目的建立结核分枝杆菌IS6110和IS1081微滴数字PCR（droplet digital PCR，ddPCR）检测体系，并用于不同类型临床样本的检测。方法常规提取13株结核分枝杆菌和14株非结核分枝杆菌临床分离株DNA，9例结核分枝杆菌阳性肺结核患者和4例其他...目的建立结核分枝杆菌IS6110和IS1081微滴数字PCR（droplet digital PCR，ddPCR）检测体系，并用于不同类型临床样本的检测。方法常规提取13株结核分枝杆菌和14株非结核分枝杆菌临床分离株DNA，9例结核分枝杆菌阳性肺结核患者和4例其他肺部疾病患者痰DNA，12例结核分枝杆菌阳性肺结核患者和7例健康者血浆DNA。设计合成IS6110和IS1081扩增引物和检测探针，建立ddPCR检测体系。应用该体系检测分枝杆菌、痰和血浆3种DNA样本中靶标拷贝数，进行统计学分析。结果建立了能同时检测IS6110和IS1081的ddPCR体系，该体系检测2个靶标的线性范围分别为0．5～8733和0．2～2893拷贝／μl反应体系。该体系具有较好的重复性（r〉0．95），以非结核分枝杆菌为对照检测结核分枝杆菌的灵敏度和特异度均为100％。在痰和血浆DNA样本检测中，2个靶标拷贝数在肺结核组均显著高于对照组。结论结核分枝杆菌特异性核酸的ddPCR体系，可用于肺结核患者临床分离株、痰和血浆样本的微量核酸检测，对提高结核病病原学诊断能力有重要意义。展开更多
文摘建立了一种以线粒体细胞色素 b（Cyt b）基因为标靶，应用 PCR -RFLP 技术进行草鱼和青鱼种质鉴定的分析方法。设计一对引物 QYCYT -S 和 QYCTY -A 分别对青鱼和草鱼的 Cyt b 基因进行了 PCR 扩增，并选用 BglⅠ和 EcoRⅡ两种限制性内切酶对扩增产物进行酶切分析。结果表明，草鱼和青鱼都可以扩增出1111 bp 的条带，两种酶切检验发现，草鱼扩增产物能被 BglⅠ切成247 bp 和864 bp 两个片段，而青鱼的 PCR 产物能被 EcoRⅡ切成140 bp 和971 bp 两个片段，这表明，mtDNA Cyt b 基因 BglⅠ和EcoRⅡ的酶切位点都可作为鉴定青鱼和草鱼的有效分子标记。利用 PCR -RFLP 分析 mtDNA Cyt b 基因的方法操作简单，是一种快速鉴别草鱼和青鱼的可靠方法。
文摘目的建立结核分枝杆菌IS6110和IS1081微滴数字PCR（droplet digital PCR，ddPCR）检测体系，并用于不同类型临床样本的检测。方法常规提取13株结核分枝杆菌和14株非结核分枝杆菌临床分离株DNA，9例结核分枝杆菌阳性肺结核患者和4例其他肺部疾病患者痰DNA，12例结核分枝杆菌阳性肺结核患者和7例健康者血浆DNA。设计合成IS6110和IS1081扩增引物和检测探针，建立ddPCR检测体系。应用该体系检测分枝杆菌、痰和血浆3种DNA样本中靶标拷贝数，进行统计学分析。结果建立了能同时检测IS6110和IS1081的ddPCR体系，该体系检测2个靶标的线性范围分别为0．5～8733和0．2～2893拷贝／μl反应体系。该体系具有较好的重复性（r〉0．95），以非结核分枝杆菌为对照检测结核分枝杆菌的灵敏度和特异度均为100％。在痰和血浆DNA样本检测中，2个靶标拷贝数在肺结核组均显著高于对照组。结论结核分枝杆菌特异性核酸的ddPCR体系，可用于肺结核患者临床分离株、痰和血浆样本的微量核酸检测，对提高结核病病原学诊断能力有重要意义。
