鸡大肠埃希菌S1菌株iss基因的序列

采用1日龄雏鸡对1株鸡源大肠埃希菌的致病性进行测定,并检测iss基因。结果表明:鸡E.coli S1对1日龄雏鸡具有较强的致病性。iss基因在S1菌株中的核苷酸序列与已知禽大肠埃希菌iss基因序列同源性为100%,与人源大肠埃希菌iss基因同源性为90.9%。

PCR方法检测大肠杆菌iss基因的缺陷及改进

采用KOD酶和r Taq酶,分别通过套式PCR检测10株大肠杆菌iss基因,以探讨PCR检测大肠杆菌iss基因的缺陷及改进方法。结果表明,r Taq酶、KOD酶对大肠杆菌iss基因1次PCR检出率分别为40%、70%,套式PCR检出率分别为80%、100%;KOD酶1次PCR检出率高于r Taq酶,但未达100%,采用KOD酶套式PCR可降低大肠杆菌iss基因的漏检可能性。

三株O_(78)、O_(137)混合血清型鸡大肠埃希菌iss基因的序列分析

采用1日龄雏鸡对3株O78、O137混合血清型鸡大肠埃希菌的致病性进行了测定,并扩增了iss基因。结果表明,3株O78、O137混合血清型鸡大肠埃希菌均对1日龄雏鸡具有较强的毒力。iss基因在3株O78、O137混合血清型鸡大肠埃希菌中的序列与已知的禽大肠埃希菌iss基因序列的同源性为100%,与人源大肠埃希菌iss基因序列的同源性为90.9%,显示了此基因的保守性。

鸡大肠杆菌O2/O74混合血清型菌株iss基因的克隆与序列测定

采用PCR方法对1株O2/O74混合血清型鸡大肠杆菌检测其iss基因的存在,并与1株O2血清型鸡大肠杆菌相比较。结果表明:鸡E.coliO2/O74混合血清型菌株携带iss基因,但采用目前通用的PCR方法并不能检测出iss基因,必须经套式PCR扩增才能检测出iss基因。O2/O74混合血清型菌株iss基因序列与已知禽大肠杆菌iss基因序列同源性为99.7%;与人源大肠杆菌iss基因进行比对,同源性为90.6%;与λ噬菌体bor基因序列进行比对,同源性为88%,显示了此基因的保守性。

一株O1血清型鸡大肠埃希菌iss基因的序列分析

采用1日龄雏鸡对1株O1血清型鸡源大肠埃希菌(E.coli)的致病性进行测定,并扩增iss基因。结果表明,鸡E.coliO1对1日龄雏鸡具有较强的毒力。iss基因在致病性鸡E.coliO1中的序列与已知禽大肠埃希菌iss基因序列同源性为100%,与人源大肠埃希菌iss基因核苷酸,序列同源性为90.9%,显示了此基因具有保守性。

2株O_(109)血清型鸡大肠埃希菌iss基因的序列分析

对2株强致病性O109血清型鸡大肠埃希菌扩增了iss基因。结果表明,iss基因在2株O109血清型鸡大肠埃希菌中的序列与已知禽大肠埃希菌iss基因序列同源性为100%,与人源大肠埃希菌iss基因序列同源性为90.9%,显示了此基因的保守性。

三株鸡源大肠杆菌iss基因的检测

采用鸡胚致死对HL11、HL32、SD27鸡源大肠杆菌（Escherichia coli）的致病性进行测定,并检测其血清抗性及iss基因序列。结果表明,3株大肠杆菌为致病性、血清补体敏感菌株,iss基因序列与已知禽大肠杆菌iss基因序列同源性为99.0%～99.7%。

鸡致病性大肠杆菌O_(78)菌株iss基因的克隆与测序

对1株O78血清型鸡源致病性大肠杆菌采用PCR方法检测iss基因的存在。结果显示,鸡E.coliO78菌株携带iss基因,但采用目前通用的PCR方法并不能检测出iss基因,必须经套式PCR扩增才能检测出来。O78菌株所携带iss基因的序列与已知禽大肠杆菌iss基因序列同源性为99.4%,与人源大肠杆菌iss基因同源性为90.3%,与λ噬菌体bor基因序列同源性为87.7%,显示了该基因的保守性。

不同动物来源大肠埃希菌iss基因检测及致病性研究

研究不同动物来源大肠埃希菌iss基因分布及其致病性。分别将分离于发病猪、鸡和犊牛的44株大肠埃希菌计数后腹腔注射小白鼠，观察临床症状，记录发病及死亡情况；采用PCR方法分别扩增不同动物来源的44株大肠埃希菌的iss基因存在情况，同时对部分PCR扩增产物测序并进行同源性分析。感染后小白鼠出现不同程度的临床症状。其中有14株对小白鼠的致病性最强，感染小鼠的死亡率达100％；有25株致病性较弱，死亡率为20％～80％；而另有5株接种感染后小鼠均无死亡；iss基因在致病性大肠埃希菌中的PCR扩增总频率为79．5％；在毒力较强大肠埃希菌中的PCR扩增频率为92．8％；在无致病力（或低毒力）大肠埃希菌中的PCR扩增频率为16．7％；部分基因片段核苷酸序列与参考序列之间同源性在91．6％～99．0oA。iss基因致病性强的菌株扩增频率明显高于其他菌株，且不同来源菌株iss基因片段变异程度不大。

iss基因与鸡大肠杆菌致病力的关系

为探讨iss基因的存在及其核苷酸序列的差异与鸡大肠杆菌致病力的关系,分别采用普通PCR及套式PCR方法检测iss基因在21株鸡大肠杆菌菌株中的分布,并进行序列测定,分析菌株携带iss基因的情况及不同毒力的菌株间iss基因序列的差异。结果显示,经套式PCR检测21株鸡大肠杆菌均携带iss基因,而普通PCR检测显示仅有13株携带iss基因;16株菌株iss基因与国外禽大肠杆菌iss基因参考序列同源性为100%;其余5株中,E1与参考序列同源性为93.5%,E33、O78与参考序列同源性为99.4%,E4、E21与参考序列同源性为99.7%。推测,iss基因可能在不同来源、不同毒力、不同血清型的鸡大肠杆菌中都普遍存在,仅是拷贝数高低不同,而不是目前普遍认为的"有或无"的关系,并且iss基因序列是高度保守的。iss基因与鸡大肠杆菌致病力的相关性可能与它所定位的质粒拷贝数有关,与iss基因的序列差异无关。

鸡源致病性大肠杆菌iss基因原核表达产物的免疫保护作用

本试验以鸡E.coli强致病力菌株HO2的iss基因原核表达产物GST-Iss融合蛋白,免疫SPF鸡获得抗血清。分别检测菌株HO2在抗血清及正常血清中的存活状况,通过比较两者差别,探讨iss基因原核表达产物的免疫保护作用。结果显示,所获鸡大肠杆菌iss基因原核表达产物的抗血清能够减弱菌株的血清抗性,对鸡E.coli强致病力菌株HO2有抑制增殖或杀灭的作用。

鸡大肠杆菌iss毒力基因研究进展

鸡大肠杆菌病是由某些大肠杆菌的致病菌株引起的一种细菌性传染病,危害养殖业和食品安全。尽管大肠杆菌致病力是由多种毒力因子共同作用的,但近年对iss基因的研究结果表明,iss基因可能在细菌致病力检测、蛋白免疫方面具有发展潜力。综述了鸡大肠杆菌发病机理、血清抗性、iss基因等方面的最新研究进展。

34株鸡大肠杆菌的分离鉴定及致病力分析

本研究从鸡泄殖腔取样,分离大肠杆菌菌株,进行生化鉴定。结果显示34株菌株符合大肠杆菌的培养特性。将分离得到的34株大肠杆菌与购买的4株鸡大肠杆菌分别接种鸡胚,对致病力进行分析。结果采用数据处理软件SPSS分析90%置信区间,其中19株为致病力较强菌株(致死率大于上限38.4%),16株为致病力较弱或无致病力菌株(致死率小于下限25.1%),3株为中等致病力菌株(致死率在上限和下限之间)。通过套式PCR对38株菌的iss基因进行检测,阳性率为100%。结果表明,iss基因(increased serum survival gene)在鸡大肠杆菌中广泛存在,38株鸡大肠杆菌均有iss基因,但致病力大小不同,故推测致病力大小可能与iss基因的存在无关。

鸽肠杆菌i ss基因的LAMP检测

针对鸽肠杆菌的传统检测方法检测周期长的问题,笔者建立了快速检测鸽肠杆菌的环介导等温扩增(LAMP)法。笔者以肠杆菌属毒力标志基因(iss基因)的保守区域设计4条特异性LAMP引物,分别进行了反应条件的优化、灵敏度试验、特异性试验、限制性内切酶试验。结果显示,其最优的体系中甜菜碱浓度为1.6 mol/L,Mg SO4浓度为2.5 mmol/L,内外引物浓度比FIP∶BIP∶F3∶B3=3∶3∶1∶1。将所有反应混合物置于63℃恒温反应40 min就能完成对iss基因的扩增,肉眼可观察检验结果。该方法具有良好的特异性,灵敏度是PCR的1000倍。这是一种快速、特异、灵敏的肠杆菌属iss基因LAMP检测方法,其适用于基层和现场检测。