INK4/ARF基因座甲基化协同调控与非小细胞肺癌的关系

目的分析INK4/ARF基因座甲基化状态与非小细胞肺癌临床病理特征的相关性及探讨基因座内各编码基因甲基化协同调控的可能性。方法临床收集81例非小细胞肺癌患者手术切除的配对癌灶及癌旁石蜡组织标本,采用甲基化特异性PCR对石蜡组织标本DNA进行p16INK4a、p15INK4b及p14ARF基因甲基化检测,并分析其与临床病理特征的关系。结果癌灶组织中的p16INK4a基因甲基化在鳞状细胞癌中的分布明显高于腺癌(P<0.01),并与肿瘤大小密切相关(P<0.05)。癌灶组织中p16INK4a与p15INK4b基因甲基化状态密切相关(P<0.05)。结论 INK4/ARF基因座启动子区甲基化与非小细胞肺癌发生、发展相关,p16INK4a与p15INK4b基因甲基化状态的关联提示INK4/ARF基因座可能存在表观协同调控方式。

非小细胞肺癌INK4a和ARF基因甲基化与其蛋白共表达关系的探讨

目的:分析INK4a和ARF基因启动子甲基化与其蛋白共表达之间的关系。方法:选择前期实验中p14ARF和p16INK4a蛋白共表达阴性的非小细胞肺癌(NSCLC)患者35例,共表达阳性的NSCLC患者20例作为研究对象,分别称为(p14+p16)阴性组和(p14+p16)阳性组。运用甲基化特异性PCR(MSP)方法对两组患者癌组织INK4a和ARF基因启动子的甲基化状态进行检测。结果:(p14+p16)阴性组有18例发生INK4a基因甲基化,(p14+p16)阳性组有2例发生INK4a基因甲基化,两组差异有显著意义(P<0.01)。(p14+p16)阴性组有8例发生ARF基因启动子甲基化,(p14+p16)阳性组有2例发生ARF基因启动子甲基化,两组差异无显著意义(P>0.05)。INK4a和ARF基因异常甲基化相互之间无显著相关性(P>0.05)。结论:NSCLC患者肺癌组织INK4a基因甲基化是导致p16INK4a蛋白表达阴性的重要机制;INK4a和ARF基因甲基化可能是相对独立的事件。

肺癌p14ARF和p16INK4a基因协同表达缺失及其意义

目的 :研究抑癌基因位点INK4a ARF在肺肿瘤细胞中的表达状况 ,揭示p14ARF和p16INK4a协同表达缺失与肺癌发生发展的相关性。方法 :用RT PCR和Westernblot对 6株肺癌细胞 (SPC A 1,Calu 1,H44 6 ,SH77,A5 49,H46 0 )的INK4a ARF基因位点在mRNA、蛋白质水平上进行检测 ,对PCR产物进行纯化和测序分析。结果 :6株肺癌细胞中 ,有 3株细胞 (H46 0 ,Calu 1,A5 49)的p16INK4a基因表达缺失 ,其中 ,Calu 1表达正常p14ARF的mRNA ,而在H46 0和H5 49这两株非小细胞肺癌中 ,p14ARF和p16INK4a发生协同表达缺失。结论 :p14ARF基因与p16INK4a一样 ,是肺肿瘤细胞中的失活靶点之一。揭示了p14ARF缺失导致p5

野生型INK4a/ARF基因共转染对A549细胞生物学行为的影响

背景与目的INK4a/ARF基因是重要的细胞周期调控基因,其表达产物p16INK4a和p14ARF蛋白分别在Rb和p53通路中发挥重要调节作用。本研究将野生型INK4a/ARF基因同时转染到该基因位点缺失的人肺腺癌A549细胞中,研究其对该细胞生物学行为的影响。方法利用阳离子脂质体介导的基因转染技术,将含有人全长野生型INK4a/ARF基因的真核表达重组质粒pcDNA3p16INK4a和pcDNA3p14ARF同时导入A549细胞系中,确定所编码蛋白p16INK4a和p14ARF稳定表达;在设立空白组和空质粒转染组的情况下,进行了转染前后细胞生长曲线、克隆形成率、周期分布、凋亡指数等指标的检测和分析。结果转染INK4a/ARF基因后的细胞G0/G1期比例为59.9%,与未转染(51.2%)及空质粒转染(50.3%)细胞相比差异显著(P值分别为0.043和0.025),同时S期和G2/M期的比例下降;转染后细胞克隆形成率为63%,未转染细胞和空质粒转染细胞分别为85%和87%(P值均<0.01),凋亡指数明显增加,转染INK4a/ARF基因后的细胞凋亡率为8.0%,另两种细胞均为2.7%,差异具有统计学意义(P<0.01)。结论阳离子脂质体可以有效地将INK4a/ARF基因导入A549细胞,并可以抑制A549细胞的生长,促进凋亡作用的增强,为将来肺癌的基因治疗提供了实验依据。

INK4基因座中反义非编码RNA调控细胞增殖与凋亡影响动脉粥样硬化的研究进展

动脉粥样硬化是冠心病的重要病理基础,INK4基因座中反义非编码RNA(ANRIL)位于与其相关性最强的遗传易感区段,即9号染色体短臂2区1带(Chr9p21)。ANRIL通过不同的转录剪接方式可产生线性、环状等多种转录本,可调控斑块内相关细胞的增殖和凋亡,与动脉粥样硬化斑块发生发展密切相关。线性ARNIL可通过调节染色质修饰过程调控斑块内血管平滑肌细胞增殖,也可从转录水平调控斑块内巨噬细胞增殖和凋亡;环状ANRIL可调控染色质修饰及干预核糖体RNA加工成熟,进而影响平滑肌细胞的增殖和凋亡。本文对ANRIL的进化特征、转录本的形成及结构、各转录本调节血管细胞增殖和凋亡进而参与动脉粥样硬化的机制进行了系统阐述,以期为深入理解动脉粥样硬化的发病机制,寻找动脉粥样硬化诊治靶点提供依据。

肺癌INK4a/ARF基因缺失与突变研究进展

INK4a/ARF基因位于人第9号染色体短臂2区1带(9p21),是近期发现的新型抑癌基因,其编码产物分别为p16^(INK4a)和p14^(ARF),它们在细胞增殖周期中起负调控作用 本文综述了肺癌INK4a/ARF基因的结构和功能状态,提示该基因异常是肺癌的又一重要分子标志。肺癌INK4a/ARF基因功能的失活,与该基因位点的纯合或杂合缺失。

细胞周期调控基因INK4a-ARF与肿瘤

INK4a ARF基因功能的失活与该基因位点的缺失、点突变和 5′ CpG岛异常甲基化密切相关。由于INK4a ARF基因编码的抑癌蛋白 p16 INK4a、p14 ARF分别对cyclinD CDK4 pRb E2F和MDM2 p5 3通路具有关键性调控功能 ,提示其将成为肿瘤基因治疗的重要靶点。

野生型INK4a/ARF基因共转染对A549细胞药物敏感性的影响

目的 研究野生型INK4a/ARF基因共转染对人肺腺癌A5 4 9细胞药物敏感性的影响。方法 利用阳离子脂质体介导的基因转染技术 ,将含有人全长野生型INK4a/ARF基因的真核表达重组质粒pcDNA3 p16 INK4a和pcDNA3 p14 ARF同时导入该基因位点缺失的人肺腺癌A5 4 9细胞系中 ,确定其编码的蛋白p16 INK4a和p14 ARF稳定表达 ;在设立空白组和空质粒转染组的情况下 ,用 5种不同作用机制的常用肺癌化疗药物 (阿霉素、顺铂、拓朴替康、诺维本和紫杉醇 )作用于转染前后的细胞 ,利用MTT法测定各种不同药物的 5 0 %抑制浓度(IC50 ) ,并测定在该浓度作用下转染细胞的凋亡指数。结果 转染INK4a/ARF基因后 ,A5 4 9细胞对阿霉素和顺铂的IC50 值显著降低 (P <0 0 5 ) ,而拓朴替康、诺维本和紫杉醇的IC50 值无明显变化 (P >0 0 5 ) ;阿霉素和顺铂诱导的凋亡指数也明显高于其他 3种药物。结论 恢复p16 INK4a和p14 ARF蛋白的表达可改变A5 4 9细胞对部分化疗药物的敏感性。

肺鳞癌INK4a/ARF基因启动子甲基化研究

目的分析肺鳞癌(SCC)及其周围正常肺组织INK4a、ARF基因启动子甲基化改变情况。方法收集外科手术切除标本SCC标本17例,同时选取周围正常肺组织作为对照,运用甲基化特异性PCR(MSP)方法对癌组织及其周围正常肺组织INK4a和ARF基因启动子的甲基化状态进行检测。结果17例SCC组织,13例INK4a扩增阳性,2例ARF扩增阳性;对应的正常肺组织,1例INK4a扩增阳性,1例ARF扩增阳性。卡方检验,INK4a在肺癌组织和正常肺组织之间差异有显著性,ARF在肺癌组织和正常肺组织之间差异无显著性。结论INF4a基因启动子甲基化是SCC的一个普遍性事件,参与SCC的形成过程,可作为SCC的分子诊断标志之一,而ARF基因甲基化在SCC则是一个相对罕见性事件。

鼻咽癌组织中P14ARF和P15INK4B基因异常甲基化的研究

目的 通过检测P14肝和P15INK4B基因启动子区甲基化情况,分析其与鼻咽癌发生、发展及临床病理特征的关系,探讨其可能在鼻咽癌临床早期分子生物学诊断和治疗中的作用.方法 运用甲基化特异性聚合酶链式扩增对54例鼻咽癌组织和20例正常鼻咽上皮组织的P14ARF和P15INK4B基因启动子区甲基化状态进行检测,比较两者的差异,并分析鼻咽癌组织中两种基因甲基化与患者临床病理特征的关系,以及两种基因甲基化的相关性.结果 鼻咽癌组织中P14ARF和P15INK4B基因启动子区甲基化阳性率分别为20.4%(11/54)和22.2%(12/54),两者总检出率为27.8%(15/54);而正常鼻咽上皮组织中未检测到P14ARF和P15INK4B基因启动子区甲基化;两组间P14ARF和P15INK4B基因启动子区甲基化阳性率差异有统计学意义(P<0.01).15例甲基化的癌组织同时两种基因同时甲基化为8例,非甲基化39例.P14ARF和P15INK4B基因甲基化与鼻咽癌的临床病理特征均无明显相关性(均P>0.05).结论 P14ARF和P15INK4B基因启动子区甲基化在鼻咽癌的发生、发展中可能存在协同作用,作为鼻咽癌发生的早期事件,有望成为分子生物学早期诊断的标志物,将来还可能作为去甲基化基因治疗的靶点.

沉默INK4基因座中反义非编码RNA对人宫颈癌细胞株HeLa增殖的影响及其机制

目的观察沉默INK4基因座中反义非编码RNA(ANRILA)对人宫颈癌细胞株He La增殖的影响,并探讨其机制。方法取对数生长期He La细胞分为观察组和对照组,分别ANRIL-siRNA、对照siRNA乱序。转染24、48 h时采用CCK-8法观察两组细胞增殖情况(结果以OD450表示)。转染48 h时采用荧光定量PCR法检测两组细胞ANRIL、p21、周期蛋白依赖性激酶6(CDK6)、周期蛋白依赖性激酶2(CDK2)mRNA相对表达量,采用CHIP实验观察两组细胞p21基因H3K27位点三甲基化状态。结果转染24 h观察组、对照组OD450分别为0.55±0.08、0.84±0.11,转染72 h观察组、对照组OD450分别为1.21±0.12、1.82±0.14。转染24、72 h观察组OD450均低于对照组(P<0.05)。转染48 h观察组ANRIL及CDK6、CDK2 mRNA相对表达量低于对照组(P均<0.05),p21 mRNA相对表达量高于对照组(P均<0.05)。转染48 h两组细胞p21基因H3K27位点三甲基化水平观察组、对照组分别为1.19±0.08、5.62±0.21,观察组低于对照组(P<0.05)。结论沉默ANRIL可抑制宫颈癌He La细胞的增殖。其机制是沉默ANRIL可以降低宫颈癌He La细胞p21基因H3K27位点三甲基化水平,促进p21mRNA表达,抑制CDK6、CDK2 mRNA表达,从而抑制宫颈癌He La细胞增殖。

P16INK4a和P19ARF在胃癌中的表达

目的 p16INK4a和p19ARF抑癌基因在可切除胃癌组织中的表达形式,从而对其肿瘤的发生、发展有一个初步认识。方法胃癌切除标本30例的石蜡标本,用单克隆抗体免疫组化ABC法同时测定肿瘤组织的p16、p19蛋白的表达。结果胃癌的p16高分化阳性率85.7%,P19高分化阳性率42.9%。大血管浸润的胃癌p16阳性率(20%)低于无血管浸润者(72.2%,P=0.01),p19阳性率与无血管浸润者无显著差异(10%vs16.7%,P>0.05)。结论 P16基因表达可作为预测胃癌患者预后的指标,P19的异常可能是胃癌后期加速进展的一个因素。

INK4a/ARF抑癌基因与食管癌的研究进展

INK4a/ARF基因位于染色体9p21的CDKN2A位点,它编码两种蛋白p16INK4a和p14ARF,这两个蛋白均为细胞周期调控因子,分别通过p16INK4a/pRB途径和p14ARF/p53途径履行调控细胞周期的职责,对INK4a/ARF位点p16INK4a和p14ARF的结构功能以及与食管癌的关系进行综述。

长链非编码RNA中INK4基因座中反义非编码RNA在糖尿病视网膜病变中的研究现状

糖尿病视网膜病变(DR)发病机制复杂。长链非编码RNA(lncRNA)中INK4基因座中反义非编码RNA(ANRIL)与细胞增生、分化及个体发育过程密切相关,在视网膜血管内皮细胞的异常增生中起重要作用,是DR发病机制研究中的新领域。现有研究发现,ANRIL可能通过核因子-κB、ROS/聚腺苷二磷酸核糖聚合酶信号通路以及与p300、miR-200b、EZH2协同调节VEGF在DR中的表达和功能,发挥其在DR发生发展中的作用。特异性阻断ANRIL及其相关通路,可能成为未来DR临床治疗中的新靶点。

ARF蛋白——p53蛋白的重要调控因子

ARF蛋白是INK4a基因位点编码产物之一。ARF能抑制MDM2介导的p5 3降解和p5 3转录下调 ,某些癌基因和调节因子能通过ARF蛋白调节p5 3蛋白的功能 ,从而对细胞周期进程产生影响。在黑色素瘤、血液系统肿瘤、肺癌、肠道肿瘤中均发现有ARF的突变或缺失 ,ARF蛋白在肿瘤发生发展中可能有重要作用。

Bmi-1在膀胱移行细胞癌组织的表达及与p16 INK4a和p14 ARF的关系

膀胱癌的发生与癌基因的激活与抑癌基因的失活有关。B细胞特异性莫洛尼白血病病毒插入位点1（Bmi-1）基因过度表达可引起细胞的转化和肿瘤的形成。我们通过检测膀胱癌组织和癌旁组织中Bmi-1、p16 INK4a和p14 ARF。基因表达情况，探讨Bmi-1表达与膀胱癌临床分期和病理分级的关系及其与p16 INK4a和p14 ARF的关系。