嗜水气单胞菌β-hemA重组菌表达产物ISCOMs的研制

嗜水气单胞菌β-hemA重组菌PCB的培养上清液经硫酸铵梯度沉淀粗提毒素蛋白质，并在pH2．5的柠檬酸缓冲液里酸化处理以暴露其疏水区，经Mega-10裂解后与QuilA结合制备ISCOMMs，电镜下可观察到30～40nm的多面体的笼格状颗粒结构。经鳗鱼的免疫保护试验证实．ISCOMs组(每尾40～80μg)保护率高达100％，同剂量的溶血素+弗氏佐剂组可达62．5％，未加佐剂的溶血素只有50％。

β-hemA-ISCOMs对鳗鲡的口服免疫效果

携带嗜水气单胞菌β-溶血素基因的重组菌可表达具天然活性的β-溶血素。重组菌胞外产物制成的ISCOMs(β-hemA-ISCOMs)经由肠胃途径免疫,可显著提高鳗鲡淋巴细胞的增殖转化能力(P<0.05),并诱导免疫保护,一次免疫的攻毒存活率为44.4%。二次免疫的攻毒存活率为100%。本研究首次将ISCOMs技术应用于鳗鲡口服免疫,试验结果表明ISCOMs技术在发展鱼类口服型疫苗上有广阔的应用前景。

大黄鱼溶藻弧菌外膜蛋白ISCOMs的免疫效果初步研究

以溶藻弧菌外膜蛋白为模式抗原,制备其ISCOMs,免疫大黄鱼,进行安全和免疫力试验测定,结果显示溶藻弧菌外膜蛋白ISCOMs安全、纯净;免疫组菌体凝集效价比对照组高,但免疫组个体间有差异,而免疫组的血清ELISA抗体水平明显高于对照组;攻毒试验组(0.3×107个.尾-1)存活率可达100%,对照组(0.3×108个.尾-1)存活率为20%;试验表明溶藻弧菌外膜蛋白ISCOMs安全,免疫大黄鱼后可产生免疫保护力。

人巨细胞病毒ISCOMs的研制

应用巨细胞病毒被膜蛋白与Quil A结合制备ISCOMs疫苗，经小鼠的免疫学实验发现，ISCOMs实验组IgG及IgM水平明显高于其它对照组，其IgG1、IgG2a、IgG2b也较其它组为高。提示该疫苗有可能在预防人体HCMV原发感染中发挥作用。

BSA-ISCOMs对大黄鱼免疫机能及抗病力的影响

利用免疫刺激复合物(ISCOMs)非特异免疫增强作用和可经黏膜呈递的特点,将BSA制备成ISCOMs(BSA-ISCOMs),大黄鱼连续口服免疫10d。免疫后第15d和30d采血,测血清部分非特异性免疫指标。结果显示,免疫后第15d,试验组血清SOD、补体C3、总蛋白含量显著高于对照组(P<0.05),γ-干扰素高于对照组,但差异不显著(P>0.05),溶菌酶则显著低于对照组(P<0.05);免疫后第30d,除溶菌酶外,试验组各指标与对照组差异不显著(P>0.05)。免疫完成后第30d,创伤弧菌(Vibrio vulnificus)攻毒结果显示,对照组死亡率100%,试验组死亡率26.7%,相对免疫保护率为73.3%。因此,口服BSA-ISCOMs在一定药效期限内能有效提高大黄鱼的免疫机能,增强抗病能力。

ISCOMs作为粘膜免疫佐剂在避孕疫苗构建中的作用研究

目的 探索有效提高避孕疫苗生殖道粘膜免疫的方法。方法 将合成纯化的 3 5多肽与皂甙QuilA、脂类混合物 (等体积比的磷脂和胆固醇 )以 1∶4∶1比例混合 ,经充分透析后得到 3 5肽 ISCOMs ;将 3 5肽 ISCOMs和 3 5肽 弗氏佐剂混悬物分别免疫纯系BALB c雌性小鼠 ,并比较免疫后小鼠生殖道内特异性IgA的动态变化以及小鼠生育力的变化。结果 制备成功的 3 5肽 ISCOMs在电镜下可见明显的、较规则的蜂巢样结构 ;3 5肽 ISCOMs免疫组IgA抗体在第 10周时达最高值 ( 1∶60 0 ) ,约持续 4周左右 ;而 3 5肽 弗氏佐剂组IgA抗体在第 14周时达最高值 ( 1∶3 0 0 ) ,约持续 1周左右 ;3 5肽 ISCOMs免疫后小鼠的受孕率 ( 14 3 % )显著低于 3 5肽 弗氏佐剂免疫组 ( 60 0 % )。结论 ISCOMs可以显著提高抗原在生殖道内的粘膜免疫效应 ,增强抗生育作用 ,是一种极富潜力的粘膜免疫佐剂。

人巨细胞病毒ISCOMs对小鼠细胞免疫应答的调节作用

应用人巨细胞病毒被膜蛋白制备实验型免疫刺激复活物 (ISCOMs)疫苗能诱发细胞免疫反应。对小鼠 1次接种ISCOMs未能诱生明显细胞毒性T细胞 (Tc)及自然杀伤细胞 (NK)细胞活性增加 ,但能使L3T4及其与LyT2的比值增加。第 2次免疫后小鼠Tc及NK细胞活性明显增加。提示该疫苗有可能在预防人巨细胞病毒 (HC MV)原发感染中发挥作用。

创伤弧菌ISCOMs疫苗对欧洲鳗鲡细胞免疫的影响

应用创伤弧菌ISCOMs疫苗对欧洲鳗鲡进行腹腔注射免疫,免疫后35 d进行攻毒试验,结果表明,经免疫的欧洲鳗鲡相对存活率达75%,证实创伤弧菌ISCOMs疫苗具有较好的免疫保护性。对创伤弧菌ISCOM疫苗免疫后的欧洲鳗鲡细胞免疫水平的淋巴细胞进行转化试验,检测结果分析表明,试验组与对照组的淋转指数差异不显著,推测该疫苗诱导的免疫保护方式可能与细胞免疫保护无密切相关性。

ISCOMS——粘膜免疫的新策略?

含有纯化或重组抗原的口服活性疫苗非常需要,特別是在抗粘膜表面疾病的免疫方面。但其发展至今仍受一些困难因素的限制。作者认为亲脂性免疫刺激复合物(lipophilic immunestimulating complexes ISCOMB)可能为诱发多种对蛋白抗原的免疫应答提供一种口服免疫载体。

多价精子抗原表位多肽-免疫刺激复合物的抗生育作用研究

目的 提高多价小鼠精子抗原表位多肽的免疫性避孕效应。方法 应用固相化学合成法合成具有两种精子抗原蛋白关键表位的 35肽 ,纯化后的多肽与皂甙QuilA及磷脂、胆固醇混合 ,透析制备多肽 免疫刺激复合物 (ISCOMs) ,并用于免疫雌性C5 7小鼠。结果 合成后的 35肽经纯化后纯度大于 95 % ,经质谱仪鉴定质荷比与理论值一致 ;透析法制备的多肽 ISCOMs在电镜下呈规则的蜂巢样、由多个亚单位构成的开放型结构 ;免疫后小鼠的血清及阴道冲洗液中特异性IgG和IgA最高分别为 1∶180 0 0和 1∶16 0 0 ;同时受孕率降为 2 0 0 % ,显著低于对照组 (P≤ 0 0 1)。结论 多肽 ISCOMs复合物具有独特的蜂巢样结构 ,其应用可显著提升多肽的免疫效应 ,尤其是粘膜免疫 ,获得较好的免疫性避孕效果 。

嗜水气单胞菌外膜蛋白ISCOM疫苗免疫欧洲鳗鲡后抗体分泌细胞变化

制备嗜水气单胞菌MOMP-ISCOMs疫苗,使用该疫苗口服和注射免疫欧洲鳗鲡,分别于口服或注射免疫后第14、28d分离欧洲鳗鲡的皮肤和肾脏细胞,使用ELISPOT技术分析其中抗体分泌细胞ASC的数量变化。结果显示:2种免疫方式均能不同程度增加皮肤和肾脏中免疫细胞的数量;其中口服免疫组非特异性免疫细胞数量增加速度较快,注射免疫组特异性免疫细胞数量增加更多。

ISCOM型白血病瘤苗对小鼠巨噬细胞作用的研究

目的探讨免疫刺激复合物(ISCOM)型白血病瘤苗对小鼠巨噬细胞的作用。方法将C57BL/6小鼠30只分为模型组、灭活的红白血病细胞(FBL-3)瘤苗组(灭活瘤苗组)和灭活的FBL-3细胞+ISCOM瘤苗组(ISCOM瘤苗组),小鼠注射FBL-3细胞建立白血病荷瘤小鼠模型,治疗4周后,分离小鼠腹腔巨噬细胞,观察不同组别的巨噬细胞吞噬功能、一氧化氮(NO)、白细胞介素(IL)-1、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、巨噬细胞杀伤活性和抗原呈递功能。结果 ISCOM瘤苗组小鼠腹腔巨噬细胞数量、巨噬细胞吞噬功能、IL-1、TNF-α、IL-2、T细胞增殖能力和NO高于模型组和灭活瘤苗组(P<0.05),ISCOM瘤苗组巨噬细胞细胞杀伤活性显著高于模型组(P<0.01)。结论 ISCOM型瘤苗可以增加巨噬细胞的数量,增强巨噬细胞的吞噬作用及抗原呈递能力。

免疫刺激复合物(ISCOM)介导的传染性法氏囊病病毒多聚蛋白基因免疫的研究

将传染性法氏囊病病毒 (IBDV)ZJ2 0 0 0株的多聚蛋白 (VP2 /VP4/VP3)基因插入 pCI质粒的CMV启动子下游 ,构建了真核表达质粒pCI VP2 /VP4/VP3,在Lipofectin介导下转染Vero细胞进行了多聚蛋白的瞬时表达。以免疫刺激复合物 (ISCOM)为佐剂制备DNA疫苗 ,进行不同免疫剂量间、不同免疫途径间、一次免疫和二次免疫间的效果对比试验。结果表明 :以肌内和皮内联合免疫法效果最好 ,而口服和点眼等途径未能诱导足够的免疫反应 ;大于 2 0 0 μg的剂量DNA疫苗才能产生良好的免疫力 ;二次免疫的效果明显优于一次免疫。与常规的弱毒疫苗B87和D78相比 ,DNA疫苗产生中和抗体的潜伏期长、效价相对较低 ,对强毒攻击的保护率相当。本试验还证实 ,免疫刺激复合物具有明显提高DNA疫苗免疫效果的作用。DNA疫苗能诱导产生保护性反应 ,为今后IBD疫苗的研究开创了一条新的途径。

创伤弧菌ISCOM疫苗的免疫学效应研究

目的探讨创伤弧菌ISCOM疫苗的免疫学效应。方法制备创伤弧菌ISCOM疫苗,通过注射、浸泡与灌胃接种鳗鲡进行安检试验,显示创伤弧菌ISCOM疫苗安全、可靠;注射途径室内免疫欧洲鳗,通过菌体凝集方法和ELISA方法测定血清免疫应答规律,表明两者趋势基本一致,免疫组的血清抗体水平明显高于对照组;攻毒试验表明相对免疫保护率达100%;田间试验口服免疫日本鳗后的攻毒试验证明相对免疫保护率近80%。结果创伤弧菌ISCOM疫苗安全,且免疫鳗鲡能产生强大的免疫保护力。结论创伤弧菌ISCOM疫苗有效且实用。

免疫刺激复合物疫苗制备及其对小鼠免疫功能的影响

确定了免疫刺激复合物(ISCOM)疫苗的安全有效剂量及其对小鼠免疫功能的影响。选取体重25 g左右的昆明小白鼠60只,分为12组,每组5只,腹腔分别注射不同剂量(5-200μg)的ISCOM疫苗,观察小鼠健康状态。选取体重28 g左右的昆明小白鼠60只,分为4组,分别在腹腔注射相同剂量的灭菌生理盐水,Lipase+生理盐水,空ISCOM,Lipase+ISCOM疫苗,利用间接ELISA检测血清中特异性抗体效价。结果表明,当注射剂量为5-25μg/只时,小鼠无任何异常症状。免疫后8 d,小鼠血清特异性抗体效价(log2)可以达到10.5,显著高于对照组。因此,ISCOM疫苗能有效引起小鼠的免疫反应。

重组日本血吸虫脂肪酸结合蛋白在不同佐剂条件下的免疫效果观察(英文)

目的观察重组日本血吸虫脂肪酸结合蛋白在几种佐剂条件下的免疫预防效果。方法用E.coli表达日本血吸虫脂肪酸结合蛋白基因,制备日本血吸虫脂肪酸结合蛋白与GST的重组融合蛋白(rSj14/GST),分别以福氏完全佐剂(FCA)/福氏不完全佐剂(FIA)、卡介苗(BCG)和免疫刺激复合物(ISCOM)作为佐剂免疫昆明系小鼠,比较攻击感染后的减虫效果。结果以BCG为佐剂皮内免疫和以ISCOM为佐剂皮下免疫分别诱导了34.3%和36.0%的减虫率;而以FCA/FIA为佐剂进行免疫,虽然诱导了较高的抗体反应,但几乎没有产生明显的减虫效果(8.5%)。结论BCG和ISCOM均是rSj14/GST的适宜佐剂。

重组日本血吸虫中国大陆株28ku GST免疫刺激复合物对小白鼠的免疫试验

将体外重组的日本血吸虫中国大陆株２８ｋｕ谷胱甘肽Ｓ转移酶（ｒＳｊ２８ＧＳＴ）与免疫刺激复合物（ＩＳＣＯＭ）结合制备了ｒＳｊ２８ＧＳＴＩＳＣＯＭ。用含８５μｇｒＳｊ２８ＧＳＴ的ｒＳｊ２８ＧＳＴＩＳＣＯＭ及１００μｇｒＳｊ２８ＧＳＴ分别免疫ＢＡＬＢ／ｃ小白鼠，用常规ＥＬＩＳＡ检测体液免疫水平，以日本血吸虫中国大陆株尾蚴攻击后的减虫率表示免疫保护力。结果ｒＳｊ２８ＧＳＴＩＳＣＯＭ免疫组的减虫率为２５．５％，其荷虫数和空白对照组荷虫数相比有显著差异，而ｒＳｊ２８ＧＳＴ免疫组的减虫率仅为１５．２％，与空白对照组相比差异不显著；ＥＬＩＳＡ检测结果，ｒＳｊ２８ＧＳＴＩＳＣＯＭ免疫组比ｒＳｊ２８ＧＳＴ免疫组不仅抗体水平高。

ISCOM型白血病瘤苗联合1-甲基色氨酸免疫治疗荷瘤小鼠疗效观察

目的探讨免疫刺激复合物(ISCOM)型白血病肿瘤疫苗(简称瘤苗)联合1-甲基色氨酸对荷瘤小鼠的治疗作用。方法皂苷溶液中加入脂肪酶蛋白(1 mg/mL)7℃反应12h,加入80μL脂类混合物溶液和5 mL皂苷溶液(1 mg/mL)制备ISCOM型白血病瘤苗。C57BL/6小鼠分为模型组、ISCOM型白血病瘤苗组、1-甲基色氨酸组和联用组(ISCOM型白血病瘤苗+1-甲基色氨酸),小鼠注射FBL-3细胞建立白血病荷瘤小鼠模型,模型组给予等量生理盐水,其余各组接受对应药物治疗4周后,记录体质量,NK细胞、Mφ细胞和细胞毒T淋巴细胞(CTL)细胞杀伤活性、血清IL-10和IL-12表达水平。结果联用组瘤质量低于1-甲基色氨酸组和ISCOM型白血病瘤苗组[(0.64±0.26)g vs.(2.49±0.91)g,P<0.01;(0.64±0.26)g vs.(1.28±0.73)g,P<0.05)];联用组Mφ细胞杀伤活性显著高于1-甲基色氨酸组[(55.69±13.69)%vs.(69.47±14.79)%,P<0.01)];联用组NK细胞杀伤活性显著高于1-甲基色氨酸组[(38.41±8.27)%vs.(67.22±12.74)%,P<0.01];联用组CTL细胞杀伤活性高于1-甲基色氨酸组和ISCOM型白血病瘤苗组[(43.77±8.89)%vs.(69.68±11.44)%,P<0.01;(58.87±9.45)%vs.(69.68±11.44)%,P<0.05)];联用组IL-10均显著低于1-甲基色氨酸组、ISCOM型白血病瘤苗组[(76.2±6.82)pg/L vs.(98.3±13.4)pg/L,P<0.01;(76.2±6.82)pg/L vs.(202.3±44.5)pg/L,P<0.01)];联用组IL-12高于1-甲基色氨酸组、ISCOM型白血病瘤苗组[(381.2±47.3)pg/L vs.(332.1±30.2)pg/L,P<0.05;(381.2±47.3)pg/L vs.(291.2±17.3)pg/L,P<0.01)。结论 ISCOM白血病瘤苗联合1-甲基色氨酸具有较佳的抗瘤活性,其机制可能是通过介导IL-10和IL-12的表达。