胃癌中IRX1的表达与启动子区甲基化的相关性

目的探讨胃癌中同源盒基因IRX1的表达与启动子区甲基化修饰之间的关系。方法生物信息学软件分析IRX1基因启动子区;RT-PCR检测胃癌细胞株及手术切除胃癌组织IRX1基因mRNA表达水平;MSP及BSP法检测启动子区甲基化状态;检测去甲基化试剂5-杂氮-2’-脱氧胞苷的干预对胃癌细胞IRX1基因表达的逆转效应。结果经生物信息学预测IRX1基因转录起始点上游启动子区富含CpG岛;胃癌细胞株及胃癌组织IRX1基因表达有不同程度下调;MSP及BSP检测显示所有胃癌细胞株启动子区呈高甲基化状态;经5-Aza-CdR处理的细胞株IRX1基因的表达有不同程度上调。结论胃癌中IRX1基因的表达下调与启动子区甲基化修饰有一定关系,为探讨IRX1基因作为去甲基化治疗靶点的可能性提供了实验数据。

胃癌中IRX1基因的表达及生物信息学功能预测

目的:研究胃癌中同源盒基因IRX1的表达并分析该基因的结构与功能特征。方法:从NCBI基因数据库中提取IRX1基因(NM-024337)编码序列及5'端转录起始点上、下游各3,000bp,利用生物信息学程序进行基因结构与蛋白同源性分析;对7株人胃癌体外培养细胞株及57例胃癌采用半定量RT-PCR方法检测IRX1基因mRNA表达。结果:IRX1基因转录起始点上游富含CpG岛;基因编码蛋白质含有HOX与IRO两个模序,3'端第400～450氨基酸为富含脯氨酸区域;IRX1～IRX6为高度同源性蛋白。7株胃癌细胞株中4株IRX1表达消失,3株表达降低。57例正常胃粘膜有IRX1mRNA表达,但对应的胃癌组织中20例(35.09%)mRNA表达下降,其中肠型胃癌占65%。结论:IRX1基因在胃癌中呈不同程度的表达下调,并与胃癌的形态学表型,尤其是肠型胃癌明显相关。IRX1基因转录起始点上游存在高甲基化结构基础。

IRX1在肿瘤发生发展中的作用研究

易洛魁族同源盒(IRX)基因组成的含有转录因子家族的同源基因和蛋白在无脊椎动物和脊椎动物的胚胎组织中均有表达,它们参与动物各个器官的发育及生命活动的各个环节,是影响人和动物体生命活动的重要基因.其中IRX1基因属易洛魁家族同源盒基因,是一种与胚胎发育密切相关的基因,编码参与神经系统发育的具有转录因子组合活性的家族蛋白,并在多种肿瘤的发生发展过程中起着重要的作用,可能是肿瘤形成的癌基因或者抑癌基因.本文概述了IRX的基因组结构及其在不同种属中的分型分类,并着重阐明了IRX1在肿瘤发生发展过程中的作用以及对后生动物发育过程的影响.

胃癌中IRX1基因的表达及生物信息学功能预测

目的研究胃癌中同源盒基因IRX1的表达并分析该基因的结构与功能特征。方法从NCBI基因数据库中提取IRX1基因(NM-024337)编码序列及夕端转录起始点上、下游各3000bp,利用生物信息学程序进行基因结构与蛋白同源性分析;对7株人胃癌体外培养细胞株及57例胃癌采用半定量RT-PCR方法检测IRX1基因mRNA表达。结果IRX1基因转录起始点上游富含CpG岛;基因编码蛋白质含有HOX与IRO两个模序,3端第400～450氨基酸为富含脯氨酸区域;IRX1～IRX6为高度同源性蛋白。7株胃癌细胞株中4株IRX1表达消失,3株表达降低。57例正常胃黏膜有IRX1mRNA表达,但对应的胃癌组织中20例(35.09%)mRNA表达下降,其中肠型胃癌占65%。结论IRX1基因在胃癌中呈不同程度的表达下调,并与胃癌的形态学表型,尤其是肠型胃癌明显相关。IRX1基因转录起始点上游存在高甲基化结构基础。

IRX1在宫颈癌中的表达及其与癌症分期的相关性

目的研究IRXl（易洛魁家族同源盒基因，Iroquoishomeoboxgene）在宫颈癌中的表达及其与症癌分期的相关性。方法选取2015年1月至2017年1月期间来湖北省肿瘤医院就诊的61例宫颈癌患者作为研究对象，其中国际妇、产科联合会I期15例，Ⅱ期22例，Ⅲ期19例，Ⅳ期5例。以正常的人子宫颈上皮细胞HCerEpiC为对照，采用免疫印迹检测IRXl在宫颈癌细胞株Hela，C4—1，Siha中IRXl的蛋白表达，收集宫颈癌癌变组织为实验样本，qPCR检测不同分期宫颈癌癌变组织中IRXlmRNA表达水平，免疫组化检测IRXl在宫颈癌组织中的表达以及其与临床分期的相关性。结果免疫印迹检测结果表明，IRXl在各宫颈癌细胞株中的表达高于正常的宫颈上皮细胞，且qPCR检测结果也表明在基因水平上IRXl的表达随癌症分期增加而增加，免疫组化结果显示，IRXl在胞核及胞质中都有表达，癌症分期越高其阳性表达量也相应增高，I期阳性着色率为0，1I期为64％，DI期为84％，1V期为100％。结论IRXl的表达与宫颈癌的临床分期相关，这表明IRXl可能参与了宫颈癌的发生与发展，IRXl有望成为临床上宫颈癌诊断与治疗的新的分子靶点，为宫颈癌的治疗提供新的理论依据。

IRX1真核表达载体的构建及在胃癌细胞SGC-7901中的定位

目的构建pEGFP—IRX1真核表达载体，体外转导至SGC-7901胃癌细胞株，观察IRX1基因转染后蛋白表达与细胞内定位。方法PCR扩增IRX1全长1443bp编码序列，将PCR扩增产物连接入pGEM-Teasy载体，经测序确认序列无误后，亚克隆入pEGFP—N1载体，构建pEGFP-IRX1真核表达载体。采用Lipofectamine2000转染SGC-7901胃癌细胞株，在荧光显微镜下观察外源性IRX1基因导入后在胃癌细胞内的表达与亚细胞定位。结果成功构建有绿色荧光蛋白融合的IRX1真核表达载体，外源性IRX1基因在胃癌SGC-7901细胞中表达成功，在荧光显微镜下IRX1表达蛋白定位于细胞核内。结论pEGFP—IRX1真核表达载体构建成功，并可在细胞内表达，这将为IRX1在胃癌内的功能研究奠定基础。

IRX1基因在肝癌中的表达及其临床意义

目的探讨易洛魁家族同源盒基因IRX1(Iroquois homebox gene)在肝癌中的表达及其临床意义。方法收集82份肝癌组织(高分化26份,Edmondson分级Ⅰ级;中分化25份,Edmondson分级Ⅰ-Ⅱ和Ⅱ级;低分化31份,Edmondson分级Ⅱ-Ⅲ和Ⅲ级)和11份正常或良性疾病非癌组织标本,采用实时荧光定量PCR(Q-PCR)和Western blot检测各组肝脏组织中IRX1的表达,免疫组织化学法检测IRX1在肝脏组织中的定位及临床特征。结果肝癌组织中IRX1基因和蛋白的表达均明显高于非癌对照组(P<0.05),且其表达量与肿瘤的分化程度相关,肿瘤分化程度越低,其表达量越高(P<0.05)。IRX1在肝癌组织中的阳性表达率明显高于非癌对照组(P<0.05),且伴随着肿瘤分期增加和分化程度的降低,IRX1阳性率越高,但IRX1阳性率与HBV感染以及伴随肝硬化情况无明显相关性(P>0.05)。IRX1染色阳性的高分化肝癌组织中,68.2%定位于细胞质,18.2%定位于细胞核,13.6%胞质和胞核均阳性;IRX1染色阳性的低分化肝癌组织中,胞质胞核均阳性的增加至65.5%。结论IRX1可能参与调控肝癌的发生发展过程,IRX1的表达与肝癌的分化程度有关,提示IRX1可作为判断肝癌预后、分化程度以及肿瘤靶向分子治疗的指标。

易洛魁家族同源盒基因IRX1在胶质瘤中的表达研究

目的:探讨易洛魁家族同源盒基因IRX1(Iroquois homeobox gene)在胶质瘤中的表达及其临床意义。方法:收集4位胶质瘤患者的胶质瘤组织和癌旁/正常组织各1例,收集54例胶质瘤组织(WHO Ⅰ级5例,Ⅱ级16例,Ⅲ级14例,Ⅳ级19例),采用PCR方法检测IRX1基因在胶质瘤细胞(U87、U373、LN229和T98G)中的表达,Western Blot检测4组同一患者来源的胶质瘤组织中IRX1的表达,免疫组织化学法(IHC)检测IRX1在胶质瘤组织中的表达及临床特征。结果:PCR结果表明以正常脑组织为对照,IRX1基因在多种胶质瘤细胞中均有表达(P<0.05);Western Blot结果显示IRX1蛋白在胶质瘤组织中的表达显著高于癌旁组织或正常组织(P<0.05);IHC结果显示IRX1蛋白在良性胶质瘤组织中主要定位于胞浆,而在恶性胶质瘤组织中定位于细胞核,且其表达量与胶质瘤的恶性程度相关,恶性程度越高,其在细胞核中的表达量越高(P<0.05)。结论:IRX1可能参与调控恶性胶质瘤的发生发展过程,IRX1的表达与胶质瘤的恶性程度有关,暗示了IRX1可作为判断胶质瘤预后以及肿瘤靶向分子治疗的指标。

IRX1在胰腺癌中的表达及其启动子区甲基化状态

目的检测胰腺癌的易洛魁族同源盒基因（IRX1）的表达及其启动子区的甲基化状态，探讨两者间的相关性。方法采用实时PCR法检测12例胰腺癌组织及6株胰腺癌细胞株的IRX1mRNA表达。基因序列分析1RX1基因启动子区结构。应用甲基化抑制剂5-氮杂-2’-脱氧胞苷（5-Aza—dC）处理胰腺癌细胞，采用甲基化特异性PCR（MSP）、非甲基化特异性PCR（USP）及实时PCR检测处理前后IRX1启动子甲基化状态和IRX1mRNA表达。结果胰腺癌组织IRX1mRNA的表达量为0．31±0．11，显著低于癌旁正常胰腺组织的1．05±0．32（P〈0．01）。胰腺癌细胞AsPCI、BxPC3、Capan-2、PANCl、PaTu8988和SW1990的IRX1mRNA表达量分别为0．36±0．08、0．34±0．16、0．37±0．11、0．25±0．06、0．31±0．04、0．36±0．02，均显著低于人肾上皮293细胞的1．03±0．28（P〈0．05或〈0．01）。IRX1基因启动子区富含CpG岛。各胰腺癌细胞株IRX1基因启动子CpG岛对应位点均有甲基化，经5-Aza-dC处理后甲基化状态得以逆转，IRXmRNA的表达也得以恢复。结论胰腺癌的IRX1mRNA表达下降，与其IRX1基因启动子区CpG岛高甲基化状态相关。

IRX1甲基化激活CXCL14/NF-κB信号通路并改善心力衰竭

目的:探讨IRX1甲基化在心力衰竭(HF)大鼠中的作用机制。方法:通过生物信息学分析选择HF大鼠心肌细胞中的靶基因;通过TAC手术构建HF实验大鼠模型,并分组为假手术组(Sham组)、TAC组、Sham+5-Aza组和TAC+5-Aza组。通过心脏超声检测大鼠心脏功能,免疫组织化学染色评价心脏损伤程度;GSEA分析功能基因的相对丰富度。通过免疫荧光分析、Western blotting和qRT-PCR检测DNA甲基化和表达水平。结果:与正常人的基因组相比,HF患者基因组中甲基化程度显著提高,生物信息学分析确定IRX1为靶基因,IRX1表达与CXCL14/NF-κB之间存在显著相关性。超声心动图评估HF大鼠心脏功能的结果显示,与TAC组相比,TAC+5-Aza组的左心室与体重的比率显著降低,而LVDP、dP/dtmax和EF显著增加(P<0.01)。免疫染色结果显示,与TAC组相比,TAC+5-Aza组心肌细胞排列紊乱的情况得到有效缓解并恢复正常心肌细胞状态。qRT-PCR及Western blotting结果显示,与TAC组相比,TAC+5-Aza组大鼠的基因组DNA甲基化、IRX1甲基化、左心室ANP、BNP基因和β-MHC m RNA的表达水平显著降低(P<0.01),α-MHC m RNA的表达水平、IRX1和CXCL14的m RNA和蛋白表达水平以及MMP9和C-FLIP蛋白表达水平显著增加(P<0.01)。心肌纤维化和心肌细胞凋亡实验结果显示,与TAC组相比,TAC+5-Aza组大鼠心肌纤维化和心肌细胞凋亡阳性率显著降低(P<0.01)。结论:HF模型大鼠的IRXI甲基化水平提高可能激活CXCL14/NF-κB表达,以改善TAC诱导的心肌纤维化和细胞凋亡情况。

酵母单杂交体系筛选胃cDNA文库中IRX1的核心启动子结合蛋白

目的 以IRX1基因启动子为诱饵,在胃cDNA文库内钓取与之相互作用的蛋白质.方法 构建IRX1启动子诱饵报告基因质粒并转化酵母单杂交（Y1H）Gold酵母获得诱饵基因酵母菌;抽提人胃组织总RNA,逆转得到cDNA文库,文库片段为0.3～2.5 Kb,作为猎物与线性化pGADT7-Rec文库质粒共转染诱饵酵母菌.结果 对胃cDNA文库的筛选效率达到3×106,从人胃组织cDNA文库共钓取到8个阳性克隆,测序分析获得3个具有完整开放读码框（ORF）的基因,其编码蛋白均含锌指结构域.结论 以酵母单杂交筛选文库方法得到与IRXI基因启动子序列相互作用蛋白质,为探讨IRX1基因的转录调控机制奠定了基础.

同源盒基因IRX1的启动子克隆及其在人胃黏膜细胞中的启动活性分析

目的 克隆同源盒基因IRX1的核心启动子序列,并探讨其转录调控机制.方法 通过生物信息学预测IRX1基因启动子范围：利用PCR方法扩增并构建含有IRX1基因启动子不同片段的真核报告基因质粒,瞬时转染GES-1胃黏膜细胞,通过检测不同片段的荧光素酶报告质粒活性,判断不同片段的启动子活性.结果 生物信息学预测IRX1基因启动子位于转录起始点上游700 bp范围内.通过PCR技术扩增获得IRX1基因5＇侧翼区8个截短片段报告基因质粒,其活性由大到小依次为p-416＞p-584＞p-715＞p-350＞p-687＞p-320＞p-188＞p-92 除p-92与p-188片段外,其余各片段与PGL3-basic空载体的差异均有统计学意义（均P＜0.05）,其中以p-416片段活性最强,片段p-320与片段p-188之间出现较大活性落差.结论 IRX1基因上游序列启动子以p-416转录活性最高,核心启动子位于-320～-188区间,该区间具有Sp1、TFⅡD等转录因子结合序列,是下一步转录调控机制研究的重要位点.

pH对制备直接甲醇燃料电池新型Ir_xS_(1-x)-C阴极催化剂的影响

以柠檬酸钠为稳定剂,采用氯铱酸、亚硫酸钠、硼氢化钠等为反应物,利用浸渍还原法制备IrxS1-x-C(x=0.7)催化剂;采用粉末X射线衍射、透射电子显微镜、旋转圆盘电极、循环伏安法等测试手段,对比样品在不同pH条件下所制备催化剂的性能。结果表明,当pH=5时,IrxS1-x-C催化剂物相不稳定,并且有杂相生成;当pH=11时,制得的IrxS1-x-C催化剂颗粒的粒度较小,分散性良好,且电化学性能相对优越。