湘西黄牛IGF–IR基因的群体遗传多态性及其与生长性状的关联分析

为探讨湘西黄牛的分子遗传特征,寻找与湘西黄牛生长性状相关的分子标记,用PCR和基因测序技术检测了湘西黄牛IGF–IR基因部分序列的碱基突变,并采用PCR–RFLP方法进行了群体遗传多态性分析。结果表明:PCR扩增序列为616 bp,与预期结果相符,测序的序列中存在34个单核苷酸多态性(SNPs)位点,其中1个SNP已有报道(g.551G>T),33个SNPs为首次发现;g.551G>T位点在湘西黄牛群体中存在A和B 2个等位基因,A为优势等位基因,检测到AA、AB和BB 3种基因型;该位点在湘西黄牛群体中呈中度多态,达到了Hardy–Weinberg平衡状态(P>0.05);将湘西黄牛IGF–IR基因的多态性与其生长性状进行关联分析,结果表明,g.551G>T位点对湘西黄牛的体高、体长、胸围和体重无显著影响(P>0.05)。

IRS1基因rs7578326位点多态性与2型糖尿病合并高甘油三酯关联研究

目的:探究胰岛素受体底物-1(IRS1)基因单核苷酸多态性(SNP)位点rs7578326与2型糖尿病合并高甘油三酯的关系,揭示不同基因型对2型糖尿病合并高甘油三酯的影响。方法:采用问卷调查、临床研究、Sanger测序等分子生物学研究方法,将IRS1基因rs7578326位点多态性作为目标,采用SPSS统计分析,确定不同组间的基因型和等位基因频率差异。结果:IRS1基因rs7578326位点等位基因为A、G,等位基因A、G在T2DM+高甘油三酯组和对照组的分布频率依次为85.8%、14.2%,76.3%、23.7%,在高甘油三酯组和T2DM组的分布频率依次为83.3%、16.7%,76.1%、23.9%。与对照组相比,T2DM+高甘油三酯组和高甘油三酯组等位基因频率差异显著(P<0.05),T2DM组无显著差异(P>0.05)。T2DM+高甘油三酯组中AG+AA型人群TG、LDL-C水平均显著高于GG型(P<0.05)。结论:IRS1基因rs7578326位点等位基因A与蒙古族2型糖尿病合并高甘油三酯关联。

猪IRS1基因对C2C12细胞系增殖分化的影响

本课题组在前期研究中发现IRS1是民猪和大白猪背最长肌中存在表达差异的一个关键基因,为了深入探讨IRS1在骨骼肌细胞中发挥的生物学功能,本研究首先将猪的IRS1基因完整编码区序列连入pcDNA3.1载体内,构建过表达质粒,同时人工合成IRS1的siRNA干扰序列,在C2C12细胞系内过表达或干扰IRS1基因,使用qRT-PCR技术检测生肌决定因子家族基因(MyoD、MyoG和Myf5)、决定肌纤维类型的MyHC I、MyHC IIa、MyHC IIb和MyHC IIx基因以及PI3K、Akt、FoxO1基因的表达变化情况。结果表明,干扰IRS1基因后,肌细胞分化受阻,MRFs表达有下降趋势,过表达IRS1后,MRFs在不同分化时间发生了显著上调,说明IRS1对MyoD、Myf5和MyoG的转录有促进作用。过表达IRS1基因后,决定肌纤维类型的MyHC IIa基因和MyHC IIx基因表达水平均在诱导分化第6天时发生显著上调,干扰IRS1基因后,MyHC I型肌纤维在第4天和第6天、MyHC IIx型在第6天时的表达量均发生了显著下调,说明IRS1可影响肌纤维类型。干扰IRS1基因后,诱导分化初期(2 d)Akt的表达量出现显著下调,到了诱导分化末期(6 d),FoxO1表达量出现显著上调,说明IRS1表达的变化可以激活IRS1/Akt/FoxO1信号通路。

蛋氨酸铬对鲤糖代谢相关酶活性及IR、GLUT2和SGLT基因表达的影响

为探究蛋氨酸铬(CrMet)对鲤Cyprinus carpio糖代谢相关酶活性及糖代谢相关基因表达的影响,以酪蛋白为蛋白源,豆油为脂肪源,配制7组纯化饲料,其中Cr^(3+)水平分别为0(对照)、0.1、0.2、0.4、0.8、1.6、3.2 mg/kg。选取初始体质量为(40.95±4.80)g的鲤,随机分为7组,分别投喂7种饲料,每个组设置3个重复,每个重复放60尾鱼,饲养8周后,检测其肝胰脏糖代谢相关酶活性;禁食48 h后再投喂,再投喂0、3、6、12、24、48 h时检测Cr^(3+)水平为0(对照)、0.8、3.2 mg/kg时鱼肝胰脏IR、GLUT2和肠道SGLT基因的表达量。结果表明:添加0.8 mg/kg Cr^(3+)组的组己糖激酶(HK)、丙酮酸激酶(PK)、磷酸果糖激酶(PFK)和琥珀酸脱氢酶(SDH)活力均显著高于对照组(P<0.05),磷酸酵式丙酮酸激酶(PEPCK)活力显著低于对照组(P<0.05);而添加Cr^(3+)并未对葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PDH)活力产生显著影响(P>0.05);投喂24、48 h时,0.8 mg/kg Cr^(3+)组IR mRNA表达量显著高于0、3.2mg/kg Cr^(3+)组(P<0.05);投喂3 h时,0.8、3.2 mg/kg Cr^(3+)组GLUT2 mRNA表达量均显著高于对照组(P<0.05),12、24、48 h时,0.8 mg/kg Cr^(3+)组GLUT2 mRNA表达量显著高于0、3.2 mg/kg Cr^(3+)组(P<0.05);而不同Cr^(3+)添加水平对鲤肠道SGLT mRNA表达量无显著性影响(P>0.05)。研究表明,在饲料中添加CrMet能够提高鲤对糖的利用能力,建议Cr^(3+)添加水平为0.8 mg/kg。

猪IRS4基因多态性、表达差异及其与脂肪沉积性状的关联分析

本研究旨在检测猪IRS4基因多态性及其在17种组织中的表达水平,寻找基因内与脂肪沉积性状QTL效应相关的分子标记。本研究采用比较测序方法搜寻到IRS4基因的3个SNPs,分别是在启动子上的g.96C>G,外显子上的同义突变g.1829T>C和错义突变g.1794T>C(p.Phe432Leu)。RT-PCR检测后发现,IRS4基因在垂体、下丘脑中高度表达,在其他组织中弱表达或不表达。在白色杜洛克×二花脸F2资源家系、苏太猪群体、二花脸群体、杜长大三元杂商品猪及中国地方野猪中,用PCR-RFLP方法对IRS4的3个SNPs位点进行判型,然后分析它们的基因频率及其与4点(肩、胸、腰、臀部)背膘厚、腹脂重、肌内脂肪含量和眼肌面积的相关性。结果发现,g.96C>G位点在F2家系(含有SSCX QTL)中分离程度很低,被首先排除作为潜在因果突变(QTN)的可能性。g.1794T>C和g.1829T>C位点在所有检测的西方猪种(白色杜洛克和杜长大)是均为TT基因型,而它们的CC基因型频率在二花脸猪中分别为65%和100%。在不同群体中标记关联分析结果显示,g.1794T>C与F2个体所有脂肪沉积表型均极显著相关(P<0.01),但它在苏太猪中仅与IMF显著相关(P<0.05),且与二花脸猪表型关联不显著(P>0.05);g.1829T>C则不仅与F2个体所有脂肪沉积表型均极显著相关(P<0.01),而且与苏太猪的4点膘厚和眼肌面积呈显著或极显著相关。此外,生物信息学分析发现,g.1794T>C错义突变可能对IRS4蛋白的功能影响不大。结果提示,该错义突变也不太可能是影响脂肪沉积的QTN,而g.1829T>C与F2和苏太猪的脂肪沉积性状都显著关联,故其可作为这些性状选育的分子标记,并值得深入研究。

抗Ia单克隆抗体对异基因小鼠皮肤移植物的影响

目的 探讨抗Ia抗体对移植皮片存活期的影响。方法 用A .TL鼠 (H 2 k)皮肤及淋巴细胞免疫A .TH鼠(H 2 S) ,取脾细胞与骨髓瘤细胞 (P3U1 )融合后 ,经HAT培养基选择性培养 ,得到杂交瘤细胞 ,用补体依赖的细胞毒试验检测上清中的抗体与人B细胞反应的活性 ,阳性孔细胞以有限稀释法进行克隆化 ,得到抗Ia单克隆抗体 ,预先将抗Ia抗体注入异基因皮肤移植的受体小鼠腹腔后 ,观察移植皮片存活期。结果 实验组皮肤移植物存活期与对照组相比明显延长 (P <0 .0 1 )。

IRS2基因G1057D变异与中国汉族人肥胖型2型糖尿病的相关性(英文)

目的研究IRS2基因G1057D突变与中国汉族人2型糖尿病(type2diabetesmellitus,T2DM)的相关性。方法选取辽宁汉族人T2DM组218例,健康对照组221名,各分为肥胖和非肥胖两个亚组。应用聚合酶链反应限制性片段长度多态性方法筛查IRS2G1057D突变并探讨与T2DM的相关性。结果(1)IRS2G1057D总突变频率为29%。非肥胖DM组DD型频率显著低于非肥胖对照组,Logistic回归分析显示DD型OR值为0.265;而肥胖DM组DD型频率则显著高于肥胖对照组,Logistic回归分析显示DD型的OR值为3.991。(2)在非肥胖亚组:DM组DD型的WHR高于同组GG型(P<0.01);对照组DD型的FPG及2hCP低于同组GG型(P<0.05,P<0.01),HOMAB高于同组GG型(P<0.01)。在肥胖亚组:DM组DD型的WHR、HOMAIR及2hPG、2hINS、2hCP均高于同组GG型,HOMAB低于同组GG型;对照组DD型的WHR、2hINS、HOMAIR及HOMAB也分别高于及低于同组GG型(均P<0.05)。结论IRS2基因G1057D突变以肥胖为中介与T2DM相关联。