平糖方药物血清改善INS-1胰腺β细胞脂性凋亡的作用研究

目的观察平糖方药物血清对INS-1胰腺β细胞脂性凋亡的改善作用及机制。方法以软脂酸(palmitic acid,PA)诱导INS-1胰腺β细胞脂性凋亡,采用平糖方药物血清干预。实验分为5组,即大鼠血清对照(RS)组、大鼠血清加PA(PA)组、平糖方低剂量药物血清加PA(PTR L)组、平糖方中剂量药物血清加PA(PTR M)组、平糖方高剂量药物血清加PA(PTR H)组,每组6个复孔。通过TUNEL法检测细胞凋亡,化学发光法检测Caspase-3活性,DCHF-DA掺入法检测细胞内ROS生成的变化,RT-PCR方法检测解偶联蛋白-2(UCP-2)的表达。结果 PA组比RS组的凋亡细胞增多(P<0.01),PTR各组的凋亡细胞同PA组比较有降低的趋势。PA组INS-1胰腺β细胞Caspase-3酶活性增强,PTR M组同PA组比较Caspase-3酶活性降低(P<0.05)。PTR L、M组可抑制由PA引起的细胞内ROS产生增多,与PA组比较差异有统计学意义(P<0.05)。平糖方各组的UCP-2 mRNA表达量均较PA组降低(其中PTR L 1.286±0.373,P<0.01;PTRM 1.627±0.348,P<0.05)。结论平糖方药物血清对INS-1β细胞脂性凋亡有一定的保护作用,并可能通过调节ROS、UCP-2发挥作用。

ADAMDEC1通过Wnt/β-catenin信号通路调控胰腺癌细胞的生长和转移

目的:探究敲减解整联蛋白及金属蛋白酶(a disintegrin and metalloproteinase,ADAM)结构域样癸蛋白1(ADAM domain-like decysin 1,ADAMDEC1)对胰腺癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。方法:利用GEPIA和UALCAN在线数据库对ADAMDEC1在胰腺癌组织中的表达情况进行分析。Western blot检测人胰腺癌细胞系(MIA PaCa-2和PANC-1)和胰腺导管细胞系(hTERT-HPNE)中ADAMDEC1的蛋白表达水平。采用CCK-8实验、集落形成实验、细胞划痕实验和Transwell实验检测敲减ADAMDEC1对胰腺癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响;Western blot检测敲减ADAMDEC1对胰腺癌细胞中迁移、侵袭及Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白表达水平的影响。此外,通过恢复性实验,检测Wnt/β-catenin信号通路激动剂CHIR-99021对敲减ADAMDEC1抑制胰腺癌细胞生长和转移作用的影响。结果:(1)ADAMDEC1在胰腺癌中高表达;(2)敲减ADAMDEC1表达后,胰腺癌细胞增殖、迁移和侵袭能力显著下降;(3)敲减ADAMDEC1后,E-cadherin蛋白表达增加,而基质金属蛋白酶9、N-cadherin和vimentin蛋白表达减少,Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白表达亦减少;(4)CHIR-99021与ADAMDEC1小干扰RNA共处理胰腺癌细胞,可逆转敲减ADAMDEC1对胰腺癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的抑制作用。结论:ADAMDEC1在胰腺癌中高表达,可通过Wnt/β-catenin信号通路调控胰腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭。

乌苏酸对人胰腺癌细胞PANC-1增殖和凋亡的影响

目的探讨乌苏酸对人胰腺癌细胞PANC-1增殖、凋亡的影响。方法以1.25,2.5,5,10,25,50μmol/L乌苏酸培养PANC-1细胞24,48,72 h,采用四氮唑盐(MTT)法测定细胞活性。实验分为对照1组(等体积二甲基亚砜)及乌苏酸低、中、高剂量组(5,10,20μmol/L乌苏酸),显微镜下观察细胞形态,采用Western blot法检测磷脂酰肌醇3激酶(PI3K),磷酸化的蛋白激酶B(p-Akt),磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(p-m TOR),活化半胱氨酸蛋白酶3(Cleaved Caspase-3),B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2),Bcl-2关联X蛋白(Bax)的蛋白表达水平,采用细胞集落形成实验观察细胞增殖情况。实验分为对照2组(等体积二甲基亚砜)和乌苏酸组(10μmol/L乌苏酸),采用细胞划痕实验观察细胞培养48,72 h的迁移情况。利用分子对接实验模拟乌苏酸与PI3K和Akt2的相互作用。结果随着乌苏酸浓度的升高,PANC-1细胞活性逐渐减弱,24,48,72 h时的半数抑制浓度(IC50)分别为7.89,6.26,5.06μmol/L。与对照1组比较,乌苏酸各剂量组细胞逐渐失去原有形态,且随着浓度的增加,变形细胞数目随之增加,且细胞边界模糊不清;细胞数量显著减少(P<0.05);乌苏酸各剂量组细胞Cleaved Caspase-3、Bax蛋白的表达水平均显著升高,乌苏酸中、高剂量组细胞Bcl-2蛋白表达水平显著降低,乌苏酸各剂量组细胞p-m TOR,中、高剂量组细胞p-Akt,高剂量组细胞PI3K蛋白表达水平均显著降低(P<0.05)。与对照2组比较,乌苏酸组细胞48 h,72 h的迁移距离缩短。乌苏酸的乌苏烷型三萜类结构可进入PI3K与Akt2中的三磷酸腺苷(ATP)结合位点竞争性结合疏水口袋,从而影响PI3K和Akt2与ATP的结合,抑制其激活。结论乌苏酸可通过抑制PI3K/Akt/m TOR信号通路的激活而抑制PANC-1细胞的增殖,促进其凋亡。

血清lncRNA ATP1A1-AS1对胰腺癌的诊断价值及其对细胞增殖、凋亡和端粒酶活性的影响

目的探讨血清长链非编码RNA Na+/K+ATP酶A1亚基的反义RNA1(ATP1A1-AS1)对胰腺癌的诊断价值及其对胰腺癌细胞增殖、凋亡和端粒酶活性的影响。方法选取2020年4月至2023年10月在安徽省宣城市人民医院就诊的65例胰腺癌患者为研究对象,并选取同时期60例健康体检者作为对照,qRT-PCR检测两组患者血清中ATP1A1-AS1表达水平,受试者工作特征(ROC)曲线分析血清ATP1A1-AS1对胰腺癌的诊断价值。体外培养胰腺癌细胞PANC-1,通过转染ATP1A1-AS1过表达载体上调PANC-1细胞中ATP1A1-AS1表达,MTT检测上调ATP1A1-AS1表达对PANC-1细胞增殖的影响,流式细胞术检测上调ATP1A1-AS1表达对PANC-1细胞凋亡的影响,Western blotting检测上调ATP1A1-AS1表达对PANC-1细胞中细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、细胞增殖抗原Ki-67、B淋巴细胞瘤2(Bcl-2)和B淋巴细胞瘤2相关蛋白(Bax)蛋白表达的影响,端粒酶重复序列扩增法检测上调ATP1A1-AS1表达对PANC-1细胞端粒酶活性的影响。结果与对照组比较,胰腺癌患者血清中ATP1A1-AS1的表达水平显著降低(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,血清ATP1A1-AS1诊断胰腺癌的灵敏度为83.08%,特异度为86.67%,ROC曲线下面积为0.900。ATP1A1-AS1表达上调,PANC-1细胞增殖能力、端粒酶活性及细胞CyclinD1、Ki-67、Bcl-2蛋白表达水平降低(P<0.05),凋亡率和Bax蛋白表达水平升高(P<0.05)。结论ATP1A1-AS1在胰腺癌患者血清中呈低表达,可能是胰腺癌诊断的潜在生物学标志物。上调ATP1A1-AS1表达可抑制胰腺癌细胞增殖并诱导细胞凋亡,这可能与调控CyclinD1、Ki-67、Bcl-2和Bax蛋白表达及抑制细胞端粒酶活性有关。

CTNND1通过Wnt/β-catenin信号通路调控胰腺癌细胞增殖、迁移和侵袭

目的:研究CTNND1调控胰腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的机制,为胰腺癌精准治疗提供新理论依据。方法:通过生信分析验证CTNND1在胰腺癌和正常组织中的表达,免疫组织化学(IHC)和qPCR进一步验证。Transwell、划痕实验和细胞增殖试验用于研究CTNND1对胰腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。裸鼠皮下成瘤实验检测CTNND1对人胰腺癌细胞成瘤能力的影响。结果:在胰腺癌细胞中敲低CTNND1可以抑制胰腺癌细胞的Wnt/β-catenin信号通路以及增殖、迁移和侵袭能力。加入LiCl(Wnt/β-catenin特异性激活剂)能部分恢复CTNND1敲低胰腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力。裸鼠皮下成瘤显示,敲低CTNND1抑制了肿瘤裸鼠皮下成瘤。结论:敲低CTNND1能从体内外通过Wnt/β-catenin信号通路调控胰腺癌的增殖、迁移和侵袭及皮下成瘤能力。

玄参水提取物对高糖暴露条件下INS-1细胞AMPK的激活作用

目的研究玄参水提取物(AESN)对高糖(HG)条件下INS-1细胞腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)活性的影响。方法将INS-1细胞培养于HG培养基中,并给予不同浓度AESN共孵育处理;利用细胞计数试剂-8(CCK-8)法检测AESN干预对细胞增殖/活力和焦亡小体形成的影响,使用Western blotting法观察AESN对细胞内AMPK表达及磷酸化水平的影响;利用时间分辨-荧光共振能量转移(TR-FRET)实验检测AESN对AMPK激酶活性的影响。结果CCK-8检测结果显示同正常培养条件相比,HG暴露显著降低INS-1细胞增殖/活力并增加焦亡小体形成数量,Western blotting检测结果表明HG暴露可导致细胞内AMPK磷酸化水平下降;而AESN共孵育可呈浓度依赖性地增加INS-1细胞增殖/活力、抑制焦亡小体形成并激活AMPK。TR-FRET实验结果表明,AESN可浓度依赖性增加AMPK激酶活性。结论AESN对HG暴露条件下INS-1细胞AMPK具有激活作用。

岩藻多糖调控G3BP1/NF-κB信号通路影响胰腺癌细胞增殖

目的:探讨岩藻多糖对胰腺癌的影响,并分析其机制。方法:MTT法分析细胞增殖抑制率,GEPIA数据库分析G3BP1在胰腺癌组织中的表达水平及与生存率的关系。qRT-PCR分析GTP酶激活蛋白结合蛋白1(Ras-GTPase-activating protein binding proteins,G3BP1)水平,Western blot法分析p-NF-κBp65、NF-κBp65和IκB-α水平。免疫共沉淀检测G3BP1与p-NF-κBp65之间相互作用。敲低或G3BP1过表达,观察其对岩藻多糖调控细胞增殖以及NF-κB信号通路的影响。裸鼠成瘤实验验证岩藻多糖对裸鼠体内瘤体的瘤重、瘤体积及G3BP1、p-NF-κBp65、NF-κBp65和IκBα水平的影响。结果:1~32μg/mL岩藻多糖抑制capan-1细胞增殖,岩藻多糖48 h IC_(50)为7.729μg/mL。G3BP1在胰腺癌肿瘤组织中的表达明显高于正常组织,G3BP1高表达患者的生存率低于G3BP1低表达患者。2、4、8μg/mL岩藻多糖能下调G3BP1、p-NF-κBp65,上调IκBα水平。Co-IP实验发现G3BP1与p-NF-κBp65相互结合,并且岩藻多糖作用后结合能力降低。敲低G3BP1能促进岩藻多糖抑制capan-1细胞增殖,下调G3BP1、p-NF-κBp65,上调IκBα水平(P<0.05);G3BP过表达能下调岩藻多糖抑制capan-1细胞增殖效果,上调G3BP1、p-NF-κBp65,下调IκBα水平(P<0.05)。体内实验显示,敲低G3BP1能促进岩藻多糖减少瘤体体积、瘤体质量,下调瘤体G3BP1、p-NF-κBp65,上调IκBα水平(P<0.05)。结论:岩藻多糖抑制capan-1细胞增殖,对体内移植瘤抑瘤效果显著,其机制与调控G3BP1/NF-κB信号通路有关。

超声内镜、巨噬细胞抑制因子-1、糖类抗原19-9联合诊断胰腺癌的临床价值分析

目的探究超声内镜、巨噬细胞抑制因子-1(MIC-1)、血清肿瘤标志物糖类抗原19-9(CA19-9)联合诊断胰腺癌的临床价值。方法选取2019年3月至2022年3月在南京医科大学附属苏州市立医院行超声内镜检查的100例高度疑似胰腺癌患者作为观察组,同期来院进行体检的50例健康志愿者作为对照组。采用化学发光法检测CA19-9水平,采用酶联免疫法检测MIC-1水平并进行组间比较。以术后患者的病理检查结果为金标准,比较超声内镜、MIC-1、CA19-9分别及联合应用对胰腺癌的诊断价值。结果2组研究对象的血清CA19-9、MIC-1水平比较差异有统计学意义(P<0.05)。与健康对照组相比较,观察组患者的血清CA19-9、MIC-1水平更高,差异有统计学意义(P<0.05)。超声内镜、MIC-1、CA19-9三者联合诊断的敏感度(84.21%)均低于三者分别诊断(92.11%、90.79%、90.79%),特异度(91.67%)均高于三者分别诊断(79.17%、83.33%、75.00%)。三者联合诊断的阳性预测值为96.97%,阴性预测值为64.71%。结论在对胰腺肿瘤进行良恶性诊断时,采用超声内镜、MIC-1、CA19-9联合诊断可以有效提高其诊断效能。

PPM1A/TGF-β1/Smads轴对胰腺癌PANC-1细胞生物学行为的影响

目的:探讨镁依赖性蛋白磷酸酶1A(PPM1A)/TGF-β1/Smads轴对胰腺癌PANC-1细胞生物学行为的影响及其可能作用机制。方法:①通过组织芯片免疫组织化学染色检测88例胰腺癌组织和14例癌旁正常胰腺组织中PPM1A的表达情况。利用qRT-PCR、免疫荧光实验检测胰腺癌细胞PANC-1、AsPC-1和BxPC-3与正常胰腺导管上皮细胞HPNE中PPM1A的表达情况。②取PANC-1细胞,采用脂质体转染法分4组,分别转染si-NC、si-PPM1A、pcDNA3.1、pcDNA3.1-PPM1A,通过CCK-8和Transwell实验检测细胞增殖、迁移和侵袭能力,Western blot法检测TGF-β1、p-Smad2/Smad2和p-Smad3/Smad3蛋白的表达情况。③取PANC-1细胞,转染si-PPM1A或pcDNA3.1-PPM1A后,再加入TGF-β1信号通路抑制剂SB431542或活化因子TGF-β1,通过CCK-8实验检测细胞增殖能力。结果:①与癌旁正常胰腺组织相比,胰腺癌组织中PPM1A蛋白表达减少(P<0.05)。②与正常胰腺导管上皮细胞HPNE相比,胰腺癌细胞PANC-1、AsPC-1和BxPC-3中PPM1A mRNA和蛋白表达减少(P<0.05)。③与si-NC组相比,si-PPM1A组细胞增殖、迁移和侵袭能力增加,TGF-β1/Smads信号通路中TGF-β1、p-Smad2/Smad2和p-Smad3/Smad3表达水平升高(P<0.05);与pcDNA3.1组相比,pcDNA3.1-PPM1A组细胞上述指标的变化相反(P<0.05)。④SB431542可逆转si-PPM1A对PANC-1细胞增殖的促进作用,TGF-β1可逆转pcDNA3.1-PPM1A对PANC-1细胞增殖的抑制作用(P<0.05)。结论:PPM1A可能通过抑制TGF-β1/Smads信号通路抑制胰腺癌PANC-1细胞的增殖、迁移和侵袭能力。

MicroRNA-105-5p/PPM1A对胰腺癌PANC-1细胞增殖、迁移及侵袭的机制研究

目的探讨microRNA-105-5p(miR-105-5p)/PPM1A对胰腺癌PANC-1细胞增殖、迁移、侵袭及上皮细胞向间质转化(EMT)进程的影响及其潜在作用机制。方法实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miR-105-5p在人胰腺导管上皮细胞hTRET-HPNE和胰腺癌细胞PANC-1、AsPC-1、Bxpc-3中的表达。利用Kaplan-Meier Plotter在线工具探讨miR-105-5p与胰腺癌患者预后的关系。在PANC-1细胞中分别转染mimic NC、miR-105-5p mimic、inhibitor NC、miR-105-5p inhibitor。CCK-8法、划痕实验、Transwell实验分别检测各组细胞的增殖、迁移及侵袭能力;qRT-PCR检测miR-105-5p对E-cadherin、N-cadherin、Vimentin、ZEB1表达的影响。生物信息学方法预测miR-105-5p的候选靶基因,并对候选靶基因进行GO和KEGG富集分析。双萤光素酶实验检测miR-105-5p与PPM1A的靶向关系。qRT-PCR检测在PANC-1细胞中分别转染mimic NC、miR-105-5p mimic、inhibitor NC、miR-105-5p inhibitor后PPM1A的表达。免疫荧光实验检测PPM1A在人胰腺导管上皮细胞hTRET-HPNE和胰腺癌细胞PANC-1、AsPC-1、Bxpc-3中的表达。在PANC-1细胞中分别转染mimic NC+pcDNA3.1、mimic NC+pcDNA3.1-PPM1A、miR-105-5p mimic+pcDNA3.1-PPM1A后,通过挽救实验进一步研究miR-105-5p inhibitor与PPM1A在胰腺癌细胞中的相互作用关系。结果胰腺癌细胞PANC-1、AsPC-1、Bxpc-3中miR-105-5p mRNA相对表达量高于hTRET-HPNE细胞中miR-105-5p mRNA相对表达量(P<0.05),以PANC-1细胞中的相对表达量最高。miR-105-5p高表达与胰腺癌患者的不良预后有关(P<0.05)。miR-105-5p mimic组细胞增殖、迁移及侵袭能力均高于mimic NC组(P<0.05)。与mimic NC比较,miR-105-5p mimic下调E-cadherin mRNA表达,上调N-cadherin、Vimentin、ZEB1 mRNA表达(P<0.05)。转染miR-105-5p inhibitor后得到相反的结果。双萤光素酶实验证实miR-105-5p与PPM1A存在靶向关系。免疫荧光实验显示在胰腺癌细胞PANC-1、AsPC-1、Bxpc-3中PPM1A的荧光强度低于人胰腺导管上皮细胞hTRET-HPNE(P<0.05)。挽救实验表明miR-105-5p可部分挽救PPM1A对PANC-1细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用(P<0.05)。结论miR-105-5p靶向PPM1A促进胰腺癌PANC-1细胞的增殖、迁移及侵袭。

罗汉果醇通过TREM-1/NLRP3通路介导的细胞焦亡对重症急性胰腺炎大鼠肺损伤的影响

目的探讨罗汉果醇对重症急性胰腺炎大鼠肺损伤的影响及其可能的作用机制。方法采用胰胆管逆行注射4%牛磺胆酸钠构建重症急性胰腺炎大鼠肺损伤模型,造模后分为模型组、罗汉果醇低、中、高剂量组(15、30、60 mg·kg^(-1)),另设置假手术组,每组12只。腹腔注射给药,每天1次,共2次。HE染色检测大鼠胰腺及肺组织病理学变化;生化法检测大鼠血清淀粉酶(AMS)、脂肪酶(LPS)水平;ELISA法检测大鼠肺泡灌洗液中炎症因子白介素1β(IL-1β)、白介素18(IL-18)及肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平;比色法检测大鼠肺组织中Caspase-1活性;Western blot检测大鼠肺组织中髓样细胞触发受体-1(TREM-1)蛋白和焦亡相关蛋白NLRP3、Caspasse-1、Gasdermin D(GSDMD)等蛋白表达水平。结果与假手术组比较,模型组大鼠胰腺和肺组织出现明显的病理学损伤,血清AMS和LPS水平、炎症因子IL-1β、IL-18及TNF-α水平、Caspase-1活性以及肺组织中TREM-1、NLRP3、Caspasse-1、GSDMD等蛋白表达水平均显著性升高(P<0.05);与模型组比较,不同剂量罗汉果醇干预可改善大鼠胰腺及肺组织病理学损伤,同时显著降低血清AMS、LPS,炎症因子IL-1β、IL-18、TNF-α,Caspase-1活性和肺组织中TREM-1、NLRP3、Caspasse-1、GSDMD等蛋白表达水平。结论罗汉果醇可能通过抑制细胞焦亡改善重症急性胰腺炎大鼠肺损伤,其作用机制可能与调控TREM-1/NLRP3信号通路有关。

丝胶靶向Akt1调控PI3K/Akt信号通路促进STZ致损伤INS-1细胞增殖

目的探讨丝胶是否通过靶向Akt1调控磷酸肌醇-3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)信号通路促进链脲佐菌素(STZ)致损伤大鼠胰岛素瘤细胞(INS-1细胞)增殖。方法INS-1细胞随机分为4组:对照组(不予任何处理)、模型组(给予10 mmol/L STZ处理细胞)、丝胶组(给予10 mmol/L STZ+600μg/mL丝胶处理细胞)、抑制剂组(给予10 mmol/LSTZ+600μg/mL丝胶+0.3 mmol/L的Akt1抑制剂A-674563处理细胞)。药物作用时间均为24 h。CCK-8法检测各组INS-1细胞存活率。免疫蛋白印迹法(western blot)检测PI3K/Akt信号通路相关蛋白PI3K、p-Akt和增殖相关蛋白增殖细胞核抗原(PCNA)、细胞核增殖相关抗原Ki67(Ki67)的表达情况。结果与对照组相比,模型组INS-1细胞存活率下降(P<0.05),PI3K、p-Akt1、PCNA和Ki67的蛋白表达显著下降(P<0.05);与模型组相比,丝胶组INS-1细胞存活率上升(P<0.05),PI3K、p-Akt1、PCNA和Ki67的蛋白表达显著增多(P<0.05);与丝胶组相比,抑制剂组INS-1细胞存活率下降(P<0.05),p-Akt1、PCNA和Ki67的蛋白表达显著下降(P<0.05)。结论丝胶具有促进STZ致损伤INS-1细胞增殖的作用,其作用机制与丝胶通过靶向Akt1调控PI3K/Akt信号通路有关。

丝胶通过PI3K/Akt信号通路对受损INS-1细胞糖酵解的调控作用

目的观察丝胶对链脲佐菌素(STZ)致损伤大鼠胰岛素瘤细胞(INS-1细胞)PI3K/Akt信号通路和糖酵解的调控作用。方法实验以体外培养的INS-1细胞为研究对象随机分为五组,正常对照组、模型组、丝胶组、Akt1抑制剂组、Akt1激动剂组。运用蛋白印迹和实时荧光定量PCR法检测各分组细胞的磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K),蛋白激酶B(Akt),磷酸果糖激酶-1(PFK1),6-磷酸果糖-2,6-二磷酸酶(PFKFB2)的蛋白及mRNA的表达情况。结果与正常对照组相比,模型组PI3K,p-Akt,PFK1,PFKFB2的蛋白表达显著下降(P<0.05);丝胶组与模型组相比PI3K,p-Akt,PFK1,PFKFB2的蛋白表达显著增高(P<0.05);Akt1抑制剂组与丝胶组相比,p-Akt,PFK1,PFKFB2的蛋白表达显著降低(P<0.05);Akt1激动剂组与丝胶组相比,p-Akt,PFK1,PFKFB2的蛋白呈现上升的趋势。各组INS-1细胞中PI3K,Akt,PFK1,PFKFB2 mRNA的变化趋势与蛋白一致。结论丝胶对STZ致损伤INS-1细胞发挥保护作用的机制可能是,靶向Akt1影响PI3K/Akt信号通路增强糖酵解。

中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白、肾损伤分子-1联合尿微量白蛋白检测对胰腺炎并发急性肾损伤的诊断价值

目的分析尿液中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)、肾损伤分子-1(KIM-1)联合尿微量白蛋白(MAU)检测在急性胰腺炎(AP)并发急性肾损伤(AKI)早期诊断中的价值。方法选取2020年7月至2023年7月北京积水潭医院贵州医院收治的120例AP患者作为研究对象,根据入院后7 d内是否发生AKI分为AKI组、非AKI组,患者均于入院当日采集尿液,检测NGAL、KIM-1、MAU水平。比较两组患者一般资料及尿液NGAL、KIM-1、MAU水平,分析NGAL、KIM-1和MAU水平与急性生理学和慢性健康评估Ⅱ(APACHEⅡ)评分的相关性,采用受试者工作特征曲线(ROC)评估NGAL、KIM-1和MAU单独及联合检测对AP并发AKI的预测价值。结果两组患者年龄、性别、体重指数(BMI)、糖尿病史、高血压史、发病至入院时间、基线血肌酐水平比较,差异均无统计学意义(P>0.05);AKI组APACHEⅡ评分高于非AKI组,差异有统计学意义(P<0.05);AKI组尿液NGAL、KIM-1、MAU水平均高于非AKI组,差异有统计学意义(P<0.05);Pearson相关性分析显示,尿液NGAL、KIM-1、MAU水平与APACHEⅡ评分均呈正相关(P<0.05);ROC曲线显示,尿液NGAL、KIM-1、MAU预测AP并发AKI的最佳截断值分别为158.50 ng/ml、3.23 ng/ml和23.85 mg/L,对应的AUC分别为0.872、0.853和0.841,联合诊断AUC为0.912。结论尿液NGAL、KIM-1和MAU检测对AP并发AKI具有较高的预测价值,可提高早期诊断效能。

血清红细胞分布宽度 载脂蛋白B/载脂蛋白A1比值对急性胰腺炎患者疾病严重程度相关性及预测评估价值

目的探讨红细胞分布宽度(red blood cell distribution width,RDW)、载脂蛋白B/载脂蛋白A1比值(apolipoprotein B/A1,Apo B/A1)对急性胰腺炎(acute pancreatitis,AP)患者疾病严重程度相关性及预后的预测价值。方法选取2019年1月—2022年1月东乡区人民医院收治的60例急性胰腺炎患者为研究对象,根据AP患者病情的严重程度分为轻症急性胰腺炎(mild acute pancreatitis,MAP)20例、中度重症疾病胰腺炎(moderately severe acute pancreatitis,MSAP)20例、重型急性胰腺炎(severe acute pancreatitis,SAP)20例,并选取同期健康体检者22名为对照组,分析4组基本资料和生化指标,采用二元Logistic回归分析AP患者疾病严重程度的影响因素,以受试者工作特征曲线(receiver operating characteristic,ROC)分析RDW、Apo B/A1和联合对AP的预测价值。结果MAP组、MSAP组、SAP组、对照组的RDW、Apo B/A1比较,差异有统计学意义(P<0.05)。AP与RDW、Apo B/A1指标呈正相关(r=0.656、0.518,P<0.05)。AP患者与对照组的RDW、Apo B/A1比值采用二元Logistic回顾分析,并绘制ROC曲线。结果显示,RDW、Apo B/A1比值、联合曲线下面积(area under curve,AUC)分别为0.992(95%CI 0.942~1.000)、0.895(95%CI 0.807~0.952)、0.997(95%CI 0.949~1.000),且联合检测与RDW、Apo B/A1比值单独检测比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论RDW、Apo B/A1联合检测能较好地预测AP患者疾病严重程度,具有较高的预测价值,可为临床医生制定有效的治疗方案提供参考。

过/降表达circSTON2的胰腺癌细胞增殖、迁移、侵袭能力观察

目的观察过/降表达环状RNA-STON2(circSTON2)的胰腺癌细胞株增殖、迁移及侵袭能力变化,初步探讨circSTON2在胰腺癌中的生物学功能。方法体外传代培养人胰腺癌细胞株PANC-1,分为circSTON2过表达组、circSTON2降表达组及对照组,利用质粒转染及siRNA干扰技术分别转染circSTON2过表达质粒、circSTON2-siRNA干扰质粒及空白对照质粒。采用CCK-8法检测培养24、36、48 h时细胞增殖情况,Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力。结果培养24、36、48 h时,细胞增殖能力circSTON2过表达组>对照组>circSTON2降表达组(P均<0.05);迁移细胞数、侵袭细胞数circSTON2过表达组>对照组>circSTON2降表达组(P均<0.05)。结论circSTON2过表达可增强胰腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力,而circSTON2降表达后作用与之相反。

重症胰腺炎患者血清载脂蛋白B/载脂蛋白A1、微管相关蛋白1-轻链3和细胞间黏附分子-1水平在预测并发感染性胰腺坏死中的价值

目的观察重症胰腺炎(SAP)患者血清载脂蛋白B与载脂蛋白A1比值(ApoB/ApoA1)、微管相关蛋白1-轻链3(MAP1-LC3)及细胞间黏附分子-1(ICAM-1)水平,并分析其与患者并发感染性胰腺坏死(IPN)的关系和预测价值。方法选取2019年1月至2022年1月于该院收治的172例SAP患者作为SAP组。收集临床资料及外周静脉血标本,检测患者血清ApoB/ApoA1、MAP1-LC3和ICAM-1水平,同期选取该院70例体检健康者作为对照组。比较SAP患者与体检健康者的血清ApoB/ApoA1、MAP1-LC3和ICAM-1水平差异;根据SAP患者后续有无并发IPN分为IPN组和非IPN组。采用单因素及多因素分析比较两组患者临床资料,分析血清ApoB/ApoA1、MAP1-LC3、ICAM-1水平及其他相关因素与SAP患者并发IPN的关系;并通过绘制受试者工作特征(ROC)曲线,分析血清ApoB/ApoA1、LC3和ICAM-1水平用于预测SAP患者并发IPN的价值。结果SAP组血清ApoB/ApoA1、MAP1-LC3、ICAM-1水平均高于对照组(均P<0.05);单因素分析显示,IPN组ApoB/ApoA1、MAP1-LC3及ICAM-1水平均高于非IPN组(均P<0.05),多因素分析显示,ApoB/ApoA1(β=2.309,P=0.027)、MAP1-LC3(β=5.447,P=0.037)及ICAM-1(β=0.039,P=0.045)水平均是SAP患者并发IPN的影响因素。血清ApoB/ApoA1、MAP1-LC3及ICAM-1水平预测SAP患者并发IPN的曲线下面积(AUC)分别为0.761(95%CI:0.683~0.840)、0.765(95%CI:0.681~0.848)、0.882(95%CI:0.829~0.935);灵敏度分别为76.1%、68.7%、71.6%,特异度分别为61.0%、89.5%、91.4%。联合预测的AUC为0.957,灵敏度为85.1%,特异度为96.2%。结论血清ApoB/ApoA1、MAP1-LC3、ICAM-1水平是SAP患者并发IPN的影响因素,并发IPN的患者ApoB/ApoA1、MAP1-LC3和ICAM-1水平更高,这些指标对于预测SAP患者并发IPN具有一定的价值。

lncRNA TUG1靶向调节miR-31-5p对急性胰腺炎小鼠炎症反应的影响

目的:探讨长链非编码RNA牛磺酸上调基因1(lncRNA TUG1)在急性胰腺炎(AP)中的作用机制。方法:体外培养小鼠胰腺腺泡细胞系(MPC-83),用脂多糖(LPS,10μg/ml)和雨蛙素(Caerulein,100 nmol/L)处理3 h,建立AP模型。实验分为对照组(control组)、AP组、AP+sh-NC组、AP+sh-TUG1组、AP+sh-TUG1+inhibitor-NC组、AP+sh-TUG1+miR-31-5p inhibitor组。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测细胞中lncRNA TUG1和miR-31-5p表达水平;CCK-8法检测细胞活力;流式细胞术检测细胞凋亡;ELISA检测细胞上清液中IL-1β、肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平;双荧光素酶报告基因实验验证lncRNA TUG1和miR-31-5p之间的靶向关系。构建AP小鼠模型,给予相应的干预后,qRT-PCR检测胰腺组织中lncRNA TUG1和miR-31-5p表达水平;试剂盒检测血清中炎症因子IL-1β、TNF-α含量和淀粉酶(AMY)和脂肪酶(Lipase)活性;HE染色观察胰腺组织病理学变化;TUNEL检测胰腺组织中细胞凋亡。结果:在Caerulein和LPS共同处理的MPC-83细胞中lncRNA TUG1水平、细胞凋亡率、IL-1β和TNF-α水平升高,miR-31-5p水平、细胞活力降低(均P<0.05);敲低lncRNA TUG1可上调miR-31-5p,增加细胞活力,降低IL-1β和TNF-α水平,抑制细胞凋亡(均P<0.05);下调miR-31-5p表达可减弱敲低lncRNA TUG1对细胞炎症反应的抑制作用。miR-31-5p是lncRNA TUG1的直接靶标。在体内敲低lncRNA TUG1表达可上调AP小鼠胰腺组织中miR-31-5p表达,降低IL-1β、TNF-α水平,减少细胞凋亡,改善胰腺组织损伤。结论:敲低lncRNA TUG1可能通过上调miR-31-5p表达水平,抑制炎症反应,改善AP。

LncRNA PVT1调控巨噬细胞极化抑制胰腺癌细胞侵袭

目的探讨lncRNA PVT1调控巨噬细胞向M1型极化对胰腺癌细胞侵袭的影响及机制。方法培养单核细胞株THP-1,通过感染NC shRNA慢病毒、PVT1 shRNA慢病毒、miR-NC慢病毒、miR-409-5p慢病毒、miR-409-5p抑制物慢病毒及嘌呤霉素筛选的方法得到稳定转染的THP-1细胞,检测lncRNA PVT1、miR-409-5p、音猬因子(SHH)的表达水平;进行M1型极化诱导后检测TNF-α、IL-1β、IL-6、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的表达水平。稳定转染的THP-1细胞进行M1型极化诱导后与胰腺癌细胞株PANC-1细胞共培养,检测PANC-1细胞的侵袭数目。结果稳定转染PVT1 shRNA后,THP-1细胞中lncRNA PVT1、SHH表达明显降低(NC shRNA组、PVT1 shRNA组lncRNA PVT1分别为1.00±0.12、0.43±0.05;SHH分别为1.00±0.13、0.47±0.05)(均P<0.05),miR-409-5p、TNF-α、IL-1β、IL-6和iNOS表达明显增加(NC shRNA组、PVT1shRNA组的miR-409-5p分别为1.00±0.08、1.83±0.19;TNF-α分别为1.00±0.11、1.93±0.25,IL-1β分别为1.00±0.08、1.77±0.21,IL-6分别为1.00±0.09、2.31±0.20;iNOS分别为1.00±0.13、2.09±0.17)(均P<0.05),共培养体系中PANC-1细胞的侵袭数目明显减少(P<0.05);稳定转染miR-409-5p后,THP-1细胞中SHH表达明显降低(P<0.05),miR-409-5p、TNF-α、IL-1β、IL-6、i NOS表达明显增加(P<0.05),共培养体系中PANC-1细胞的侵袭数目明显减少(P<0.05);稳定转染PVT1 shRNA与miR-409-5p抑制物后,THP-1细胞中SHH表达明显增加,miR-409-5p、TNF-α、IL-1β、IL-6、iNOS表达明显降低(均P<0.05),共培养体系中PANC-1细胞的侵袭数目明显增加(P<0.05)。结论敲低lncRNA PVT1能够促进巨噬细胞M1型极化并抑制胰腺癌细胞侵袭,这一调控作用可能与靶向miR-409-5p/SHH轴有关。

血清纤溶酶原激活物抑制剂-1、单核细胞趋化蛋白-1水平升高有助于诊断重症急性胰腺炎并发胰腺感染

目的:探究重症急性胰腺炎(SAP)患者血清纤溶酶原激活物抑制剂-1(PAI-1)、单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)表达水平对SAP并发胰腺感染的诊断价值。方法:选取132例SAP患者,根据发病2周后是否并发胰腺感染分为感染组(40例)和非感染组(92例)。采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测所有患者入院次日血清中PAI-1、MCP-1水平。采用受试者工作特征曲线(ROC)分析血清PAI-1、MCP-1水平对SAP并发胰腺感染的诊断价值。采用Logistic回归分析影响SAP并发胰腺感染的危险因素。结果:与非感染组比较,感染组住院天数较长,死亡率、手术率、血清PAI-1水平及MCP-1水平较高(P均<0.05);ROC显示,血清PAI-1、MCP-1水平单独诊断SAP并发胰腺感染的曲线下面积(AUC)为0.796、0.760,二者联合诊断SAP并发胰腺感染的AUC为0.845(95%CI:0.773~0.917),敏感度、特异性分别为85.00%、76.10%。Logistic分析显示,PAI-1、MCP-1是重症胰腺炎并发胰腺感染的危险因素(P均<0.05)。结论:SAP并发胰腺感染患者血清PAI-1、MCP-1水平上升,PAI-1联合MCP-1有助于SAP并发胰腺感染早期诊断。