鸡干扰素调节因子7的分子特征及其组织表达特性分析

【目的】明确鸡干扰素调节因子7(chIRF7)的分子特征及chIRF7基因在不同发育阶段各组织中的表达特点,为后续开展IRF7基因调控鸡相关组织发育和抗病毒研究打下基础。【方法】利用RT-PCR扩增chIRF7基因编码区(CDS)并构建其重组真核表达载体,通过SOPMA、SWISS-MODEL及BioEdit等在线软件预测分析chIRF7蛋白的二、三级结构及结构域保守性;以重组真核表达载体转染鸡胚成纤维细胞系(DF-1),观察融合蛋白的亚细胞定位情况及分析过表达融合蛋白对新城疫病毒(NDV)复制的影响;采用实时荧光定量PCR检测chIRF7基因在鸡胚发育第14 d(E14d)及鸡出壳第1 d(H1d)、第7 d(H7d)和第14 d(H14d)不同组织中的表达情况。【结果】将从鸡外周血淋巴细胞中扩增获得的chIRF7基因CDS序列插入真核表达载体pEGFP-C1的酶切位点即成功构建获得重组真核表达载体pEGFP-chIRF7。chIRF7蛋白二级结构由无规则卷曲(占51.12%)、α-螺旋(占26.48%)、延伸链(占16.70%)和β-转角(占5.70%)组成;鸡与其他禽类、人类和哺乳动物的IRF7氨基酸序列相似性均较低,且5个功能结构域不保守。经聚肌胞苷酸[Poly(I∶C)]或NDV处理DF-1细胞后,可使融合蛋白EGFP-chIRF7由细胞质定位转变为细胞核定位;而在细胞内过表达融合蛋白EGFP-chIRF7可降低NDV的复制能力和细胞致病性。chIRF7基因在鸡不同发育阶段各组织中均有不同程度的表达,且以肺脏中的相对表达量最高,其次是肝脏和腺胃,在腿肌中的相对表达量较低;从E14d发育到H14d,chIRF7基因在肺脏中的表达呈先下降后趋于稳定的变化趋势,在肝脏、腺胃、心脏和腿肌中呈先下降后上升再下降的变化趋势,在脑组织中呈先稳定再下降的变化趋势,在胸肌和眼球中的表达则趋于稳定。【结论】IRF7在不同物种中的相似性较低且结构域不保守,经外界刺激诱导表达的chIRF7会发生细胞核移位而具有抗病毒感染效果。IRF7基因在鸡不同发育阶段的肺脏、肝脏和腺胃中高表达,说明对这3个组织的发育可能具有调控作用。

IRF7／KIAA154和STAT4基因多态性与中国汉族人群系统性红斑狼疮的相关性

目的 分析IRF7/KIAA1542（rs4963128,rs2246614）和STAT4 （rs7574865）基因多态位点与中国汉族人群SLE易感性的关系,探讨这些基因多态性与SLE患者狼疮肾炎和自身抗体产生及各种临床症状的相关性.方法 采用MALDI-TOF-MS基因分型法对748例SLE患者（SLE组）和750名健康人（健康对照组）进行关联分析.同时采用IIF法检测抗dsDNA抗体,采用免疫双扩散法检测抗SSA抗体、抗SSB抗体、抗Sm抗体和抗RNP抗体,并分析这些抗体与SLE的关系.结果 在健康对照组中rs574865（STAT4）T/T、T/G、G/G基因型频率和T、G等位基因频率分别为9.4%、45.6%、45.0%、32.2%、67.8%,SLE组为17.0%、48.1%、34.9%,41.0%59.0%,两组基因型频率和等位基因频率比较,差异有统计学意义（x^2=26.30,P〈0.01）.另外,与健康对照组比较,SLE组中T/T基因型频率和T等位基因频率明显升高,而且在3个遗传模型（加性模型、显性模型、隐性模型）下基因型频率差异都有统计学意义（P均〈0.01）.rs4963128和rs2246614（IRF7/KIAA1542）2个多态位点的基因型频率和等位基因频率在SLE组和健康对照组中的差异均无统计学意义（x2值分别为4.49、5.32,P均〉0.05）,但rs2246614位点基因型频率在隐性遗传模型下的差异具有统计学意义（P〈0.05）,而rs4963128位点基因型频率在3个遗传模型下的差异均无统计学意义（P均〉0.05）.临床症状分析结果显示,rs4963128（IRF7/KIAA1542）在狼疮肾炎组（OR=2.69,95% CI=1.89～3.82,P〈0.01）、抗SSA抗体组（OR=0.61,95%C/=0.43～0.87,P〈0.05）和抗SSB抗体组（OR=0.36,95% CI=0.23～0.56,P〈0.01）的差异都有统计学意义.同时,rs2246614在关节症状阳性组与阴性组中的差异有统计学意义（OR=1.34,95% CI：1.06～1.69,P〈0.05）.结论 rs7574865（STAT4）与中国汉族人群SLE易感性相关.rs4963125,rs2246614（IRF7/KIAA1542）虽然与SLE易感性无明确相关性,但却与SLE患者的多种临床症状（如狼疮肾炎、关节症状）和抗SSA抗体、抗SSB抗体的产生有相关性.

稳定表达猪IRF7基因的PK-15细胞系建立及其抗病毒效果评价

为探讨猪IRF7基因对某些猪源病毒在PK-15细胞系中增值的影响,利用Piggy Bac真核转座子系统将猪源IRF7基因转染入PK-15细胞中,通过嘌呤霉素和绿色荧光进行双重筛选获得阳性转化细胞,再经克隆纯化得到单个阳性细胞克隆株。通过观察细胞荧光和荧光定量PCR鉴定,最终获得了稳定表达IRF7基因的PK-15细胞系。在Poly I:C诱导下,该细胞系能够显著上调IFN-β的表达。初步研究了该细胞系对病毒复制的影响,结果表明过表达IRF-7基因能够显著抑制猪伪狂犬病病毒(PRV)和猪水泡性口炎病毒(VSV)的复制。本研究为进一步探索猪IRF7基因的功能与作用机制提供有效工具。