p16INK4A、Ki-67的表达有逐渐增高的趋势,宫颈癌患者(-)、(+)、(++)、(+++)的比例与正常宫颈标本比较,差异有统计学意义(P<0.01),CINⅢ期和宫颈癌患者(++)、(+++)的比例与CINⅠ期比较,差异有统计学意义(P<0.01);宫颈癌发生p14ARF的表达有逐渐增高的趋势,但在CIN期(+++)的表达增高不明显,宫颈癌患者p14ARF的表达于正常宫颈标本比较,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:p16INK4A、p14ARF和Ki-67与宫颈癌的形成及进展密切相关。

P14(INK4a/ARF)蛋白在非小细胞肺癌组织中表达的意义

目的 检测非小细胞肺癌组织中P14蛋白的表达 ,研究其预后价值。方法 以P14抗体FL 13 2蛋白对 3 9例患者肺癌组织进行免疫组化染色。结果 3 9例患者中 2 5例 ( 64 .1% )P14蛋白表达阳性 ;临床Ⅰ～Ⅱ期患者的P14蛋白表达率显著高于Ⅲ～Ⅳ期患者 ( 78.0 %比 43 .8% ,P =0 .0 43 ) ;有、无远处转移患者的P14蛋白表达率分别为 78.3 %和 43 .8% ,P =0 .0 43 ;无P14蛋白表达者的 3年生存率明显低于有P14蛋白表达者 ,中位生存期分别为 17月和 45月 ,P =0 .0 2 3 5。结论 肺癌组织中P14蛋白表达阳性的患者有较好的预后 ,检测肺癌组织中P14蛋白表达有助于预测肺癌预后。

小细胞肺癌p14^(ARF)、p16^(INK4a)蛋白表达及其临床意义

目的 研究p14 ARF、p16INK4a蛋白在小细胞肺癌 (smallcelllungcancer ,SCLC)中的表达及其临床意义。方法 应用免疫组织化学S P方法检测 2 4例SCLC癌组织标本中两种蛋白表达。结果 2 4例标本中 ,15例p14 ARF蛋白表达阴性( 62 .5 0 %) ,4例p16INK4a蛋白表达阴性 ( 16.67%) ,3例p14 ARF、p16INK4a蛋白表达均阴性 ( 12 .5 0 %)。p14 ARF、p16INK4a蛋白阴性率均与患者性别、年龄、临床分期及淋巴结转移无显著性差异 (P >0 .0 5 )。结论 SCLC中p14 ARF、p16INK4a蛋白表达阴性是各自独立的事件 ,可能与SCLC的发生有关 ,其中p14 ARF表达阴性占主要地位。

肺癌INK4a/ARF基因缺失与突变研究进展

INK4a/ARF基因位于人第9号染色体短臂2区1带(9p21),是近期发现的新型抑癌基因,其编码产物分别为p16^(INK4a)和p14^(ARF),它们在细胞增殖周期中起负调控作用 本文综述了肺癌INK4a/ARF基因的结构和功能状态,提示该基因异常是肺癌的又一重要分子标志。肺癌INK4a/ARF基因功能的失活,与该基因位点的纯合或杂合缺失。

细胞周期调控基因INK4a-ARF与肿瘤

INK4a ARF基因功能的失活与该基因位点的缺失、点突变和 5′ CpG岛异常甲基化密切相关。由于INK4a ARF基因编码的抑癌蛋白 p16 INK4a、p14 ARF分别对cyclinD CDK4 pRb E2F和MDM2 p5 3通路具有关键性调控功能 ,提示其将成为肿瘤基因治疗的重要靶点。

野生型INK4a/ARF基因共转染对A549细胞药物敏感性的影响

目的 研究野生型INK4a/ARF基因共转染对人肺腺癌A5 4 9细胞药物敏感性的影响。方法 利用阳离子脂质体介导的基因转染技术 ,将含有人全长野生型INK4a/ARF基因的真核表达重组质粒pcDNA3 p16 INK4a和pcDNA3 p14 ARF同时导入该基因位点缺失的人肺腺癌A5 4 9细胞系中 ,确定其编码的蛋白p16 INK4a和p14 ARF稳定表达 ;在设立空白组和空质粒转染组的情况下 ,用 5种不同作用机制的常用肺癌化疗药物 (阿霉素、顺铂、拓朴替康、诺维本和紫杉醇 )作用于转染前后的细胞 ,利用MTT法测定各种不同药物的 5 0 %抑制浓度(IC50 ) ,并测定在该浓度作用下转染细胞的凋亡指数。结果 转染INK4a/ARF基因后 ,A5 4 9细胞对阿霉素和顺铂的IC50 值显著降低 (P <0 0 5 ) ,而拓朴替康、诺维本和紫杉醇的IC50 值无明显变化 (P >0 0 5 ) ;阿霉素和顺铂诱导的凋亡指数也明显高于其他 3种药物。结论 恢复p16 INK4a和p14 ARF蛋白的表达可改变A5 4 9细胞对部分化疗药物的敏感性。

可切除性胰腺癌P19ARF、P16INK4a表达的临床意义

目的 :了解P16INK4a(P16 )和P19ARF(P19)两种抑癌基因在可切除的人胰腺癌组织中的表达及其临床意义。方法 :胰腺癌切除标本 30例 ,用单克隆抗体免疫组化法同时测定P16和P19蛋白的表达 ,单变量和多变量分析P16、P19和主要临床病理指标对胰腺癌生存的影响。结果 :胰腺癌的P16、P19表达率分别为13.3%和 5 0 % ;P16与P19表达无相关性。P16的表达率与胰腺癌的临床病理分期和分级呈负相关 ;有大血管浸润的胰腺癌P19阳性率 (2 0 % )低于无血管浸润者 (72 .2 % ,P =0 .0 1)。P19在局部淋巴结阳性的胰腺癌表达率低于淋巴结阴性者 ,但无统计学意义。单变量分析显示 :肿瘤 >4cm、分期、大血管侵犯、3个以上的淋巴结转移及P16失表达是生存的不利因素 ;多变量分析则发现只有后四者才是独立的生存不利因素。结论 :P16的下调是胰腺癌发生发展的一个重要原因 ,是预后的独立的危险因素和胰腺癌生物学行为高度恶性的重要分子基础 ;P19下调与胰腺癌的大血管浸润和淋巴结转移有关 ,P19异常可能是胰腺癌播散的一种标示。

肺鳞癌INK4a/ARF基因启动子甲基化研究

目的分析肺鳞癌(SCC)及其周围正常肺组织INK4a、ARF基因启动子甲基化改变情况。方法收集外科手术切除标本SCC标本17例,同时选取周围正常肺组织作为对照,运用甲基化特异性PCR(MSP)方法对癌组织及其周围正常肺组织INK4a和ARF基因启动子的甲基化状态进行检测。结果17例SCC组织,13例INK4a扩增阳性,2例ARF扩增阳性;对应的正常肺组织,1例INK4a扩增阳性,1例ARF扩增阳性。卡方检验,INK4a在肺癌组织和正常肺组织之间差异有显著性,ARF在肺癌组织和正常肺组织之间差异无显著性。结论INF4a基因启动子甲基化是SCC的一个普遍性事件,参与SCC的形成过程,可作为SCC的分子诊断标志之一,而ARF基因甲基化在SCC则是一个相对罕见性事件。

P16^(INK4a)和P14^(ARF)蛋白在喉鳞癌中的表达及临床意义

目的探讨P16INK4a和P14ARF蛋白在喉鳞状细胞癌组织中的表达及其临床意义。方法采用免疫组织化学EnVision法检测71例喉鳞状细胞癌组织中P16INK4a和P14ARF蛋白的表达。结果 71例喉鳞状细胞癌标本中,35例(49.3%)P16INK4a蛋白阴性,29例(40.8%)P14ARF蛋白阴性,15例(21.1%)P16INK4a和P14ARF蛋白表达均阴性。P16INK4a和P14ARF蛋白阴性间无相关性(P>0.05)。P16INK4a和P14ARF蛋白阴性率均与患者性别、年龄及临床分期无相关性(P>0.05)。P14ARF蛋白在I～II期病例中强阳性占阳性比例为41.7%,在III～IV期中强阳性比例为11.1%。结论 P16INK4a和P14ARF在喉鳞状细胞癌发生过程中起重要作用,两种蛋白的失活是各自独立的事件。P14ARF蛋白的缺失发生在喉鳞状细胞癌早期。

鼻咽癌组织中P14ARF和P15INK4B基因异常甲基化的研究

目的 通过检测P14肝和P15INK4B基因启动子区甲基化情况,分析其与鼻咽癌发生、发展及临床病理特征的关系,探讨其可能在鼻咽癌临床早期分子生物学诊断和治疗中的作用.方法 运用甲基化特异性聚合酶链式扩增对54例鼻咽癌组织和20例正常鼻咽上皮组织的P14ARF和P15INK4B基因启动子区甲基化状态进行检测,比较两者的差异,并分析鼻咽癌组织中两种基因甲基化与患者临床病理特征的关系,以及两种基因甲基化的相关性.结果 鼻咽癌组织中P14ARF和P15INK4B基因启动子区甲基化阳性率分别为20.4%(11/54)和22.2%(12/54),两者总检出率为27.8%(15/54);而正常鼻咽上皮组织中未检测到P14ARF和P15INK4B基因启动子区甲基化;两组间P14ARF和P15INK4B基因启动子区甲基化阳性率差异有统计学意义(P<0.01).15例甲基化的癌组织同时两种基因同时甲基化为8例,非甲基化39例.P14ARF和P15INK4B基因甲基化与鼻咽癌的临床病理特征均无明显相关性(均P>0.05).结论 P14ARF和P15INK4B基因启动子区甲基化在鼻咽癌的发生、发展中可能存在协同作用,作为鼻咽癌发生的早期事件,有望成为分子生物学早期诊断的标志物,将来还可能作为去甲基化基因治疗的靶点.

INK4a/ARF基因与乳腺癌的关系

INK4a/ARF是直接调控细胞周期并抑制细胞增殖的抑癌基因,本文就INK4a/ARF基因以及p53与乳腺癌的关系作一综述。

INK4/ARF基因座甲基化协同调控与非小细胞肺癌的关系

目的分析INK4/ARF基因座甲基化状态与非小细胞肺癌临床病理特征的相关性及探讨基因座内各编码基因甲基化协同调控的可能性。方法临床收集81例非小细胞肺癌患者手术切除的配对癌灶及癌旁石蜡组织标本,采用甲基化特异性PCR对石蜡组织标本DNA进行p16INK4a、p15INK4b及p14ARF基因甲基化检测,并分析其与临床病理特征的关系。结果癌灶组织中的p16INK4a基因甲基化在鳞状细胞癌中的分布明显高于腺癌(P<0.01),并与肿瘤大小密切相关(P<0.05)。癌灶组织中p16INK4a与p15INK4b基因甲基化状态密切相关(P<0.05)。结论 INK4/ARF基因座启动子区甲基化与非小细胞肺癌发生、发展相关,p16INK4a与p15INK4b基因甲基化状态的关联提示INK4/ARF基因座可能存在表观协同调控方式。