耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌6种基因及ISAbal插入序列的研究

目的研究耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌(CRAB)的基因型特点和与插入序列ISAbal的关系,探讨其耐药机制。方法收集CRAB 70株(非重复)和碳青霉烯类敏感鲍曼不动杆菌10株,采用2-巯基丙酸抑制试验检测金属β-内酰胺酶(MBLs);采用多重聚合酶链反应(PCR)扩增blaIMP、blaVIM、blaOXA-23、blaOXA-24、blaOXA-51、blaOXA-58、ISAbalOXA-23,扩增产物DNA测序进行比对。结果 70株CRAB 2-巯基丙酸与头孢他啶协同试验全部为阴性(即MBLs阴性),用7对特异性引物对70株CRAB和10株敏感菌进行PCR扩增,所有CRAB均携带blaOXA-23、blaOXA-51,未检出blaOXA-24;1株含有blaOXA-58;80株均不携带blaIMP和blaVIM;插入序列ISAbalOXA-2370株CRAB均有表达,敏感菌均不表达。结论 CRAB的主要耐药基因是blaOXA-51和blaOXA-23;另外,blaOXA-23上游都存在插入序列ISAbal。鲍曼不动杆菌的耐药性与MBLs、blaOXA-24、blaOXA-58无相关性。

亚胺培南耐药鲍曼不动杆菌由插入序列ISAba1点突变引起的bla_(OXA-23)表达减低

目的研究临床分离的8株亚胺培南耐药鲍曼不动杆菌中,与插入序列相关的blaOXA-23 mRNA的表达情况。方法应用双纸片增效法进行金属酶表型筛查并以PCR的方法扩增blaIMP-1、blaIMP-2、blaVIM-2和blaOXA-23 4种β-内酰胺酶基因;实时荧光PCR检测blaOXA-23 mRNA表达量,并以PCR的方法扩增插入序列ISAba1并测序。结果 4株菌金属酶表型筛查为阳性结果,PCR检测8株菌blaOXA-23阳性,2株blaIMP-1阳性、3株blaIMP-2阳性、blaVIM-2基因均为阴性;所有菌株均存在插入序列ISAba1,实时荧光PCR检测显示1株菌blaOXA-23 mRNA表达升高,其余7株菌与对照株比较为表达减低或相近,且这7株菌的插入序列存在点突变现象。结论插入序列ISAba1点突变是引起blaOXA-23碳青霉稀酶活性减低的主要原因。

90株鲍曼不动杆菌OXA基因及ISAba1对OXA-23基因表达的影响

目的研究该院鲍曼不动杆菌(Ab)OXA基因流行趋势及ISAba1对OXA-23基因表达的影响。方法采用VITEK 2Compact全自动微生物鉴定仪检测90株非重复Ab,多重聚合酶链式反应(PCR)检测Ab的OXA基因和插入序列(ISAba1)。TA克隆耐药基因全序列blaOXA-23、插入序列ISAba1和ISAba1-blaOXA-23,并分别用大肠杆菌进行转化,肉汤稀释法测定阳性菌株和转化子对亚胺培南和美罗培南的最低抑菌浓度(MIC)。结果多重PCR检测90株Ab,blaOXA-23阳性73株,blaOXA-51阳性90株,ISAba-1阳性86株,未检测到blaOXA-24、blaOXA-58阳性菌株。17株未检测到blaOXA-23阳性的菌株中有11株对亚胺培南敏感,其中11株中有4株未检测到ISAba1。转化阳性菌株pET28b(+)-blaOXA-23、pET28b(+)-ISAba1、pET28b(+)-ISAba1-blaOXA-23和转化子[pET28b(+)]对亚胺培南MIC值分别为4.00、1.00、64.00和0.12μg/mL;对美罗培南MIC值分别为4.00、0.50、16.00和0.03μg/mL。结果显示ISAba1对blaOXA-23基因的表达有影响。结论该院Ab流行以blaOXA-23和blaOXA-51为主。ISAba1对blaOXA-23的高表达可能是Ab对碳青霉烯类抗菌药物高度耐药的主要原因。

鲍曼不动杆菌OXA基因的检测及ISAba1对其表达的影响

[目的]了解鲍曼不动杆菌的OXA-碳青霉烯酶基因分布情况及插入序列1(ISAba1)对OXA-23基因表达的影响。[方法]收集临床分离的鲍曼不动杆菌无重复株110株。多重PCR扩增OXA-23-like、OXA-24-like、OXA-51-like、OXA-58-like基因,并测序;应用肠杆菌科基因组内重复序列ERIC-PCR进行同源性分析。PCR扩增OXA-23、OXA-51、ISAba1-OXA-23和ISAba1-OXA-51,并用大肠杆菌TOP10进行转化OXA-23、ISAba1-OXA-23、OXA-51。琼脂稀释法测定阳性菌株和转化子TOP10(pGM-OXA)对亚胺培南的MIC值。[结果]在上述临床菌株中PCR检测出blaOXA-23、blaOXA-51、blaOXA-58I、SAba1-OXA-23,未检测到blaOXA-24I、SAba1-OXA-51;110株鲍曼不动杆菌来自18个不同克隆株;转化子TOP10(pGM-ISAba1-OXA-23)MIC值为0.5,另一转化子TOP10(pGM-OXA-23)MIC值为0.125,TOP10(pGM-OXA-51)MIC值为0.25,三者均未显示对亚胺培南高水平耐药的特性。[结论]OXA-碳青霉烯酶基因在鲍曼不动杆菌中广泛存在,以OXA-23、OXA-51为主;同时携带OXA-23和OXA-51两种基因的鲍曼不动杆菌较多见;ISAba1位于OXA-23基因的上游;其在大肠杆菌中并未对OXA酶的表达产生大的影响。

鲍曼不动杆菌OXA-23基因和ISAba1基因检测和耐药性关系

目的了解鲍曼不动杆菌的耐药现状及OXA-23型碳青霉烯酶介导的耐药性。方法收集临床分离的200株鲍曼不动杆菌,用K-B(Kirby-Bauer)法进行常见药物的敏感性实验;通过PCR(polymerase chain reaction)扩增、克隆测序等分析OXA-23基因及ISAba1基因。结果温州医学院附属第一医院分离的200株鲍曼不动杆菌除对头孢哌酮/舒巴坦、亚胺培南、多粘菌素等保持相对较高的敏感性,对其余常见抗生素的耐药率均已超过了80%;200株鲍曼不动杆菌中共检到155株携带OXA-23基因,168株携带ISAba1基因。结论温州医学院附属第一医院鲍曼不动杆菌耐药情况严重,大多带有OXA-23基因,该基因编码的碳青霉烯酶应为其耐药的主要原因,ISAba1常伴随OXA-23型出现。

多重耐药鲍曼不动杆菌的β-内酰胺酶基因及插入序列ISAba1的检测

检测分析鲍曼不动杆菌的耐药性,了解多重耐药鲍曼不动杆菌的β-内酰胺酶基因的流行特征,探究插入序列ISAba1与其耐药性的关系。采用琼脂二倍稀释法检测83株多重耐药鲍曼不动杆菌的药物敏感性;采用PCR检测β-内酰胺酶基因及ISAba1-OXA-23-like、ISAba1-OXA-51-like、ISAba1-ADC的基因连锁。83株多重耐药鲍曼不动杆菌对常见抗菌药物的耐药率非常高。β-内酰胺酶基因TEM、SHV、NDM-1、ADC、DHA、OXA-23-like、OXA-51-like、OXA-58-like,检出率分别为83.1%(69株),91.6%(76株),2.4%(2株),100%(83株),1.2%(1株),95.2%(79株),100%(83株),4.8%(4株);ISAba1-OXA-23-like,ISAba1-OXA-51-like,ISAba1-ADC的连锁检出率分别为92.8%(77株),22.9%(19株),80.7%(67株)。多重耐药鲍曼不动杆菌的耐药十分严重,携带多种β-内酰胺酶及插入序列ISAba1是本组测试菌耐药的主要原因。

鲍曼不动杆菌的耐药率变迁及CRAB耐药机制研究

目的分析南昌大学第一附属医院鲍曼不动杆菌的耐药率变迁,并研究耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌(carbapenem-resistant acinetobacter baumannii,CRAB)的耐药机制,为临床抗生素的使用提供依据。方法采用VITEK-2-COMPACT全自动微生物鉴定仪进行细菌鉴定及药敏测定,分析2010年及2014年南昌大学第一附属医院鲍曼不动杆菌对临床常用抗生素的耐药分布;同时,选取临床分离的非重复耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌进行耐药机制研究,应用多重聚合酶链反应(PCR)扩增IMP、VIM、OXA-23、0XA-24、0XA-51、OXA-58、IsAba1-blaoxa-23基因,明确该院鲍曼不动杆菌中主要碳青霉烯酶基因表达及其与插入序列IsAba1的关系。结果与2010年相比,2014年检出的鲍曼不动杆菌对大部分临床常用抗生素的耐药率均有上升趋势(除外左氧氟沙星及复方新诺明);随机选取临床分离的非重复耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌70株和1株对碳青霉烯类敏感的敏感株参照株(carbapenemase sensitive acinetobacter baumannii,CSAB)共71株,用7对特异性引物对70株耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌和1株敏感对照株进行PCR扩增检测显示,70株CRAB及1株敏感菌株中均携带有OXA-51,而仅在CRAB中检出OXA-23、IsAba1-blaOXA-23基因,敏感对照株中未检出该两个基因表达;OXA-58基因在6株CRAB中有表达,均未检出VIM,IMP,OXA-24基因。结论南昌大学第一附属医院鲍曼不动杆菌对临床常用抗生素的耐药性有上升趋势,需进一步加强合理使用抗生素,同时耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌主要耐药基因为bla OXA-23和bla OXA-51,前者可能与bla OXA-23上游存在插入序列IsAba1有关,后者则可能与其上游存在强启动子导致高表达有关,而CRAB耐药与金属酶、OXA-24、OXA-58基因无明显相关性。

公允价值计量属性应用的国际比较

公允价值计量属性近年来成为会计界研讨的热门话题,新准则发布后更是引起了国内外的专家和学者对公允价值的定义、特征、应用条件等各个方面的深入研究。美国FASB应该是最早研究公允价值的机构,对其实践应用研究也是相对有权威的。IASB作为国际会计准则理事会也对公允价值的应用等问题进行了明确而又深入的研究,这些研究对我国会计准则的国际协调具有借鉴作用。

角分集ISAR高分辨成像

对不同视角雷达回波进行融合可以形成大的相干积累角,显著增强雷达空间监控能力。给出一种角分集(制)信号融合成像方法,对于角分集(制)回波方位向存在大的间隔,首先将每一距离单元方位向有效稀疏孔径数据排列组合成一Hankel矩阵,由参数化方法估计一维信号参数,再由估计得到的参数对空缺部分预测填补,对每个距离单元横向补全后,压缩得到二维图像。该方法克服了以往预测方法的不足,能有效用于方位向稀疏孔径预测外推,最终仿真与实际数据处理结果证实结论。

老年患者耐亚胺培南鲍氏不动杆菌研究

目的明确医院临床分离老年患者耐亚胺培南鲍氏不动杆菌的耐药性、同源性、碳青酶烯酶基因型及其基因周围环境。方法收集医院2005年1月-2007年1月临床分离的142株鲍氏不动杆菌,纸片扩散法筛选耐亚胺培南鲍氏不动杆菌;琼脂稀释法测定亚胺培南耐药菌株对14种抗菌药物的MIC值;脉冲场凝胶电泳(PFGE)分析亚胺培南耐药菌株同源性;PCR扩增及克隆测序分析碳青酶烯酶基因及其周围基因环境。结果142株鲍氏不动杆菌中筛选到97株耐亚胺培南鲍氏不动杆菌;PFGE分型中全部菌株属于4个流行的克隆株;97株耐亚胺培南鲍氏不动杆菌中90株携带OXA-23-like基因,97株携带OXA-51-like基因,86株菌株OXA-23-like基因上游检测到插入序列ISAba1,6株OXA-51基因上游检测到ISAba1。结论所有耐亚胺培南鲍氏不动杆菌均为泛耐药菌,克隆播散是最主要的传播方式,OXA-23组和OXA-51组D类β-内酰胺酶基因是最主要的碳青酶烯酶基因型,未检测到OXA-24组、OXA-58组I、MP型和VIM型碳青酶烯酶基因,OXA类碳青酶烯酶基因与插入序列ISAba1关系密切。

我院流行鲍曼不动杆菌OXA及AmpC酶基因型分析

目的分析我院鲍曼不动杆菌(acinetobacter baumannii,AB)耐药相关基因β-内酰胺酶(OXA、Amp C)及插入序列(ISAba1)的携带情况,为地区流行病学及抗菌药物的合理应用提供依据。方法收集2013年9月—2014年9月佳木斯大学附属第一医院临床分离鲍曼不动杆菌,VITEK-II测试系统菌种鉴定及药敏检测,并进行16SrRNA鉴定;多重PCR检测鲍曼不动杆菌携带的相关耐药基因bla OXA-23、bla OXA-24、bla OXA-51、bla OXA-58、bla ADC、bla DHA及插入序列ISAba1。结果鲍曼不动杆菌对头孢哌酮/舒巴坦、亚胺培南、美洛培南的耐药率分别为12.5%、36.7%、38.5%。66株(95.7%)携带bla OXA-51基因,32株(46.4%)携带bla OXA-23基因,53株(76.8%)携带bla ADC基因,34株(49.3%)携带ISAba1插入序列。碳青霉烯类耐药的鲍曼不动杆菌中,22株(84.6%)携带bla OXA-23,其中19株(73.1%)上游检测到ISAba1,24株(92.3%)携带bla ADC,其中10株上游检测到ISAba1。结论产bla OXA-23、bla ADC型β-内酰胺酶可能是我院鲍曼不动杆菌耐药的主要原因,插入序列(ISAba1)可能增强水解酶表达从而加强耐药。

耐碳青霉烯鲍曼不动杆菌插入序列及其水平传播

目的了解我院耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌的临床分布并探讨插入序列与其耐药的关系,分析水平传播能力,为指导医院感染及临床合理应用抗菌药物提供科学依据。方法收集2013年9月-2015年6月我院临床分离鲍曼不动杆菌,经VITEK-II全自动细菌分析系统鉴定细菌并检测16SrRNA,Walkway-40/药敏测试系统进行药敏检测;多重PCR检测鲍曼不动杆菌携带β-内酰胺酶(A、B、C、D类)相关耐药基因。检测上游插入序列ISAba1与OXA-23、OXA-51、ADC连锁表达,并分析ISAbal与耐药基因OXA-23、ADC的相关性。质粒接合试验验证OXA碳青霉烯酶基因的水平转移。结果耐碳青霉烯类的鲍曼不动杆菌(CRAB)与碳青霉烯类敏感的鲍曼不动杆菌(CSAB)抗生素耐药率差异有统计学意义(Ps<0.01)。CRAB与CSAB产酶基因(OXA-23、ADC、TEM)检出率差异明显。50株CRAB中40株检测出ISAbal-OXA-23连锁基因,1株检测出ISAbal-OXA-51连锁基因。接合试验阳性株检测出OXA-23、OXA-24、OXA-51及插入序列。结论我院CRAB主要是产OXA-23、OXA-24、OXA-51、ADC、TEM型碳青霉烯酶,ISAbal常出现在OXA-23基因上游,ISAbal-OXA-23可能是CRAB重要的耐药机制。