单增李斯特菌IspD蛋白生物信息学分析及表达纯化

【目的】对单增李斯特菌IspD蛋白的潜在生物学功能进行预测分析,并表达纯化IspD蛋白,为后续IspD蛋白的研究提供理论支撑。【方法】从NCBI中获得单增李斯特菌IspD的编码序列(基因ID:986270)和氨基酸序列(登录号:NP_464611.1),运用生物信息学软件对IspD蛋白编码序列进行开放阅读框分析,对氨基酸序列进行基本特性、空间结构、抗原表位、修饰化位点、蛋白互作及相似性等预测分析。对IspD蛋白编码序列进行密码子优化并合成,采用无缝克隆法构建重组质粒pET-32a-IspD并转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,将测序和双酶切验证正确的阳性克隆经IPTG低温过夜诱导表达,采用镍柱亲和层析法纯化得到IspD融合蛋白,利用SDS-PAGE和Western blotting验证IspD融合蛋白表达、纯化及反应原性。【结果】IspD蛋白编码基因为lmo1086,全长711 bp,共有4个开放阅读框,其中ORF1为最长的开放阅读框,可编码236个氨基酸。氨基酸序列分析显示,IspD蛋白无跨膜结构域、信号肽,是一种亲水性蛋白,亚细胞定位于细胞质中,为2-C-甲基-D-赤藓糖醇-4-磷酸胞苷酰基转移酶。α-螺旋、延伸链、β-转角和无规则卷曲参与了IspD蛋白二级结构的组成,三级结构模型预测与二级结构特点相符。IspD蛋白具有多个T、B细胞抗原表位、固定无序结构域、磷酸化、糖基化、甲基化及乙酰化修饰位点。蛋白互作分析显示,IspD蛋白与DXR、IspF、ipk等多个蛋白存在相互作用,IspD与其相互作用最强的DXR蛋白之间通过氢键、盐桥等实现连接和相互作用。试验成功构建了表达菌株pET-32a-IspD,SDS-PAGE结果显示,在上清中高表达IspD融合蛋白;Western blotting验证显示,纯化的IspD融合蛋白具有反应原性。【结论】IspD蛋白具有成为候选诊断、疫苗研发和药物靶点等的潜在价值。试验表达纯化得到IspD融合蛋白,可为后续IspD蛋白具体功能的研究提供理论依据。

一例ISPD基因复合杂合变异所致的肢带型肌营养不良症2U型的诊断和基因检测分析

肢带型肌营养不良症(limb-girdle muscular dystrophy,LGMD)是一组罕见的非先天性遗传性肌肉疾病,主要表现为四肢近端肌张力及肌力进行性减退,其临床表现及遗传模式具有异质性。本研究报道了1例肢带型肌营养不良症2U型10岁男性患者,运动后出现双下肢肌肉无力,入院查肌酸激酶明显升高,经水化碱化治疗后无效。利用高通量测序方法对患者及其父母、妹妹进行肌营养不良相关基因检测,该患者存在ISPD基因外显子9杂合缺失以及c.1231C>T(p.Leu411Phe)的杂合错义变异,其父亲携带ISPD基因c.1231C>T(p.Leu411Phe)的杂合错义变异,母亲及妹妹携带ISPD基因外显子9杂合缺失,上述变异在现有的数据库及文献中均未见报道。对变异位点的保守性分析和蛋白结构预测分析表明,上述位点保守性高,且均位于ISPD蛋白C端结构域,可能对蛋白功能产生影响。综合以上结果并结合相关临床资料,可明确诊断该患者为肢带型肌营养不良症2U型。本文通过总结该患者临床特点及对ISPD基因新变异进行分析,丰富了ISPD基因变异谱,有助于该病早期诊断及遗传咨询。

基于ISPD指南的出口评分护理在腹膜透析患者中的干预效果

目的研究基于ISPD指南的出口评分干预护理对腹膜透析导管出口的干预效果。方法选取2016年12月至2019年12月本院肾内科收治的80例非卧床腹膜透析患者资料,采用随机法将其分为研究组(n=40)和对照组(n=40),对照组实施常规导管出口护理,研究组实施基于ISPD指南的出口评分护理,对比两组患者接受不同导管出口护理后并发症发生率、住院率、退出率及VAS评分。结果研究组患者的创口感染、腹膜感染、死亡并发症总发生率低于对照组[2.6%(1/40)比22.5%(9/40)],两组比较差异有统计学意义(P<0.05);研究组患者的住院率、退出率及VAS评分分别为0.0%(0/40)、0.0%(0/40)、(2.34±0.29)分,对照组分别为10.0%(4/40)、12.5%(5/40)、(3.01±0.51)分,研究组均显著低于对照组,两组比较差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论非卧床腹膜透析患者应用基于ISPD指南的出口评分护理干预,可有效改善或控制导管出口并发症的发生,减少住院率和退出率,降低患者局部疼痛感受,具有临床推广价值。

ISPD 2020版制订高质量、目标导向的腹膜透析处方指南要点解读

2020年5月,国际腹膜透析学会(International Society for Peritoneal Dialysis,ISPD)发布了《制订高质量、目标导向腹膜透析处方的指南推荐》,本文主要从指南发布的背景、制订高质量腹膜透析处方的推荐意见,以及相关推荐意见在临床应用中的问题等方面进行解读,以期为帮助临床腹膜透析专科护理人员更好地了解指南、应用指南,更深入地开展腹膜透析患者管理提供参考。

TRV介导的溪荪VIGS转化体系的构建与鉴定

病毒诱导基因沉默(Virus-induced gene silencing,VIGS)技术为缺乏稳定遗传转化体系的植物进行基因功能分析提供了可能,为解决缺少稳定遗传转化体系的植物进行基因功能验证的需求,以单子叶植物溪荪(Iris sanguinea)为材料,克隆IsPDS基因的特异性片段并构建其VIGS重组载体pTRV2-IsPDS,通过注射法侵染溪荪叶片,结果显示:pTRV1和pTRV2-IsPDS的菌液OD_(600)调至1.8~2.0后重悬,重悬液OD600调至0.8~1.0,通过注射器叶脉注射方式侵染溪荪叶片效果最佳。在室外温度为15~20℃的下午6~8时进行,用1 mL注射器针头扎伤溪荪叶片外表皮,沿着平行脉缓慢注射重悬液1mL至溪荪叶片维管束中,14 d左右会出现明显的白化表型。在出现表型变化的植株和空载组中均检测到TRV1和TRV2的病毒载体,白化植株的IsPDS表达量显著低于对照组。侵染液配制中通过提高携带病毒载体的农杆菌的浓度提高侵染效率,且接种后无需遮光。

甲基赤藓糖醇磷酸胞苷酰转移酶及其抑制剂研究进展

甲基赤藓糖醇磷酸(methylerythritol phosphate,MEP)途径是生产萜类化合物前体异戊二烯基二磷酸(isopentenyl diphosphate,IPP)和二甲基烯丙基二磷酸(dimethylallyl diphosphate,DMAPP)必要的生化途径之一,该途径广泛存在于植物、细菌及病原体体内,而哺乳动物中不存在。MEP途径包含的7个关键酶都可以作为新型农药和医药的作用靶标。甲基赤藓糖醇磷酸胞苷酰转移酶(2-C-methyl-D-erythritol-4-phosphate cytidyltransferase,IspD)是MEP途径的第三个关键酶,它的活性位点亲脂性低,但拥有独特的变构位点,近年来引起研究人员的广泛关注。利用IspD小分子抑制剂来阻断MEP通路,从而间接地抑制萜类化合物的生成,可以造成病菌和植物的死亡,达到杀菌或除草目的。本文对IspD结构、催化机理、IspD抑制剂及其作用机制等内容进行了综述,可为以IspD作为靶标的抑制剂的筛选以及新型农药和医药的开发提供指导。

基于等温表面电位衰减法的直流电缆用低密度聚乙烯和交联聚乙烯陷阱电荷分布特性

空间电荷积聚是影响直流电缆安全运行的重要原因,定量表征直流电缆用聚乙烯材料内陷阱电荷的分布特性并分析其内部陷阱产生的根源,对抑制空间电荷积聚、加强直流电缆安全可靠运行具有重要意义。为此,采用直流电晕充电法对低密度聚乙烯(low-density polyethylene,LDPE)和交联聚乙烯(crosslinked polyethylene,XLPE)薄膜试样进行了充电,以模拟直流加压时电荷的注入过程。通过考虑材料内入陷电荷的出陷规律,建立了1个等温表面电位衰减(isothermal surface potential decay,ISPD)模型。通过分析LDPE和XLPE薄膜试样的ISPD数据,获得了其内部陷阱电荷的分布特性,并进一步分析了LDPE与XLPE形态学特性和添加剂对陷阱形成的影响。结果表明:LDPE和XLPE中分别存在2个陷阱中心,即浅陷阱中心和深陷阱中心;LDPE中与XLPE中空穴深陷阱电荷密度都高于空穴浅陷阱电荷,即2者空穴陷阱电荷主要以深陷阱为主;XLPE中空穴浅陷阱电荷与空穴深陷阱电荷之间的数量差距减少,XLPE中空穴浅陷阱高于LDPE中空穴浅陷阱。交联副产物对XLPE内部陷阱的形成产生重要影响,且添加剂形成的空穴类型陷阱的深度并不完全相同。

《雷电防护》与《建筑物防雷设计规范》等国标的比较

介绍GB/T 21714-2015《雷电防护》系列标准的架构,并与国标GB 50057-2010《建筑物防雷设计规范》和GB 50343-2012《建筑物电子信息系统防雷技术规范》等标准进行比较和分析,主要比较术语、外部防雷装置(LPS)的参数选择、雷电电磁脉冲防护措施(SPM)、浪涌保护器(SPD)的参数选择等方面的问题。

采用等温表面电位衰减法表征LDPE与HDPE内陷阱的分布特性

空间电荷积聚对直流电缆的使用寿命和运行安全有重要影响,研究聚乙烯材料内陷阱电荷的分布特性并进一步分析其内部陷阱分布特性,对抑制聚合物材料中空间电荷积聚、提高直流电缆运行的可靠性具有重要意义。通过考虑聚合物材料内电荷的脱陷规律,提出了一个计算聚合物内陷阱分布的等温表面电位衰减(isothermal surface potential decay,ISPD)模型。通过测量低密度聚乙烯(low-density polyethylene,LDPE)和高密度聚乙烯(high-density polyethylene,HDPE)试样分别在正、负电晕放电充电条件下的表面电位衰减特性,获得其相应的陷阱分布规律,并根据2种试样不同的形态学特性进行分析。结果表明:LDPE与HDPE内陷阱主要以深陷阱为主,陷阱密度近似为1021 m^(-3),与其它文献报道的相一致;HDPE内电子深陷阱多于LDPE内电子深陷阱,电子浅陷阱少于LDPE内电子浅陷阱;LDPE内电子深陷阱多于空穴深陷阱,电子浅陷阱少于空穴浅陷阱。分析认为:LDPE与HDPE独特的聚集态结构,以及电子和空穴电导的差异对陷阱电荷分布产生重要影响。

不同温度热老化对高压配网交联聚乙烯电缆绝缘表面陷阱参数的影响

陷阱参数可影响交联聚乙烯(cross-linked polyethylene,XLPE)电缆绝缘中载流子的注入和迁移过程,进而对XLPE电缆绝缘的介电性能产生影响。针对商用110kV的高压配电电缆绝缘,通过等温表面电位衰减(isothermal surface potential decay,ISPD)测试系统研究不同温度热老化过程对XLPE电缆绝缘表面陷阱参数的影响。实验结果表明,未老化的XLPE电缆绝缘表面以电子深陷阱和空穴深陷阱为主,当老化温度低于XLPE的熔融温度(T_m)时,浅陷阱密度增加,深陷阱密度变化幅度不大,XLPE电缆绝缘表面仍以深陷阱为主。而当老化温度高于Tm时,电子、空穴浅陷阱密度大幅增加,深陷阱密度大幅下降,陷阱能级下降,老化临界时间之后,XLPE试样表面以电子浅陷阱和空穴浅陷阱为主。热老化试样中浅陷阱密度的增加可能来源于羰基(C=O)等老化副产物的增加,深陷阱密度的下降可能是来源于老化过程对球晶的破坏。不同老化温度条件下表面陷阱密度和能级变化规律的差异可能是由晶体结构劣化方式的差异造成。

腹带加压预防腹膜透析置管术后患者隧道口出血、促进出口愈合的价值

目的观察腹带加压措施在预防腹膜透析置管术后患者隧道口出血、促进出口愈合等方面的应用价值。方法选择2017年2月-2021年5月在本院接受腹膜透析置管术治疗的62例患者作为研究对象,依据其入院时间将2017年2月-2019年3月入院的31例患者纳入对照组,将2019年4月-2021年5月入院的31例患者纳入观察组。对照组术后腹部伤口仅行常规换药处理,不采用腹带加压;观察组术后采用腹带加压。比较两组出口愈合情况[腹部伤口拆线时间、ISPD出口评分系统得分]、术后腹部伤口出血率及相关并发症(管周渗漏、出口红肿、隧道炎)发生率。结果观察组腹部伤口拆线时间较对照组短,ISPD出口评分系统得分、术后腹部伤口出血率及并发症总发生率均低于对照组(P<0.05)。结论腹膜透析置管术后对患者实施腹带加压可有效控制其术后腹部伤口出血情况,促进出口愈合并减少隧道口炎症、红肿等并发症的发生。

2015国际腹膜透析协会成年腹膜透析患者心血管及代谢管理指南解读

心血管疾病并发症严重影响腹膜透析(PD)患者的远期生存率,是其死亡的主要原因之一。国际腹膜透析协会(ISPD)于2015年7月发布的成年腹膜透析患者心血管及代谢管理指南,重点关注PD的证据分析,同时补充了改善全球肾脏病预后组织(KDIGO)指南中未涉及的内容。本文对该指南中心血管危险因素的评估和管理、心血管并发症的管理两部分内容进行解读,旨在为临床实践提供参考。