IRF8靶向铁死亡在急性肺损伤中的作用及机制研究

目的探讨干扰素调节因子8(interferon regulatory factor 8,IRF8)在急性肺损伤(acute lung injury,ALI)中的作用及其机制。方法采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(RT-qPCR)和蛋白免疫印迹(WB)检测体内外ALI模型中IRF8 mRNA和蛋白的表达。体外构建稳定过表达和敲低IRF8的A549细胞系,采用RT-qPCR检测炎症相关基因mRNA的表达;WB检测凋亡相关基因的表达。分别选取12只同窝阴性对照小鼠和12只Irf8敲除品系小鼠,构建ALI模型,收集造模后的小鼠肺组织并称重;收集并检测肺泡灌洗液中总细胞数以及总蛋白含量。采用苏木精-伊红染色及免疫荧光分析肺组织炎症浸润情况;利用RT-qPCR检测Irf8敲除小鼠肺组织炎症相关基因mRNA的表达;TUNEL染色分析肺组织凋亡情况;采用WB分别在体内外ALI模型中检测铁死亡相关信号分子的蛋白表达。结果IRF8在体内体外ALI中表达上调;体外敲低IRF8加剧细胞内炎症以及细胞凋亡,反之,过表达IRF8可在体外ALI模型中发挥保护作用;敲除Irf8加重小鼠肺损伤;进一步机制探索发现IRF8通过调控铁死亡相关信号分子表达从而减轻肺损伤。结论IRF8通过靶向铁死亡在肺损伤中发挥保护作用,为肺损伤的治疗提供潜在靶点。

瑞香素调节STING/TBK1/IRF3信号通路对脓毒症大鼠免疫炎症反应的影响

目的探究瑞香素调节STING/TBK1/IRF3信号通路对脓毒症大鼠免疫炎症反应的影响。方法选用80只雄性Sprague Dawley(SD)大鼠,将大鼠随机分为4组,假手术组20只;其余60只按照盲肠结扎穿刺法(CLP)构建脓毒症小鼠模型,腹腔注射不同剂量瑞香素,分为无瑞香素模型组(0 mg/kg)、低剂量组(2.5 mg/kg)、高剂量组(5 mg/kg),每组20只;模型组及假手术组腹腔注射等量0.1%DMSO。观察CLP建模后的各组大鼠存活率。收集肺、肾、肝和脾组织进行病理组织学分析。ELISA检测大鼠血清炎症因子(TNF-α、IL-6、IL-1β),流式细胞术检测外周血中的T淋巴细胞亚群,Western blotting检测STING/TBK1/IRF3信号通路蛋白表达变化。结果与假手术组相比,模型组大鼠生存率降低(P<0.05),各个脏器组织损伤明显,血清炎症因子(TNF-α、IL-6、IL-1β)水平上升(P<0.05),外周血CD4^(+)比例、CD4^(+)/CD8^(+)比值均降低(P<0.05),CD8^(+)比例、Th1/Th2比值均升高(P<0.05),STING、p-TBK1/TBK1、p-IRF3/IRF3蛋白表达均下调(P<0.05)。与模型组相比,瑞香素高剂量组提高了大鼠生存率(P<0.05),各脏器组织损伤明显减轻,血清炎症因子水平降低(P<0.05),外周血CD4^(+)比例、CD4^(+)/CD8^(+)比值升高(P<0.05),CD8^(+)比例、Th1/Th2比值降低(P<0.05),STING、p-TBK1/TBK1、p-IRF3/IRF3蛋白表达升高(P<0.05)。结论瑞香素可通过调节STING/TBK1/IRF3信号通路,改善脓毒症大鼠免疫炎症反应。

伴IRF4重排的大B细胞淋巴瘤的临床病理特征及预后分析

目的 探讨伴IRF4重排的大B细胞淋巴瘤(large B-cell lymphoma with IRF4 rearrangement, LBCL-IRF4r)的临床病理学特征、诊断和鉴别诊断。方法 收集8例LBCL-IRF4r临床资料,采用HE染色、免疫组化EnVision两步法、原位杂交和FISH法进行检测,观察组织学、免疫表型和分子遗传学特征,并结合相关文献进行复习。结果 8例LBCL-IRF4r中,男女比为1.67∶1,年龄10~53岁,平均25.8岁,其中发生于扁桃体5例,鼻咽2例,左腹股沟淋巴结1例。镜下肿瘤呈滤泡、弥漫或滤泡和弥漫混合的生长模式,肿瘤细胞为典型的中心母细胞或中等至大的母细胞样细胞,具有细腻的染色质和不明显的核仁,核分裂象、凋亡小体易见,未见星空现象。免疫表型:8例LBCL-IRF4r的肿瘤细胞均弥漫强表达CD20(8/8)、PAX5(2/2)、CD79a(3/3)、BCL6(8/8)和MUM-1(8/8),表达CD10(7/8)、BCL2(5/8)和CD5(4/8),不表达Cyclin D1、CD23、CD30,Ki67增殖指数70%~95%。EBER原位杂交均阴性。FISH检测8例均有IRF4基因分离(8/8),部分病例有BCL6基因分离(1/2),未检出MYC(0/4)和BCL2(0/3)基因分离。结论 LBCL-IRF4r好发于儿童和青少年,弥漫性强表达MUM-1,具有特征性IG∷IRF4基因重排,预后好,需与其它类型的大B细胞淋巴瘤鉴别。

易黄汤对脾虚湿热型宫颈癌小鼠皮下移植瘤cGAS/STING/IRF-3信号通路及相关免疫因子的影响

目的探讨易黄汤对脾虚湿热型宫颈癌小鼠皮下移植瘤环磷酸鸟苷-腺苷酸合成酶(cGAS)/干扰素刺激基因(STING)/干扰素调节因子-3(IRF-3)信号通路及相关免疫因子的影响。方法选取6~8周龄SPF级雌性BALB/c小鼠50只,随机分为造模组40只和空白组10只。空白组正常喂养,造模组通过湿热环境及高脂高糖饮食建立脾虚湿热型小鼠模型,当小鼠出现嗜卧懒动、易激惹、形体消瘦、进食及饮水量减少、毛发疏松粗糙、粪便时干时溏、肛温稍有增加则认为造模成功。将2×106个/mL对数生长期HPV16阳性人宫颈癌CaSki细胞悬液0.2 mL接种于上述50只小鼠右腋下,5~7 d后可触及直径≥5 mm结节时即认为皮下移植瘤造模成功。将造模组按随机数字表法分为模型组和易黄汤低剂量、中剂量、高剂量组,每组10只。低、中、高剂量组均按体质量40.0 mL/kg分别予含生药浓度0.25、0.50、1.00 g/mL易黄汤药液灌胃,模型组和空白组予同等剂量生理盐水灌胃,均隔日1次,干预4周。干预后计算5组小鼠胸腺、脾脏指数和瘤质量、抑瘤率;ELISA法检测5组小鼠血清白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;支链DNA信号扩增法检测5组小鼠皮下移植瘤组织HPV E6 mRNA转录水平;Western blot测定5组小鼠移植瘤组织中cGAS、STING、IRF-3蛋白表达量。结果与空白组比较,模型组胸腺和脾脏指数、IL-6、TNF-α水平显著下降(P<0.05),HPV E6 mRNA转录水平显著增加(P<0.05);易黄汤不同剂量组中以高剂量组的抑瘤率最高为(35.42±4.86)%(P<0.05);与模型组比较,低、中、高剂量组胸腺和脾脏指数、IL-6、TNF-α水平及cGAS、STING和IRF-3蛋白表达量显著增加(P<0.05),皮下移植瘤质量及HPV E6 mRNA转录水平显著降低(P<0.05),且降低程度与易黄汤剂量成正比。结论脾虚湿热能促进CaSki细胞生长、HPV表达增加,易黄汤可能通过激活cGAS/STING/IRF-3信号通路增强免疫功能,从而抑制HPV表达及宫颈癌小鼠移植瘤生长。

斑石鲷irf3基因鉴定及其在虹彩病毒感染下的表达模式

干扰素调节因子(irf3)是干扰素调节因子(IRF)家族的一员,是I型干扰素依赖性免疫反应的主要转录调节因子,在针对DNA和RNA病毒的先天免疫反应中发挥重要作用。本研究中,斑石鲷irf3基因(Oplegnathus punctatus interferon regulatory factors 3,Opirf3)来自实验室斑石鲷基因组数据库,经分析鉴定Opirf3的CDS序列全长1362 bp,可编码453个氨基酸,预测其蛋白分子量为50.0 ku,理论等电点为4.97,有一个IRF结构域和一个IRF-3结构域。荧光定量分析结果显示,Opirf3在斑石鲷肝脏、鳃、心脏、皮肤、脾脏、肠、脑、肾脏、胃和头肾组织均有表达;虹彩病毒感染7 d时,免疫组织肝脏、脾脏和肾脏中Opirf3的表达水平显著上调。斑石鲷肾细胞系体外刺激实验显示,不同浓度poly I:C刺激后,Opirf3的表达量较对照组均显著升高,poly I:C浓度为100μg/mL时,肾脏细胞中Opirf3的相对表达水平升高,为对照组的86.8倍。siRNA干扰后,斑石鲷肾细胞系中Opirf3表达水平显著下调30%,下游基因IFN-α、CD40、CD80和IL-1β显著下调,IL-6显著上调。以上结果可能表明Opirf3基因参与了I型IFN在斑石鲷抗虹彩病毒过程中的先天免疫反应。本研究可为斑石鲷抗病分子育种提供理论依据。

吉富罗非鱼IRF9基因克隆及表达特征分析

【目的】明确吉富罗非鱼(Oreochromis niloticus)干扰素调节因子9基因(OnIRF9)的结构特征和组织表达模式,以及无乳链球菌感染和Poly(I:C)刺激后的免疫应答情况,为揭示IRF9在罗非鱼免疫应答中的作用机制提供理论依据,进而丰富鱼类的IRF免疫学知识。【方法】通过RACE扩增OnIRF9基因cDNA序列,通过ExPASy、SMART、SignalP-5.0、TMHMM-2.0和Euk-mPLoc 2.0等在线软件进行生物信息学分析,并采用实时荧光定量PCR检测OnIRF9基因在健康吉富罗非鱼组织中的表达特征及无乳链球菌感染和Poly(I:C)刺激后的表达变化。【结果】OnIRF9基因cDNA序列全长1828 bp,包含50 bp的5'端非编码区(5'-UTR)、485 bp的3'端非编码区(3'-UTR)和1293 bp的开放阅读框(ORF),共编码430个氨基酸残基。OnIRF9蛋白分子量为48.42 kD,理论等电点(pI)为6.23,含有IRF典型的DBD结构域和IAD结构域,不含信号肽和跨膜结构域。OnIRF9氨基酸序列与其他硬骨鱼类IRF9氨基酸序列的相似性为56.2%~95.7%,其中与美妊丽鱼IRF9氨基酸序列的相似性最高(95.7%);基于IRF9氨基酸序列相似性构建的系统发育进化树也显示,吉富罗非鱼与其他参考鱼类聚为一簇,尤其与美妊丽鱼的亲缘关系最近。OnIRF9基因在健康吉富罗非鱼脑、血液、肌肉、肝脏、皮肤、心脏、脾脏、头肾、肠道和鳃组织中均有表达,以脑组织中的相对表达量最高,显著高于其他组织(P<0.05),而鳃组织中的相对表达量最低。经无乳链球菌感染和Poly(I:C)刺激后,OnIRF9基因在吉富罗非脾脏、头肾和脑组织中的相对表达量在6 h内均极显著上升(P<0.01),但其相对表达量达到峰值的时间并不一致,提示OnIRF9基因在各组织中响应免疫应答时可能具有互补协调性。【结论】OnIRF9具有IRF典型的结构域(DBD和IAD),尤其是DBD结构域的功能在脊椎动物中较保守;OnIRF9基因在中枢神经系统中发挥重要作用,且参与吉富罗非鱼抵御病原体入侵的免疫应答反应。

基于IRF模型的高中物理课堂师生论证话语分析

论证话语是科学论证的表达方式之一,也是高中物理课堂的重要组成部分。基于IRF课堂话语模型对四节中青赛课堂进行转录、编码,采用序贯分析法探索师生论证话语之间的交互关系。研究发现,教师的开放性提问有利于激发学生的高水平论证回答;针对学生低水平的回答,则需要教师采取追问等策略引导学生进行论证。针对学生整体论证水平不高、课堂缺乏反驳要素等问题,研究提出“加强理论学习,规范实践过程”“挖掘实验资源,拓宽学科视野”“设置开放问题,鼓励质疑批判”“营造良好氛围,提升整体水平”等建议。

IRF6通过激活MMP-12转录促进肺腺癌转移的实验研究

目的探讨干扰素调节因子6(interferon regulatory factor 6,IRF6)对肺腺癌(lung adenocarcinoma,LUAD)细胞转移的影响及可能调控机制。方法从GEPIA和Ualcan在线数据库获取IRF6在LUAD组织和正常肺组织中的表达情况。采用实时荧光定量PCR(qPCR)检测IRF6和基质金属蛋白酶12(matrix metallopeptidase 12,MMP-12)在LUAD细胞和正常人支气管上皮细胞中的表达情况。分别采用sh-NC和sh-IRF6质粒转染LUAD细胞,Transwell小室实验检测两组细胞的迁移能力。采用染色质免疫共沉淀(ChIP)实验检测MMP-12启动子富集情况;采用荧光素酶报告基因实验验证IRF6和MMP-12的靶向关系。结果在线数据库分析结果显示,LUAD组织中IRF6表达显著高于正常组织。与正常细胞(BEAS-2B)比较,A549和Calu3细胞中IRF6表达显著升高(5.82±0.92,7.11±1.31,P<0.01)。与sh-NC组比较,sh-IRF6转染组A549和Calu3细胞的迁移数减少(52±9.23和63±11.38 vs.21±4.24和33±6.11),差异有统计学意义(P<0.01);sh-IRF6转染组A549和Calu3细胞的MMP-12表达降低为0.31±0.06和0.45±0.11,差异有统计学意义(P<0.01)。ChIP实验结果表明,相对于阴性对照Anti-IgG组,在Anti-IRF6组A549和Calu3细胞的MMP-12启动子富集度升高了(31.24±5.78)倍和(26.27±4.11)倍,差异有统计学意义(P<0.01)。荧光素酶报告基因实验显示,干扰IRF6后,A549和Calu3细胞的野生型MMP-12转录活性显著降低为0.28±0.04和0.38±0.06(P<0.01)。干扰IRF6的A549和Calu3细胞中过表达MMP-12使细胞迁移数由25±4.21和36±7.28增加为48±8.89和60±11.17(P<0.01)。结论IRF6在LUAD细胞中高表达,敲低IRF6表达能够显著抑制LUAD细胞转移。

IRF8新发移码突变的基因功能分析

目的对反复肺炎患儿队列病因筛查中发现的干扰素调节因子8基因(interferon regulator factor 8,IRF8)新发突变(c.1266dupA)进行分子细胞水平的功能研究与验证。方法针对IRF8突变序列构建野生与突变蛋白过表达载体,通过质粒转染或构建慢病毒感染不同工具细胞,通过qPCR、Western blot、免疫荧光等实验手段检测其表达差异及对下游炎症相关基因表达调控的改变。结果IRF8野生及突变过表达载体构建成功,且转染效率可观,包装成的慢病毒感染效率亦较高。突变基因IRF8(c.1266dupA)相较于野生型IRF8转录水平降低,表达蛋白的相对分子质量略增大,表达量降低,突变蛋白IRF8mut相对野生型IRF8蛋白核质比增加,IRF8(c.1266dupA)对下游ISRE元件的抑制功能增强。结论IRF8新发移码突变属于功能获得型(gain of function,GOF)突变。

基于IRF理理论的高中数学课堂对话教学策略研究

IRF理论强调教学互动、学生响应以及教师反馈的重要性.文章通过阐述IRF理论的核心概念和其在高中数学教学中的价值,分析了当前高中数学课堂对话教学中存在的学生参与度不均衡、教师提问技巧不足和反馈质量参差不齐的问题.针对上述问题,文章提出了基于IRF理论的高中数学课堂对话教学策略,即构建“互动—响应—反馈”的教学模式、设计具有思考性和启发性的问题以及提供及时、准确的反馈,以期提升教师的专业素养和教学能力,促进高中数学课堂对话教学的效果和质量,培养适应新时代发展要求的创新型人才.

伴IRF4重排的大B细胞淋巴瘤临床病理及分子遗传学特征

目的探讨伴IRF4重排的大B细胞淋巴瘤(LBCL-IRF4)临床病理及分子遗传学特征。方法收集湖北省十堰市太和医院(湖北医药学院附属太和医院)2017-12—2020-12诊断的2例LBCL-IRF4,采用HE染色、免疫组化及荧光原位杂交的方法,观察组织学、免疫表型及分子遗传学特征,并结合文献进行复习。结果2例患者中男女各1例,年龄分别为11岁、7岁,发病部位分别在颈部淋巴结(例1)和扁桃体(例2);形态上,例1膨胀性生长构型;例2弥漫性浸润构型;免疫组化示肿瘤细胞表达全B细胞标记物,2例均弥漫表达CD10、Bcl-6、MUM1及Bcl-2,Ki-67增殖指数均大于80%。2例均出现IRF4基因断裂重排。结论LBCL-IRF4是一种少见并具有独特的临床病理和分子遗传学特征的大B细胞淋巴瘤,好发于儿童和年轻人,主要累及Waldeyer环或头颈部淋巴结,治疗后预后较好。

汉语初级口语操练课IRF会话的多模态互动分析——以北美在华汉语短期项目为例

IRF会话是口语课堂中师生会话的典型结构,也是课堂互动的重要话语特征。本文以北美在华汉语短期项目初级口语操练课的示范视频为语料,采用Norris的多模态互动分析方法,使用ELAN6.4对语料进行标注,通过数据统计与分析,考察初级汉语口语操练课IRF会话中教师的多模态使用情况。结果显示,教师综合调用视觉、听觉、肢体、环境等模态与学生进行互动,其中,肢体与听觉模态为主模态;各交际模态在IRF不同话步中呈现出不同分布特征与功用;教师可根据互动目标采用不同模态配置来构建不同话步的身份角色。本研究丰富了多模态互动分析下的汉语口语课堂话语研究,对今后汉语多模态教学的开展及教师多模态教学能力的培养具有重要实践启示。

地高辛抑制mTORC2-IRF4信号阻抑巨噬细胞M2极化改善肺纤维化

目的 探讨地高辛对博来霉素(bleomycin, BLM)诱导的肺纤维化小鼠的保护作用及机制。方法 采用气管内滴注BLM(5 mg·kg^(-1))制备肺纤维化小鼠模型。造模后d 3~28,灌胃给予地高辛(1、0.2 mg·kg^(-1)·d^(-1))、吡非尼酮(300 mg·kg^(-1)·d^(-1))。从肺组织病理等方面探讨地高辛干预作用。采用IL-4(20μg·L^(-1))诱导小鼠肺泡巨噬细胞(mouse alveolar macrophages, MHS)M2极化模型,给予地高辛(10、1μmol·L^(-1))处理,采用免疫荧光、qPCR、Western blot检测地高辛对巨噬细胞M2极化相关蛋白及基因表达的作用。结果 地高辛(1、0.2 mg·kg^(-1)·d^(-1))有效减轻肺组织炎性细胞浸润、肺泡结构破坏、纤维组织增生、肺泡间隔增厚,下调肺组织I、Ⅲ型胶原表达,降低M2型巨噬细胞标志物CD206及p-mTORser2481、p-AKTser473的表达。地高辛(10、1μmol·L^(-1))明显抑制IL-4诱导MHS的Arg^(-1)、Fizz-1、CTGF mRNA水平和Arg^(-1)、CD206蛋白水平;地高辛(10、1μmol·L^(-1))明显降低mTOR、AKT的磷酸化蛋白水平、降低转录因子IRF4蛋白水平,对mTOR、AKT总蛋白水平无影响。结论 地高辛可以有效改善BLM诱导的肺纤维化小鼠,其机制可能与抑制mTOR信号阻抑巨噬细胞M2极化有关。

HPV16 E6-295T/G、E7-647A/G多态性位点在子宫颈鳞状细胞癌中的分布及对IRF9的影响

目的分析HPV16 E6-295T/G、E7-647A/G多态性位点在子宫颈鳞状细胞癌、CIN1中的分布及其在维吾尔族与汉族之间分布的特点,探讨其对IRF9表达的影响。方法运用TCGA数据库及GEPIA数据库分析子宫颈癌组织中IRF9的表达及其与子宫颈癌肿瘤分级的关系;收集67例维吾尔族子宫颈鳞状细胞癌标本、21例维吾尔族CIN1标本,68例汉族子宫颈鳞状细胞癌标本和28例汉族CIN1标本,从收集的标本中提取DNA,PCR扩增E6和E7基因,PCR产物纯化后测序。将HPV16感染阳性标本进行免疫组化检测。结果维吾尔族子宫颈鳞状细胞癌标本中E6-295T/G、E7-647A/G变异分别为31例(46.27%)和7例(10.45%),CIN1标本中变异均为7例(33.33%)。汉族子宫颈鳞状细胞癌标本中E6-295T/G、E7-647A/G变异分别为12例(17.65%)和37例(54.41%),CIN1变异分别为8例(28.57%)和13例(46.43%)。维吾尔族子宫颈鳞状细胞癌中E6-295T/G的变异率高于汉族,汉族子宫颈鳞状细胞癌中E7-647A/G的变异率高于维吾尔族,差异有统计学意义(P<0.05)。CIN1标本中两民族间E6-295T/G和E7-647A/G的变异,差异无显著性(P>0.05)。免疫组化结果显示,IRF9在子宫颈鳞状细胞癌中的表达高于CIN1(P<0.05),子宫颈鳞状细胞癌标本中E6-295G/E7-647A变异组IRF9的表达高于E6-295T/E7-647G变异组和E6-295T/E7-647A未变异组(P<0.05)。E6-295T/E7-647G变异组与E6-295T/E7-647A未变异组的IRF9蛋白表达差异无显著性(P>0.05)。结论维吾尔族子宫颈鳞状细胞癌中HPV16 E6-295T/G变异高于汉族,汉族E7-647A/G变异高于维吾尔族。HPV16 E6-295T/G变异的子宫颈鳞状细胞癌组织中IRF9蛋白表达水平增高,可能在子宫颈癌的发生中起作用。

奶牛乳房炎相关IRF5基因CDS区克隆及表达分析

【目的】研究奶牛干扰素调节因子5(Interferon regulatory factor 5,IRF5)基因在奶牛乳腺组织及乳腺上皮细胞炎症中的表达模式。【方法】利用RT-PCR和测序技术克隆得到IRF5基因的编码区(Coding sequence,CDS)序列,并采用生物信息学方法分析IRF5基因及其特性;利用qPCR技术检测IRF5基因及相关干扰素调节因子3(Interferon regulatory factor 3,IRF3)和MyD88基因的表达量。【结果】IRF5基因的CDS长度为1500 bp,编码499个氨基酸,存在47个潜在磷酸化位点,氨基酸组成中脯氨酸(Pro)和亮氨酸(Leu)所占比例较高。IRF5蛋白分子式为C_(2524)H_(3901)N_(671)O_(728)S_(20),主要存在于细胞核和线粒体,理论等电点为5.38,是碱性亲水且不稳定的非分泌蛋白。蛋白互作分析结果显示,IRF5蛋白可能与骨髓分化初级反应蛋白(MyD88)、白细胞介素-1受体相关激酶1(IRAK1)、C-C基序趋化因子4(CCL4)、组蛋白乙酰转移酶p300(EP300)和核受体共激活因子3异构体X1(NCOA3)等蛋白相互作用,与机体或细胞的炎症反应有关。qPCR结果表明,与健康奶牛相比,IRF5基因在乳房炎奶牛的乳腺组织中的表达量极显著上调(P<0.01)。在乳腺上皮细胞中,与对照组(0 h)相比,IRF5及其相关的Myd88和IRF3基因在LPS诱导乳腺上皮细胞炎症反应的3、6和12 h的表达量均极显著上调(P<0.01)。【结论】IRF5基因在奶牛乳房炎过程中表达量上调,可能通过上述基因参与促进奶牛乳房炎症反应。

鱼类干扰素调控因子(IRF)的抗病毒作用研究现状及进展

干扰素调控因子(IRF)家族是最重要的转录因子家族之一,具有多种生物学功能,如抗病毒、抗菌、免疫调节和细胞凋亡等。IRF家族目前在鱼类组织中呈现组成型表达,但表达水平因组织而异。目前IRF家族成员包括IRF1-11,其中IRF11为硬骨鱼特有,IRFs蛋白结构相对保守,含有DBD和IAD两个结构域。鱼类中IRF家族成员的抗病毒作用主要通过调控IFN和ISG及其他抗病毒因子转录表达来实现,其中IRF1/3/6/7/9/11主要作为转录激活因子不断发挥作用,而IRF2/4/5/8/10是双功能因子,根据靶基因激活或抑制转录来发挥功能。本文综述了鱼类IRF家族成员的表达及调控抗病毒反应的分子机制,有助于阐明IRF家族在鱼类免疫系统中的生物学功能。

干眼患者结膜上皮细胞及泪液中IRF4和sST2的表达情况及临床意义

目的:探讨干眼患者结膜上皮细胞及泪液中干扰素调节因子4(IRF4)、可溶性致癌抑制因子2(sST2)表达情况及其临床意义。方法:选取本院2019-01/2021-12期间收治的94例干眼患者作为干眼组,同期选取97例行眼科检查的体检者作为对照组,收集研究对象结膜上皮细胞及泪液,记录临床指标泪膜破裂时间(BUT)、角膜荧光素染色(CFS)评分、基础泪液分泌试验(SⅠt)。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测结膜上皮细胞IRF4、sST2水平,采用酶联免疫吸附(ELISA)法检测泪液IRF4、sST2水平,采用Pearson法分析干眼患者结膜上皮细胞及泪液中IRF4、sST2水平与临床指标的相关性。结果:干眼组治疗前结膜上皮细胞及泪液中IRF4、sST2水平均显著高于对照组(P<0.001)。干眼患者治疗4wk后结膜上皮细胞及泪液中IRF4、sST2水平均显著低于治疗前(P<0.001)。干眼患者治疗4wk后BUT、SⅠt显著增加,CFS评分显著降低(P<0.001)。干眼患者治疗前结膜上皮细胞及泪液中IRF4、sST2水平与治疗前CFS评分均呈正相关,与治疗前BUT、SⅠt均呈负相关(P<0.001)。结论:干眼患者结膜上皮细胞及泪液中IRF4、sST2水平均升高,且与干眼临床指标BUT、SⅠt、CFS评分均呈显著相关性,有潜力成为干眼新的治疗靶点。

黄芩素经由miR-125b-5p/IRF4轴进而促进喉癌细胞死亡并抑制其侵袭的机制研究

目的:探讨黄芩素诱导人喉癌细胞凋亡的机制。方法:选取AMC-HN-8细胞为研究对象,以不同浓度黄芩素(0、10、30、100、300μmol/L)作用于细胞,采用CCK-8法检测其半数抑制浓度(IC50);采用蛋白质印迹法(Western blot)检测Bax、cleaved-caspase-3、Cyto-c、IRF4蛋白表达;RTqPCR检测miR-125b-5p和IRF4的表达;双荧光素酶报告基因验证Targetscan预测结果(miR-125b-5p与IRF4-3'UTR的结合);凋亡和坏死抑制剂探索黄芩素诱导喉癌细胞的死亡方式。再将AMCHN-8分为:空白组、黄芩素(IC50)、miR-125b-5p inhibitor组、黄芩素+inhibitor NC组、黄芩素+miR-125b-5p inhibitor组,细胞侵袭和克隆形成实验分别检测细胞的侵袭和增殖能力;采用流式细胞术检测细胞凋亡。结果:黄芩素以剂量依赖性方式抑制AMC-HN-8细胞的增殖,其IC50值为47.31μmol/L;与空白组相比,47.31μmol/L的黄芩素诱导了细胞凋亡和抑制了细胞侵袭,同时上调了miR-125b-5p的表达,抑制了IRF4的mRNA和蛋白的水平。荧光素酶结果表明,相对于NC模拟物(mimic)组,miR-125b-5p mimic能够抑制IRF4-3'UTR启动子的活性。黄芩素以凋亡的方式诱导喉癌细胞死亡。另外,47.31μmol/L的黄芩素与miR-125b-5p inhibitor联合影响AMC-HN-8细胞行为学的结果表明,与空白组比较,黄芩素组细胞克隆数减少,侵袭能力减弱,凋亡增加;miR-125b-5p inhibitor组细胞克隆数增加,侵袭能力加强,凋亡减少;黄芩素+inhibitor NC组则与黄芩素一致,inhibitor NC对细胞行为学没有显著影响;黄芩素+miR-125b-5p inhibitor组细胞克隆、侵袭、凋亡则介于黄芩素组与miR-125b-5p inhibitor组之间。结论:黄芩素能抑制AMC-HN-8细胞增殖,其机制可能与miR-125b-5p靶向抑制IRF4的表达,诱导促凋亡蛋白Bax、cleaved-caspase-3、Cyto-c,抑制凋亡抑制蛋白Bcl-2从而诱导细胞凋亡有关。

乳腺伴IRF4重排大B细胞淋巴瘤1例

患者女性,34岁,2015年2月26日发现左侧乳腺肿块就诊,无疼痛、发热,无乳头凹陷溢液,无局部皮肤改变。超声检查示左侧乳腺低回声区,形态欠规则,大小3.9 cm×1.2 cm×2.6 cm,界尚清,内示血流信号,双侧腋窝未探及异常淋巴结形态。相关实验室检查指标均为正常值。临床诊断乳腺癌,于2015年3月4日手术切除,术后患者拒绝化疗,予以中药对症支持治疗。2017年7月12日复查彩超示:左侧乳腺切口瘢痕后方探及不均质回声结节,大小约1.7 cm×0.8 cm×1.8 cm,界欠清,内示血流信号,双侧腋窝未探及明显异常淋巴结声像。实验室检查示VEGF为144.8 pg/mL,轻度升高,乳酸脱氢酶LDH、β2微球蛋白、MCV、EBV、HBV等均正常。PET-CT未示异常高代谢灶。临床分期:IA期,ECOG评分:0分,低危组,予以放疗。

慢性应激小鼠脑内STING-TBK1-IRF3通路相关蛋白的表达及意义

目的探索慢性应激小鼠脑内干扰素刺激因子(stimulator of interferon gene,STING)-TANK结合激酶1(TANK-binding kinase 1,TBK1)-干扰素调节因子3(interferon regulatory factor 3,IRF3)信号通路相关蛋白的表达变化及意义。方法将小鼠分为对照(control,CON)组与束缚应激(chronic restraint stress,RST)组,RST组小鼠给予慢性束缚应激刺激(每天6 h,共14 d)后,采用q RT-PCR、组织免疫荧光共标染色与Western blotting方法检测两组小鼠脑内促炎因子CCL2、CXCL10、IL-1β、IL-6、IL-10、TNFαm RNA与STING、TBK1、p-TBK1、IRF3、p-IRF3的蛋白表达变化。结果q RT-PCR实验结果显示,与CON组相比,RST组小鼠脑内促炎因子m RNA表达显著升高(P均<0.05);组织免疫荧光共标染色实验结果显示,STING与小胶质细胞标记物Iba-1高度共标,RST组小鼠脑内STING表达降低;Western blotting结果显示,STING、p-TBK1、p-IRF3蛋白表达均显著降低(P均<0.01)。结论慢性束缚应激小鼠脑内存在神经炎症反应,STING-TBK1-IRF3通路被显著抑制。