灭活大肠杆菌与脂多糖诱导猪肠黏膜上皮细胞表达RegⅢγ的机理研究

试验旨在探索革兰氏阴性菌大肠杆菌(Escherichia coli,E.coli)及其表面分子脂多糖(LPS)诱导胰腺再生蛋白Ⅲγ(RegⅢγ)表达调控的机制。首先,用不同浓度灭活E.coli(10^(9)、10^(8)、10^(7)、10^(6)、10^(5)、10^(4)CFU/mL)和LPS(0.01、0.1、1、5、10、20、40、80μg/mL)诱导猪肠黏膜上皮细胞(IPEC-JⅡ),用MTT法测D490 nm值,检测E.coli和LPS对IPEC-JⅡ细胞活力的影响;其次,用不同浓度灭活E.coli(10^(7)、10^(6)、10^(5)CFU/mL)和LPS(0.01、0.1、1、5μg/mL)处理IPEC-JⅡ细胞24 h,用实时荧光定量PCR和Western blotting检测RegⅢγmRNA和蛋白的表达;最后,用1μg/mL LPS处理IPEC-JⅡ细胞24 h,用实时荧光定量PCR和Western blotting检测p65、p38、JNK、ERK mRNA和蛋白表达及磷酸化水平。结果显示,除0.01μg/mL LPS不抑制IPEC-JⅡ细胞活力外,其他浓度的灭活E.coli和LPS均可抑制IPEC-JⅡ细胞活力,且10^(9)、10^(8)CFU/mL E.coli和10、20、40、80μg/mL LPS组细胞活力极显著下降(P<0.01);与对照组相比,10^(7)、10^(6)和10^(5)CFU/mL E.coli均能诱导RegⅢγ表达增加,且10^(5)CFU/mL E.coli组RegⅢγmRNA表达量极显著高于对照组(P<0.01),蛋白表达量显著高于对照组(P<0.05);0.01、0.1、1和10μg/mL LPS均能诱导RegⅢγ表达增加,且0.1和1μg/mL LPS组RegⅢγmRNA表达量极显著高于对照组(P<0.01),RegⅢγ蛋白表达虽有增加趋势,但差异不显著(P>0.05);与对照组相比,1μg/mL LPS组p65、p38 mRNA表达量极显著增加(P<0.01),JNK、ERK mRNA表达量显著增加(P<0.05);同时,p38、JNK蛋白表达量和磷酸化水平均极显著增加(P<0.01),p65蛋白磷酸化水平显著增加(P<0.05),ERK蛋白和磷酸化水平均增加,但差异不显著(P>0.05)。以上结果表明,灭活E.coli和LPS均可诱导RegⅢγ表达,1μg/mL LPS可增加p65、p38和JNK蛋白的磷酸化水平。