miR-130b-3p通过靶向作用于INTS6促进肝细胞癌生长和转移

目的探讨miR-130b-3p在肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)中的表达水平、临床意义及生物学功能,并初步探讨整合因子复合体亚基6(integrator complex subunit 6,INTS6)是否是其潜在的作用靶点。方法收集65例HCC组织和对应的癌旁组织标本,用real-time PCR检测miR-130b-3p在HCC组织和癌旁组织中的表达;用real-time PCR检测miR-130b-3p在人正常肝细胞(LO2)与肝癌细胞系中的表达; GEO数据库(GSE36915)分析miR-130b-3p在HCC和癌旁组织中的表达;分析miR-130b-3p的表达水平与HCC临床病理特征的相关性;分别应用miR-130b-3p类似物(miR-130b-3p mimics)和miR-130b-3p抑制剂(miR-130b-3p inhibitors)上调和下调MHCC-97L细胞中miR-130b-3p的表达,实验分组包括miR-130b-3p类似物组和相应的对照组以及miR-130b-3p抑制剂组和相应的阴性对照组。Transwell迁移和侵袭实验检测miR-130b-3p对HCC细胞迁移与侵袭能力的影响; MTT实验检测miR-130b-3p对HCC细胞增殖能力的影响;生物信息学工具预测INTS6是否是miR-130b-3p的下游靶点,用荧光素酶报告基因实验以及Western blot分析miR-130b-3p对潜在靶点INTS6的调节作用。结果与癌旁组织相比,miR-130b-3p在HCC组织中的表达明显升高(P <0. 001);与正常肝细胞相比,miR-130b-3p在HCC细胞系中的表达明显升高; GEO数据库(GSE36915)数据显示与癌旁组织相比,miR-130b-3p在HCC组织中表达显著上调(P=0. 035 6); miR-130b-3p的表达水平与肿瘤大小(P=0. 015)、静脉侵犯(P=0. 028)以及TNM分期(P=0. 045)显著相关;下调或者上调MHCC-97L细胞的miR-130b-3p表达后,细胞的迁移、侵袭和增殖能力显著被抑制或者增强;生物信息学分析发现,INTS6可能是miR-130b-3p的作用靶点;荧光素酶报告基因实验显示,miR-130b-3p能够负向调节INTS6-3'UTR的荧光素酶活性;此外,miR-130b-3p抑制剂(miR-130b-3p inhibitors)和miR-130b-3p类似物(miR-130b-3pmimics)分别能上调或者下调MHCC-97L细胞中INTS6的表达水平。结论 miR-130b-3p通过靶向作用于INTS6增强HCC细胞的迁移、侵袭及增殖能力,进而促进HCC的发生发展。

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