免疫刺激复合物(ISCOM)介导的传染性法氏囊病病毒多聚蛋白基因免疫的研究

将传染性法氏囊病病毒 (IBDV)ZJ2 0 0 0株的多聚蛋白 (VP2 /VP4/VP3)基因插入 pCI质粒的CMV启动子下游 ,构建了真核表达质粒pCI VP2 /VP4/VP3,在Lipofectin介导下转染Vero细胞进行了多聚蛋白的瞬时表达。以免疫刺激复合物 (ISCOM)为佐剂制备DNA疫苗 ,进行不同免疫剂量间、不同免疫途径间、一次免疫和二次免疫间的效果对比试验。结果表明 :以肌内和皮内联合免疫法效果最好 ,而口服和点眼等途径未能诱导足够的免疫反应 ;大于 2 0 0 μg的剂量DNA疫苗才能产生良好的免疫力 ;二次免疫的效果明显优于一次免疫。与常规的弱毒疫苗B87和D78相比 ,DNA疫苗产生中和抗体的潜伏期长、效价相对较低 ,对强毒攻击的保护率相当。本试验还证实 ,免疫刺激复合物具有明显提高DNA疫苗免疫效果的作用。DNA疫苗能诱导产生保护性反应 ,为今后IBD疫苗的研究开创了一条新的途径。

嗜水气单胞菌β-hemA重组菌表达产物ISCOMs的研制

嗜水气单胞菌β-hemA重组菌PCB的培养上清液经硫酸铵梯度沉淀粗提毒素蛋白质，并在pH2．5的柠檬酸缓冲液里酸化处理以暴露其疏水区，经Mega-10裂解后与QuilA结合制备ISCOMMs，电镜下可观察到30～40nm的多面体的笼格状颗粒结构。经鳗鱼的免疫保护试验证实．ISCOMs组(每尾40～80μg)保护率高达100％，同剂量的溶血素+弗氏佐剂组可达62．5％，未加佐剂的溶血素只有50％。

创伤弧菌ISCOM疫苗的免疫学效应研究

目的探讨创伤弧菌ISCOM疫苗的免疫学效应。方法制备创伤弧菌ISCOM疫苗,通过注射、浸泡与灌胃接种鳗鲡进行安检试验,显示创伤弧菌ISCOM疫苗安全、可靠;注射途径室内免疫欧洲鳗,通过菌体凝集方法和ELISA方法测定血清免疫应答规律,表明两者趋势基本一致,免疫组的血清抗体水平明显高于对照组;攻毒试验表明相对免疫保护率达100%;田间试验口服免疫日本鳗后的攻毒试验证明相对免疫保护率近80%。结果创伤弧菌ISCOM疫苗安全,且免疫鳗鲡能产生强大的免疫保护力。结论创伤弧菌ISCOM疫苗有效且实用。

β-hemA-ISCOMs对鳗鲡的口服免疫效果

携带嗜水气单胞菌β-溶血素基因的重组菌可表达具天然活性的β-溶血素。重组菌胞外产物制成的ISCOMs(β-hemA-ISCOMs)经由肠胃途径免疫,可显著提高鳗鲡淋巴细胞的增殖转化能力(P<0.05),并诱导免疫保护,一次免疫的攻毒存活率为44.4%。二次免疫的攻毒存活率为100%。本研究首次将ISCOMs技术应用于鳗鲡口服免疫,试验结果表明ISCOMs技术在发展鱼类口服型疫苗上有广阔的应用前景。

大黄鱼溶藻弧菌外膜蛋白ISCOMs的免疫效果初步研究

以溶藻弧菌外膜蛋白为模式抗原,制备其ISCOMs,免疫大黄鱼,进行安全和免疫力试验测定,结果显示溶藻弧菌外膜蛋白ISCOMs安全、纯净;免疫组菌体凝集效价比对照组高,但免疫组个体间有差异,而免疫组的血清ELISA抗体水平明显高于对照组;攻毒试验组(0.3×107个.尾-1)存活率可达100%,对照组(0.3×108个.尾-1)存活率为20%;试验表明溶藻弧菌外膜蛋白ISCOMs安全,免疫大黄鱼后可产生免疫保护力。

人巨细胞病毒ISCOMs的研制

应用巨细胞病毒被膜蛋白与Quil A结合制备ISCOMs疫苗，经小鼠的免疫学实验发现，ISCOMs实验组IgG及IgM水平明显高于其它对照组，其IgG1、IgG2a、IgG2b也较其它组为高。提示该疫苗有可能在预防人体HCMV原发感染中发挥作用。

BSA-ISCOMs对大黄鱼免疫机能及抗病力的影响

利用免疫刺激复合物(ISCOMs)非特异免疫增强作用和可经黏膜呈递的特点,将BSA制备成ISCOMs(BSA-ISCOMs),大黄鱼连续口服免疫10d。免疫后第15d和30d采血,测血清部分非特异性免疫指标。结果显示,免疫后第15d,试验组血清SOD、补体C3、总蛋白含量显著高于对照组(P<0.05),γ-干扰素高于对照组,但差异不显著(P>0.05),溶菌酶则显著低于对照组(P<0.05);免疫后第30d,除溶菌酶外,试验组各指标与对照组差异不显著(P>0.05)。免疫完成后第30d,创伤弧菌(Vibrio vulnificus)攻毒结果显示,对照组死亡率100%,试验组死亡率26.7%,相对免疫保护率为73.3%。因此,口服BSA-ISCOMs在一定药效期限内能有效提高大黄鱼的免疫机能,增强抗病能力。

嗜水气单胞菌外膜蛋白ISCOM疫苗免疫欧洲鳗鲡后抗体分泌细胞变化

制备嗜水气单胞菌MOMP-ISCOMs疫苗,使用该疫苗口服和注射免疫欧洲鳗鲡,分别于口服或注射免疫后第14、28d分离欧洲鳗鲡的皮肤和肾脏细胞,使用ELISPOT技术分析其中抗体分泌细胞ASC的数量变化。结果显示:2种免疫方式均能不同程度增加皮肤和肾脏中免疫细胞的数量;其中口服免疫组非特异性免疫细胞数量增加速度较快,注射免疫组特异性免疫细胞数量增加更多。

ISCOM型白血病瘤苗对小鼠巨噬细胞作用的研究

目的探讨免疫刺激复合物(ISCOM)型白血病瘤苗对小鼠巨噬细胞的作用。方法将C57BL/6小鼠30只分为模型组、灭活的红白血病细胞(FBL-3)瘤苗组(灭活瘤苗组)和灭活的FBL-3细胞+ISCOM瘤苗组(ISCOM瘤苗组),小鼠注射FBL-3细胞建立白血病荷瘤小鼠模型,治疗4周后,分离小鼠腹腔巨噬细胞,观察不同组别的巨噬细胞吞噬功能、一氧化氮(NO)、白细胞介素(IL)-1、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、巨噬细胞杀伤活性和抗原呈递功能。结果 ISCOM瘤苗组小鼠腹腔巨噬细胞数量、巨噬细胞吞噬功能、IL-1、TNF-α、IL-2、T细胞增殖能力和NO高于模型组和灭活瘤苗组(P<0.05),ISCOM瘤苗组巨噬细胞细胞杀伤活性显著高于模型组(P<0.01)。结论 ISCOM型瘤苗可以增加巨噬细胞的数量,增强巨噬细胞的吞噬作用及抗原呈递能力。

ISCOM型白血病瘤苗联合1-甲基色氨酸免疫治疗荷瘤小鼠疗效观察

目的探讨免疫刺激复合物(ISCOM)型白血病肿瘤疫苗(简称瘤苗)联合1-甲基色氨酸对荷瘤小鼠的治疗作用。方法皂苷溶液中加入脂肪酶蛋白(1 mg/mL)7℃反应12h,加入80μL脂类混合物溶液和5 mL皂苷溶液(1 mg/mL)制备ISCOM型白血病瘤苗。C57BL/6小鼠分为模型组、ISCOM型白血病瘤苗组、1-甲基色氨酸组和联用组(ISCOM型白血病瘤苗+1-甲基色氨酸),小鼠注射FBL-3细胞建立白血病荷瘤小鼠模型,模型组给予等量生理盐水,其余各组接受对应药物治疗4周后,记录体质量,NK细胞、Mφ细胞和细胞毒T淋巴细胞(CTL)细胞杀伤活性、血清IL-10和IL-12表达水平。结果联用组瘤质量低于1-甲基色氨酸组和ISCOM型白血病瘤苗组[(0.64±0.26)g vs.(2.49±0.91)g,P<0.01;(0.64±0.26)g vs.(1.28±0.73)g,P<0.05)];联用组Mφ细胞杀伤活性显著高于1-甲基色氨酸组[(55.69±13.69)%vs.(69.47±14.79)%,P<0.01)];联用组NK细胞杀伤活性显著高于1-甲基色氨酸组[(38.41±8.27)%vs.(67.22±12.74)%,P<0.01];联用组CTL细胞杀伤活性高于1-甲基色氨酸组和ISCOM型白血病瘤苗组[(43.77±8.89)%vs.(69.68±11.44)%,P<0.01;(58.87±9.45)%vs.(69.68±11.44)%,P<0.05)];联用组IL-10均显著低于1-甲基色氨酸组、ISCOM型白血病瘤苗组[(76.2±6.82)pg/L vs.(98.3±13.4)pg/L,P<0.01;(76.2±6.82)pg/L vs.(202.3±44.5)pg/L,P<0.01)];联用组IL-12高于1-甲基色氨酸组、ISCOM型白血病瘤苗组[(381.2±47.3)pg/L vs.(332.1±30.2)pg/L,P<0.05;(381.2±47.3)pg/L vs.(291.2±17.3)pg/L,P<0.01)。结论 ISCOM白血病瘤苗联合1-甲基色氨酸具有较佳的抗瘤活性,其机制可能是通过介导IL-10和IL-12的表达。

ISCOMs作为粘膜免疫佐剂在避孕疫苗构建中的作用研究

目的 探索有效提高避孕疫苗生殖道粘膜免疫的方法。方法 将合成纯化的 3 5多肽与皂甙QuilA、脂类混合物 (等体积比的磷脂和胆固醇 )以 1∶4∶1比例混合 ,经充分透析后得到 3 5肽 ISCOMs ;将 3 5肽 ISCOMs和 3 5肽 弗氏佐剂混悬物分别免疫纯系BALB c雌性小鼠 ,并比较免疫后小鼠生殖道内特异性IgA的动态变化以及小鼠生育力的变化。结果 制备成功的 3 5肽 ISCOMs在电镜下可见明显的、较规则的蜂巢样结构 ;3 5肽 ISCOMs免疫组IgA抗体在第 10周时达最高值 ( 1∶60 0 ) ,约持续 4周左右 ;而 3 5肽 弗氏佐剂组IgA抗体在第 14周时达最高值 ( 1∶3 0 0 ) ,约持续 1周左右 ;3 5肽 ISCOMs免疫后小鼠的受孕率 ( 14 3 % )显著低于 3 5肽 弗氏佐剂免疫组 ( 60 0 % )。结论 ISCOMs可以显著提高抗原在生殖道内的粘膜免疫效应 ,增强抗生育作用 ,是一种极富潜力的粘膜免疫佐剂。

人巨细胞病毒ISCOMs对小鼠细胞免疫应答的调节作用

应用人巨细胞病毒被膜蛋白制备实验型免疫刺激复活物 (ISCOMs)疫苗能诱发细胞免疫反应。对小鼠 1次接种ISCOMs未能诱生明显细胞毒性T细胞 (Tc)及自然杀伤细胞 (NK)细胞活性增加 ,但能使L3T4及其与LyT2的比值增加。第 2次免疫后小鼠Tc及NK细胞活性明显增加。提示该疫苗有可能在预防人巨细胞病毒 (HC MV)原发感染中发挥作用。

ISCOMATRIX^(TM)佐剂:细胞和体液免疫应答的有效诱导剂

ISCOMATRIXTM佐剂能诱导广泛而有效的体液和细胞免疫应答。其成分清楚,生产工艺简单易行。本文概述了ISCOMATRIXTM佐剂疫苗诱导免疫应答的能力和作用机理。

创伤弧菌ISCOMs疫苗对欧洲鳗鲡细胞免疫的影响

应用创伤弧菌ISCOMs疫苗对欧洲鳗鲡进行腹腔注射免疫,免疫后35 d进行攻毒试验,结果表明,经免疫的欧洲鳗鲡相对存活率达75%,证实创伤弧菌ISCOMs疫苗具有较好的免疫保护性。对创伤弧菌ISCOM疫苗免疫后的欧洲鳗鲡细胞免疫水平的淋巴细胞进行转化试验,检测结果分析表明,试验组与对照组的淋转指数差异不显著,推测该疫苗诱导的免疫保护方式可能与细胞免疫保护无密切相关性。

伪狂犬病病毒免疫刺激复合物(ISCOM)的制备及其免疫效果检测

制备了伪狂犬病病毒囊膜蛋白免疫刺激复合物(ISCOM)。在电镜下呈典型笼状结构,直径约为40nm。其中抗原成分经SDS-PAGE电泳只出现一条带。用所制备的ISCOM10g为一头份免疫兔,中和抗体的最高效价为1:45,ELISA抗体效价最高可达1:128,两者均高于相同头份的亚单位疫苗、灭活疫苗及弱毒疫苗。ISCOM免疫兔后,攻击100LD50闽A株强毒,保护率为100%。

嗜水气单胞菌重组β-hemA-ISCOMs对鳗鲡的浸泡免疫效果

应用嗜水气单胞菌β-hemA重组菌表达产物作为抗原,制备成免疫刺激复合物(β-hemA-ISCOMs),通过浸泡途径免疫鳗鲡,测定免疫鱼细胞和抗体应答水平和免疫效力。试验结果表明:(1)β-hemA-ISCOMs在电镜下呈笼格状颗粒,直径约40nm;(2)一免后第44天,β-hemA-ISCOMs免疫组淋巴细胞转化率显著高于非β-hemA-ISCOMs免疫组(P<0.05);(3)免疫浓度在30～120mg.L-1时,β-hemA-ISCOMs免疫组血清抗体效价与浓度正相关,且显著高于ISM1312佐剂组与无佐剂组(P<0.05);(4)免疫浓度在30～120mg.L-1时,β-hemA-ISCOMs免疫组存活率与免疫接种剂量正相关,在同等剂量下,β-hemA-ISCOMs免疫组的存活率高于其它组。因此β-hemA-ISCOMs浸泡免疫可诱导宿主产生细胞与抗体介导的免疫应答,产生保护性免疫,ISCOMs技术适用于制备浸泡型渔用疫苗。

ISCOMS重组乙型肝炎疫苗的研究

目的 提高CHO细胞表达的重组乙型肝炎病毒表面抗原 (HBsAg)的免疫原性。方法 采用透析法制备HBsAg免疫刺激复合物 (immunostimulatingcomplexes简称ISCOMS)。用放免法 (RIA)检测免疫小鼠的抗体滴度 ;标记胸腺嘧啶掺入法 (3H TdR)检测小鼠脾淋巴细胞转化率 ;CTLL 细胞株 XTT法检测IL 2活性。结果 经电镜观察ISCOMS颗粒呈蜂窝状 ,直径为 30～ 4 0nm左右。SDS PAGE分析 ,制备的ISCOMS颗粒HBsAg蛋白均由P2 3、GP2 7和GP30组成。用Bradfords法测定ISCOMS蛋白回收率为 4 1 5 0 %。免疫NIH小鼠结果显示ISCOMS重组乙肝疫苗和铝佐剂疫苗的ED50 分别为 10 3 2 2 5 5和 2 5 80 6 4 ;ISCOMS组的相对效力是铝佐剂组的 4倍。刺激指数 (SI)分别为 6 78± 2 32和 3 12± 0 5 4。IL 2水平分别是 10 2IU ml± 2 12IU ml和 4 95IU ml± 0 86IU ml。结论 ISCOMS重组乙型肝炎疫苗稳定性好 ,免疫原性强 ,抗体产生早 ,滴度高 ,并且能激起细胞免疫 ,有可能发展成为新一代疫苗。

伪狂犬病病毒囊膜蛋白ISCOMs免疫原性测定

应用伪狂犬病病毒囊膜蛋白与QuilA结合制备囊膜蛋白免疫刺激复合物 (PRV_ISCOMs) ,并通过ELISA、血清中和试验和淋巴细胞转化试验 (Brdu_ELISA法 )测定其诱导小鼠体液和细胞免疫应答水平。结果如下 :1)小鼠分别接种3、7、10ug的PRV_ISCOMs后 ,于接种后PI 7d血清中可测出ELISAIgG抗体 ,随后抗体水平逐渐升高。间隔 2 1d加强免疫后 ,ELISAIgG抗体水平进一步提高 ,且中和抗体效价均在 1∶2 2以上 ,而未加佐剂的囊膜蛋白对照组均无中和抗体 ;2 )淋巴细胞转化试验初步结果表明PRV_ISCOMs能诱导小鼠的细胞免疫应答。 3)免疫保护力测定显示免疫鼠能抵抗强毒攻击。上述结果表明PRV_ISCOMs具有良好的免疫原性 ,能诱导小鼠的体液免疫和细胞免疫应答。

免疫刺激复合物(ISCOM)

ISCOM 全称ImmunostimulatingComplex,是由嵌入佐剂 Quil A 与抗原在溶液中相互作用而形成的一种高免疫活性的脂质小泡。常规佐剂有油乳剂(例如佛氏佐剂)、氢氧化铝胶等,但使用中需用大剂量以增强免疫效果,往往导致不可接受的反效应。

免疫刺激复合物(ISCOM)疫苗的研究进展

综述了免疫刺激复合物(ISCOM)的结构和组成,其所制疫苗引起的抗体应答、细胞应答和粘膜应答的研究近况。同时对ISCOM疫苗的作用机理和其在免疫预防中的应用作了相应的概述。