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CD163单等位基因表达的iPAMs细胞系的构建及其介导PRRSV感染的特征分析
1
作者
王慧
冯保亮
+4 位作者
向光明
黄雷
刘志国
李奎
牟玉莲
《中国畜牧兽医》
CAS
CSCD
北大核心
2023年第7期2617-2628,共12页
【目的】试验旨在利用CRISPR/Cas9基因编辑技术获得CD 163(cluster of differentiation 163)单等位基因表达的永生化猪肺泡巨噬细胞系(immortalized porcine alveolar macrophages,iPAMs),并探究其介导猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine r...
【目的】试验旨在利用CRISPR/Cas9基因编辑技术获得CD 163(cluster of differentiation 163)单等位基因表达的永生化猪肺泡巨噬细胞系(immortalized porcine alveolar macrophages,iPAMs),并探究其介导猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)感染的特征,为深入研究CD 163基因在PRRSV感染中的作用机制奠定基础。【方法】在猪CD 163基因外显子1区域设计8条向导RNA(single guide RNA,sgRNA),并将其连接到pX458载体中,通过T7E1酶切试验检测不同sgRNA载体的活性;将活性较高的3条sgRNAs表达载体电转染到iPAMs中,通过流式细胞术分选单克隆细胞,对获得的单克隆细胞进行基因型鉴定、蛋白表达检测、脱靶分析以及PRRSV感染分析。【结果】在设计的8条sgRNAs中有3条基因编辑效率在28%以上。基因型鉴定结果表明,50株片段敲除的单克隆细胞中有4株符合预期的CD 163单等位基因表达的iPAMs,效率为8%。蛋白表达检测和脱靶分析结果显示,CD 163单等位基因表达的iPAMs中CD163蛋白表达量显著下降(P<0.05),且在预测位置未发生脱靶现象。PRRSV感染分析显示,CD 163单等位基因表达的iPAMs可以正常感染PRRSV,病毒拷贝数和PRRSV-N蛋白表达量与野生型细胞无显著差异(P>0.05)。【结论】本研究利用CRISPR/Cas9编辑系统构建了可以正常感染PPRSV的CD 163单等位基因表达的iPAMs,为阐明CD163在猪繁殖与呼吸综合征传染病中所起的作用以及培育抗病猪新品种奠定了基础。
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关键词
CD163
猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)
CRISPR/Cas9
永生化猪肺泡巨噬细胞系(
ipam
s)
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职称材料
钻井液降滤失剂P(AMPS-IPAM-AM)的合成与评价
被引量:
14
2
作者
王中华
《钻井液与完井液》
CAS
2010年第2期10-13,共4页
采用氧化-还原引发体系,以丙烯酰胺、N-异丙基丙烯酰胺和2-丙烯酰胺基-2-甲基丙磺酸为原料,合成了P(AMPS-IPAM-AM)共聚物抗高温抗钙钻井液降滤失剂。探讨了单体配比和反应温度对产物性能的影响,借助红外光谱研究了聚合物的结构,初步评...
采用氧化-还原引发体系,以丙烯酰胺、N-异丙基丙烯酰胺和2-丙烯酰胺基-2-甲基丙磺酸为原料,合成了P(AMPS-IPAM-AM)共聚物抗高温抗钙钻井液降滤失剂。探讨了单体配比和反应温度对产物性能的影响,借助红外光谱研究了聚合物的结构,初步评价了共聚物对钻井液性能的影响。结果表明,P(AMPS-IPAM-AM)的最佳合成条件为:n(IPAM)∶n(AM+IPAM)=0.7~0.8,n(IPAM+AM)∶n(AMPS)=0.8~1.0,聚合反应温度为35℃;合成的P(AMPS-IPAM-AM)的热稳定性好,在淡水、盐水、饱和盐水和复合盐水基钻井液中均具有较好的降滤失作用,在220℃下老化后仍能较好地控制钻井液的滤失量;而且对比实验表明,P(AMPS-AM)聚合物在温度超过180℃后的降滤失效果明显降低,而P(AMPS-IPAM-AM)在老化温度达到200℃时仍然具有较强的降滤失作用,其在复合盐水钻井液中的抗温能力明显优于P(AMPS-AM)聚合物,因此该降滤失剂具有良好的抗温、抗盐和抗钙性能。
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关键词
钻井液添加剂
降滤失剂
共聚物
AMPS/
ipam
/AM
超高温
合成
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职称材料
PRRSV感染原代和传代PAM的比较转录组学分析
被引量:
1
3
作者
周艳荣
郝婉君
+4 位作者
卫莹
李洋
柯文婷
肖少波
方六荣
《中国兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2021年第11期2091-2100,共10页
猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)是严重危害世界养猪业的重要病原。PRRSV对原代猪肺泡巨噬细胞(porcine alveolar macrophage,PAM)和传代猪肺泡巨噬细胞系(immortalized porcine al...
猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)是严重危害世界养猪业的重要病原。PRRSV对原代猪肺泡巨噬细胞(porcine alveolar macrophage,PAM)和传代猪肺泡巨噬细胞系(immortalized porcine alveolar macrophage,IPAM)均易感,但在感染早期,PRRSV在IPAM中的感染率显著高于PAM。为了揭示这2种细胞在PRRSV感染后的应答差异,本研究运用Illumina高通量测序技术对PRRSV感染的IPAM和PAM进行转录组测序,结果表明,PRRSV感染PAM和IPAM后能够诱导相似的免疫应答,但PAM的免疫应答反应更强;与代谢相关的基因在PRRSV感染的IPAM中差异更显著。进一步分析发现,PRRSV感染IPAM后下调细胞周期相关基因的表达水平,导致细胞周期停滞在G0/M期,从而促进PRRSV增殖;IPAM抗原递呈相关基因的缺失或低丰度表达可能是IPAM中免疫应答水平较低的原因;Nod-like receptor(NLR)、Toll-like receptor(TLR)、Target of rapamycin(TOR)、adenosine 5'monophosphate-activated protein kinase(AMPK)和phosphatidylinositol 3-kinase-protein kinase B(PI3K-Akt)等信号通路在PRRSV感染的PAM和IPAM中激活状态不同,可能导致了PRRSV在这2种细胞中的增殖差异。本研究结果为深入了解PRRSV感染原代和传代PAM后的应答差异补充了有用的数据。
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关键词
猪繁殖与呼吸综合征病毒
比较转录组学
PAM
ipam
原文传递
题名
CD163单等位基因表达的iPAMs细胞系的构建及其介导PRRSV感染的特征分析
1
作者
王慧
冯保亮
向光明
黄雷
刘志国
李奎
牟玉莲
机构
中国农业科学院北京畜牧兽医研究所
天津市宁河原种猪场有限责任公司
中国农业科学院深圳农业基因组研究所
出处
《中国畜牧兽医》
CAS
CSCD
北大核心
2023年第7期2617-2628,共12页
基金
国家自然科学基金(32072690)
科技创新2030重大项目(2022ZD040200401)
天津市科技计划项目(22ZXZYSN00030)。
文摘
【目的】试验旨在利用CRISPR/Cas9基因编辑技术获得CD 163(cluster of differentiation 163)单等位基因表达的永生化猪肺泡巨噬细胞系(immortalized porcine alveolar macrophages,iPAMs),并探究其介导猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)感染的特征,为深入研究CD 163基因在PRRSV感染中的作用机制奠定基础。【方法】在猪CD 163基因外显子1区域设计8条向导RNA(single guide RNA,sgRNA),并将其连接到pX458载体中,通过T7E1酶切试验检测不同sgRNA载体的活性;将活性较高的3条sgRNAs表达载体电转染到iPAMs中,通过流式细胞术分选单克隆细胞,对获得的单克隆细胞进行基因型鉴定、蛋白表达检测、脱靶分析以及PRRSV感染分析。【结果】在设计的8条sgRNAs中有3条基因编辑效率在28%以上。基因型鉴定结果表明,50株片段敲除的单克隆细胞中有4株符合预期的CD 163单等位基因表达的iPAMs,效率为8%。蛋白表达检测和脱靶分析结果显示,CD 163单等位基因表达的iPAMs中CD163蛋白表达量显著下降(P<0.05),且在预测位置未发生脱靶现象。PRRSV感染分析显示,CD 163单等位基因表达的iPAMs可以正常感染PRRSV,病毒拷贝数和PRRSV-N蛋白表达量与野生型细胞无显著差异(P>0.05)。【结论】本研究利用CRISPR/Cas9编辑系统构建了可以正常感染PPRSV的CD 163单等位基因表达的iPAMs,为阐明CD163在猪繁殖与呼吸综合征传染病中所起的作用以及培育抗病猪新品种奠定了基础。
关键词
CD163
猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)
CRISPR/Cas9
永生化猪肺泡巨噬细胞系(
ipam
s)
Keywords
CD163
Porcine reproductive and respiratory syndrome virus(PRRSV)
CRISPR/Cas9
immortalized porcine alveolar macrophages(
ipam
s)
分类号
S828.9 [农业科学—畜牧学]
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职称材料
题名
钻井液降滤失剂P(AMPS-IPAM-AM)的合成与评价
被引量:
14
2
作者
王中华
机构
中原石油勘探局钻井工程技术研究院
出处
《钻井液与完井液》
CAS
2010年第2期10-13,共4页
文摘
采用氧化-还原引发体系,以丙烯酰胺、N-异丙基丙烯酰胺和2-丙烯酰胺基-2-甲基丙磺酸为原料,合成了P(AMPS-IPAM-AM)共聚物抗高温抗钙钻井液降滤失剂。探讨了单体配比和反应温度对产物性能的影响,借助红外光谱研究了聚合物的结构,初步评价了共聚物对钻井液性能的影响。结果表明,P(AMPS-IPAM-AM)的最佳合成条件为:n(IPAM)∶n(AM+IPAM)=0.7~0.8,n(IPAM+AM)∶n(AMPS)=0.8~1.0,聚合反应温度为35℃;合成的P(AMPS-IPAM-AM)的热稳定性好,在淡水、盐水、饱和盐水和复合盐水基钻井液中均具有较好的降滤失作用,在220℃下老化后仍能较好地控制钻井液的滤失量;而且对比实验表明,P(AMPS-AM)聚合物在温度超过180℃后的降滤失效果明显降低,而P(AMPS-IPAM-AM)在老化温度达到200℃时仍然具有较强的降滤失作用,其在复合盐水钻井液中的抗温能力明显优于P(AMPS-AM)聚合物,因此该降滤失剂具有良好的抗温、抗盐和抗钙性能。
关键词
钻井液添加剂
降滤失剂
共聚物
AMPS/
ipam
/AM
超高温
合成
Keywords
Drilling fluid additive
Filter reducer
Copolymer
AMPS/
ipam
/AM
Ultra-high temperature
Synthesis
分类号
TE254.4 [石油与天然气工程—油气井工程]
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职称材料
题名
PRRSV感染原代和传代PAM的比较转录组学分析
被引量:
1
3
作者
周艳荣
郝婉君
卫莹
李洋
柯文婷
肖少波
方六荣
机构
华中农业大学动物医学学院农业微生物学国家重点实验室
出处
《中国兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2021年第11期2091-2100,共10页
基金
中国博士后科学基金资助项目(2020M672380)
国家自然科学基金资助项目(31490602)
国家“973”计划基金资助项目(2014CB542700)。
文摘
猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)是严重危害世界养猪业的重要病原。PRRSV对原代猪肺泡巨噬细胞(porcine alveolar macrophage,PAM)和传代猪肺泡巨噬细胞系(immortalized porcine alveolar macrophage,IPAM)均易感,但在感染早期,PRRSV在IPAM中的感染率显著高于PAM。为了揭示这2种细胞在PRRSV感染后的应答差异,本研究运用Illumina高通量测序技术对PRRSV感染的IPAM和PAM进行转录组测序,结果表明,PRRSV感染PAM和IPAM后能够诱导相似的免疫应答,但PAM的免疫应答反应更强;与代谢相关的基因在PRRSV感染的IPAM中差异更显著。进一步分析发现,PRRSV感染IPAM后下调细胞周期相关基因的表达水平,导致细胞周期停滞在G0/M期,从而促进PRRSV增殖;IPAM抗原递呈相关基因的缺失或低丰度表达可能是IPAM中免疫应答水平较低的原因;Nod-like receptor(NLR)、Toll-like receptor(TLR)、Target of rapamycin(TOR)、adenosine 5'monophosphate-activated protein kinase(AMPK)和phosphatidylinositol 3-kinase-protein kinase B(PI3K-Akt)等信号通路在PRRSV感染的PAM和IPAM中激活状态不同,可能导致了PRRSV在这2种细胞中的增殖差异。本研究结果为深入了解PRRSV感染原代和传代PAM后的应答差异补充了有用的数据。
关键词
猪繁殖与呼吸综合征病毒
比较转录组学
PAM
ipam
Keywords
PRRSV
comparative transcriptomics
PAM
ipam
分类号
S852.65 [农业科学—基础兽医学]
原文传递
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
CD163单等位基因表达的iPAMs细胞系的构建及其介导PRRSV感染的特征分析
王慧
冯保亮
向光明
黄雷
刘志国
李奎
牟玉莲
《中国畜牧兽医》
CAS
CSCD
北大核心
2023
0
下载PDF
职称材料
2
钻井液降滤失剂P(AMPS-IPAM-AM)的合成与评价
王中华
《钻井液与完井液》
CAS
2010
14
下载PDF
职称材料
3
PRRSV感染原代和传代PAM的比较转录组学分析
周艳荣
郝婉君
卫莹
李洋
柯文婷
肖少波
方六荣
《中国兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2021
1
原文传递
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0
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