糖络宁对DPN中IRE1-TRAF2-XBP-1途径的影响

目的探讨糖络宁对糖尿病周围神经病变(DPN)大鼠内质网应激IRE1-TRAF2-XBP-1途径的影响。方法以高脂饲料联合链脲佐菌素诱导SD大鼠致DPN模型,经糖络宁干预12周后,采用苏木精-伊红(HE)染色法观察大鼠坐骨神经形态的变化,采用免疫荧光法检测DPN大鼠坐骨神经EDEM、PDI和TRAF2蛋白表达,采用Western blot法检测DPN大鼠坐骨神经细胞凋亡途径P-JNK和caspase-3的蛋白表达。选用RSC96细胞株,采用高糖环境培养的施万细胞模型,用糖络宁含药血清分别干预24h和48h,采用高内涵分析方法分别测定糖络宁含药血清对施万细胞中EDEM、PDI、TRAF2和P-JNK蛋白表达的影响。结果 HE染色结果显示,模型组大鼠坐骨神经髓神经脱髓鞘严重;糖络宁低、高剂量组坐骨神经脱髓鞘现象得到改善,坐骨神经髓鞘积分吸光度显示,模型组比空白组明显降低(P <0. 05),糖络宁高剂量组得到明显改善(P <0. 05);免疫荧光结果显示,糖络宁高低剂量组能使EDEM和PDI表达增加(P <0. 01,P <0. 05),TRAF2表达降低(P <0. 01,P <0. 05); Western blot法检测结果显示,糖络宁高低剂量均显示P-JNK和caspase-3的表达降低。细胞实验中,24h和48h干预后的150mmol/L葡萄糖组EDEM与PDI显著性降低(P <0. 01),TRAF2与P-JNK显著性升高(P <0. 01);高糖高剂量组的EDEM在24h干预后的表达显著升高(P <0. 01),而P-JNK表达显著降低(P <0. 05); PDI在48h干预后的表达显著升高(P <0. 01);高糖高、低剂量组的TRAF2在24h和48h干预后均显著降低(P <0. 01)。结论糖络宁能够改善受损的坐骨神经结构,与糖络宁影响内质网应激相关IRE1-TRAF2-JNK途径相关,通过促进EDEM和PDI的表达,抑制TRAF2、P-JNK和caspase-3的表达,从而抑制神经细胞凋亡,改善DPN。

复方丹参滴丸通过调控IRE1-TRAF2-ASK1-JNK通路降低内质网应激和自噬保护血管平滑肌细胞

目的探讨复方丹参滴丸通过调控内质网应激和自噬保护血管平滑肌细胞的分子机制。方法50例动脉粥样硬化患者随机分为两组,一组正常治疗,另一组加入复方丹参滴丸并进行临床疗效观察。将血管平滑肌细胞分为对照组、ox-LDL模型组、复方丹参滴丸组、复方丹参滴丸+内质网应激抑制剂组、复方丹参滴丸+内质网应激诱导剂组。检测增殖情况,测定各组血管细胞舒张功能因子与氧化应激情况,分别检测内质网应激标志蛋白,自噬标志蛋白及凋亡相关蛋白表达情况,并检测IRE1-TRAF2-ASK1-JNK信号通路的激活情况。结果与对照组相比,ox-LDL模型组细胞的各项指标显示其处于内质网应激、高氧化应激、高自噬状态,并且发现IRE1-TRAF2-ASK1-JNK通路被过度激活。而与ox-LDL模型组相比,复方丹参滴丸组和复方丹参滴丸+内质网应激抑制剂组的上述指标均明显好转,IRE1-TRAF2-ASK1-JNK通路被过度激活得到改善,且内质网应激抑制剂更为明显,复方丹参滴丸+内质网应激诱导剂组则明显逆转了复方丹参滴丸的好转。结论复方丹参滴丸通过抑制IRE1-TRAF2-ASK1-JNK通路的过度激活,降低内质网应激,维持适当自噬,抑制细胞异常增殖和凋亡,从而保护血管平滑肌细胞。

IRE1-TNAF2信号转导通路在Hcy诱导PC12细胞凋亡中的作用

目的探讨内质网应激(ERS)IRE1-TNAF2信号转导通路在同型半胱氨酸(Hcy)致大鼠嗜铬细胞瘤(PC12)细胞凋亡中的作用。方法 Hcy作用于神经生长因子诱导的PC12细胞。MTT检测5mmol.L-1Hcy不同时间作用的PC12细胞活性;流式细胞仪检测不同浓度Hcy作用24h后细胞凋亡率;RT-PCR观察IRE1、TNAF2及caspase-12 mRNA表达水平变化。结果经Hcy处理后PC12细胞发生凋亡,并呈浓度和时间依赖性。与对照组相比,IRE1 mRNA和TRAF2 mRNA表达水平增加(P<0.05),Caspase-12 mRNA表达也相应增高(P<0.05)。结论 Hcy可诱导PC12细胞凋亡,IRE1-TNAF2信号转导通路的激活在其中起重要作用。