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实时荧光定量PCR快速检测百日咳鲍特菌方法学建立及评价
被引量:
1
1
作者
王慧
罗炜
赖克方
《临床检验杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第6期407-409,共3页
目的建立实时荧光定量PCR检测百日咳鲍特菌的方法。方法以百日咳鲍特菌的重复插入序列IS481为目的基因,设计探针和引物,以克隆的IS481基因片段为DNA模板,在荧光定量PCR仪上建立实时荧光定量PCR检测方法和标准曲线,并进行灵敏度、重复性...
目的建立实时荧光定量PCR检测百日咳鲍特菌的方法。方法以百日咳鲍特菌的重复插入序列IS481为目的基因,设计探针和引物,以克隆的IS481基因片段为DNA模板,在荧光定量PCR仪上建立实时荧光定量PCR检测方法和标准曲线,并进行灵敏度、重复性、特异性实验。结果建立的定量标准曲线阈值循环数(Ct)与模板拷贝数呈良好线性关系(r=0.998);最低检测浓度为102 copies/μl;批内及批间变异系数均小于4%;对临床其他常见呼吸道病原体不出现特异性扩增曲线。结论实时荧光定量PCR法检测IS481基因可用于百日咳鲍特菌的快速检测,具有较好的灵敏度、特异性及重复性。
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关键词
百日咳鲍特菌
聚合酶链反应
实时荧光定量
is481
基因
下载PDF
职称材料
免提取冻干式百日咳鲍特菌核酸检测方法建立及应用
被引量:
2
2
作者
郭鹏波
章波
+1 位作者
王彦红
高利飞
《实验与检验医学》
CAS
2021年第4期789-791,801,共4页
目的本研究建立快速、便携、特异、敏感的百日咳鲍特菌实时定量PCR(Q-PCR)核酸检侧方法,并初步探索在呼吸道感染患者中百日咳鲍特菌(Bordetella pertussis)检测的应用价值。方法靶基因采用IS481基因,优化反应试剂实现免核酸提取直接扩增...
目的本研究建立快速、便携、特异、敏感的百日咳鲍特菌实时定量PCR(Q-PCR)核酸检侧方法,并初步探索在呼吸道感染患者中百日咳鲍特菌(Bordetella pertussis)检测的应用价值。方法靶基因采用IS481基因,优化反应试剂实现免核酸提取直接扩增,对体系进行冻干处理,简化操作步骤。并对所收集得到的上呼吸道感染者的咽拭子标本进行检测评价。结果本检测体系检出限达到100copies/mL,227例急性上呼吸道感染者的咽拭子标本中,其阳性检出率为3.96%。结论成功建立了高敏感、简便、快速的百日咳核酸检测方法,为百日咳诊断提供了新手段。
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关键词
百日咳鲍特菌
实时荧光定量PCR
is481
基因
免核酸提取
冻干
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职称材料
题名
实时荧光定量PCR快速检测百日咳鲍特菌方法学建立及评价
被引量:
1
1
作者
王慧
罗炜
赖克方
机构
广州医学院第一附属医院检验科
广州医学院第一附属医院呼吸疾病国家重点实验室
出处
《临床检验杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第6期407-409,共3页
基金
广州市科技攻关重点项目基金(2002Z2-E0091)
广东省科技计划项目基金(2010B031600145)
文摘
目的建立实时荧光定量PCR检测百日咳鲍特菌的方法。方法以百日咳鲍特菌的重复插入序列IS481为目的基因,设计探针和引物,以克隆的IS481基因片段为DNA模板,在荧光定量PCR仪上建立实时荧光定量PCR检测方法和标准曲线,并进行灵敏度、重复性、特异性实验。结果建立的定量标准曲线阈值循环数(Ct)与模板拷贝数呈良好线性关系(r=0.998);最低检测浓度为102 copies/μl;批内及批间变异系数均小于4%;对临床其他常见呼吸道病原体不出现特异性扩增曲线。结论实时荧光定量PCR法检测IS481基因可用于百日咳鲍特菌的快速检测,具有较好的灵敏度、特异性及重复性。
关键词
百日咳鲍特菌
聚合酶链反应
实时荧光定量
is481
基因
Keywords
Bordetella pertussis
polymerase chain reaction assay
real-time fluorescent quantification
is481 gene
分类号
R516.6 [医药卫生—内科学]
Q503 [生物学—生物化学]
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职称材料
题名
免提取冻干式百日咳鲍特菌核酸检测方法建立及应用
被引量:
2
2
作者
郭鹏波
章波
王彦红
高利飞
机构
郑州儿童医院儿科医学研究所
安图生物
出处
《实验与检验医学》
CAS
2021年第4期789-791,801,共4页
基金
河南省医学科技攻关联合共建项目,编号2018020607。
文摘
目的本研究建立快速、便携、特异、敏感的百日咳鲍特菌实时定量PCR(Q-PCR)核酸检侧方法,并初步探索在呼吸道感染患者中百日咳鲍特菌(Bordetella pertussis)检测的应用价值。方法靶基因采用IS481基因,优化反应试剂实现免核酸提取直接扩增,对体系进行冻干处理,简化操作步骤。并对所收集得到的上呼吸道感染者的咽拭子标本进行检测评价。结果本检测体系检出限达到100copies/mL,227例急性上呼吸道感染者的咽拭子标本中,其阳性检出率为3.96%。结论成功建立了高敏感、简便、快速的百日咳核酸检测方法,为百日咳诊断提供了新手段。
关键词
百日咳鲍特菌
实时荧光定量PCR
is481
基因
免核酸提取
冻干
Keywords
B.pertussis
Real-time PCR
is481 gene
Free Nucleic acid extraction
Lyophilized
分类号
R446.5 [医药卫生—诊断学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
实时荧光定量PCR快速检测百日咳鲍特菌方法学建立及评价
王慧
罗炜
赖克方
《临床检验杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2010
1
下载PDF
职称材料
2
免提取冻干式百日咳鲍特菌核酸检测方法建立及应用
郭鹏波
章波
王彦红
高利飞
《实验与检验医学》
CAS
2021
2
下载PDF
职称材料
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