ISSR技术及其在玉米研究中的应用

简要介绍了简单序列重复区间(Simple sequence repeat,ISSR)技术的原理及特点,着重介绍了近年来ISSR技术在玉米品种纯度鉴定、遗传图谱构建、目标性状基因定位、及遗传多样性中的应用现状及前景。

ISSR技术应用于香蕉种质资源的研究进展

香蕉是热带与亚热带地区重要的经济水果,也是我国的经济作物之一。简单序列间重复序列(ISSR)为一种新型的分子标记技术,因其具有模板DNA的用量少、操作简单、快速等优点。常用于植物遗传多样性、种质资源的丰富度等的研究。通过分析ISSR技术的原理与特点,利用其对不同地域、不同国家的多个香蕉品种的亲缘关系与抗性相关方面的研究近况。探讨目前使用ISSR技术存在的问题,并展望其未来的研究前景。

基于ISSR技术的茭白种质资源遗传多样性

采用简单序列重复区间扩增多态性(ISSR)分子标记技术对30份茭白品种进行遗传多样性分析。结果表明,8个ISSR引物共扩增获得31条多态性条带,多态性比例为40.26%;通过遗传相似系数和聚类分析,能将30份茭白品种区分开,说明ISSR标记技术能从分子水平揭示茭白品种的遗传多样性。

DNA条形码及ISSR技术对广藿香种质资源的分析

目的采用DNA条形码技术和分子标记技术研究不同产地广藿香的遗传多样性,探讨从基因水平区分不同产地广藿香的方法。方法分别采用DNA条形码技术和ISSR分子标记技术对不同产地的广藿香进行分析。DNA条形码——PCR扩增ITS2和psbA-trnH条形码序列,产物纯化后测序,采用软件CLUSTALX 1.81和MEGA 6.06对序列进行对比分析。ISSR分子标记——采用60条ISSR引物进行试验,筛选出条带清晰、多态性好的ISSR引物进行PCR、电泳及聚类分析。结果 DNA条形码技术分析结果显示不同产地广藿香差异很小;ISSR分子标记技术分析结果显示肇庆和阳春的广藿香亲缘关系较近,湛江广藿香与其他两个产地亲缘关系均较远。结论 ISSR分子标记技术可作为鉴别不同产地广藿香的依据之一。

基于ISSR技术对藏药“蒂达”3种基源植物的亲缘关系分析

目的:对藏药“蒂达”的3种基源植物紫红獐牙菜、青叶胆和椭圆叶花锚进行亲缘关系研究。方法:利用简单重复序列区间(ISSR)分子标记技术对紫红獐牙菜9个样品(样品ZT-1~ZT-5采自大理苍山感通寺,样品ZC-1~ZC-4采自大理宾川县)、青叶胆2个样品(QYD-1~QYD-2)和椭圆叶花锚2个样品(HM-1~HM-2)进行聚合酶链式反应(PCR)扩增。采用青叶胆的DNA基因组为模板DNA进行引物筛选,对筛选得到的8条引物进行PCR反应;对PCR扩增产物进行人工读带,建立原始数据矩阵,并计算多态性条带比率;同时,采用NTSYS 2.1软件计算遗传相似系数,并选择UPGMA法绘制聚类图。结果:通过8条ISSR引物共反应获得113条清晰可辨的PCR扩增产物条带,多态性位点百分率为100%。紫红獐牙菜、青叶胆和椭圆叶花锚3个品种共13个样品的遗传相似系数在0.301~0.500之间;紫红獐牙菜9个样品的种内遗传相似系数在0.752~0.929之间。聚类分析结果显示,当距离线为0.410时,可将13个样本分为3个类群,即青叶胆、椭圆叶花锚、紫红獐牙菜;当距离线为0.780时,可将紫红獐牙菜的9个样品分为2个亚类,一个亚类只有苍山感通寺采集的样品ZT-1,另一个亚类含有其余8个样品。结论:利用ISSR分子标记技术能从分子水平对紫红獐牙菜、青叶胆和椭圆叶花锚进行鉴别。紫红獐牙菜与青叶胆、椭圆叶花锚存在一定的亲缘关系,但亲缘关系相对较远、遗传差异较大;大理地区两个不同地点产紫红獐牙菜的遗传差异较小、亲缘关系较近,但表现出丰富的遗传多样性。

ISSR指纹图谱技术在种质资源研究上的应用

ISSR指纹图谱技术是一种新的基于简单序列重复区间扩增多态性的分子标记技术。利用该技术能准确、快速地鉴定植物品种,目前已广泛应用于各种种质资源的鉴定,遗传关系和遗传多样性分析,以及种质资源指纹图谱的建立。对ISSR指纹图谱的基本原理及其在种质资源鉴定分析上的应用进行了简要概述。

用ISSR标记技术分析山药品种遗传多样性

利用ISSR标记技术对28个山药品种的遗传多样性进行分析。结果表明,从44条ISSR引物中可筛选出7条能够扩增出清晰、稳定条带的引物;这7条ISSR引物对28个山药品种扩增条带间存在较大差异,多态性条带比率为83.01%,Shannon多样性指数为0.3191;构建的分子树状图将28个山药品种划分为4组:第一组含有日本白、花山药和日本园3个品种;第二组为小叶山药;第三组为嵩野1号;其余23个品种归入第四组。而且主成分分析结果支持上述的聚类分析结果。这为利用ISSR标记技术鉴定山药品种,为有效地利用山药种质资源提供了依据。

用ISSR标记技术分析中国和瑞典甘蓝型油菜的遗传多样性

利用ISSR(inter simplesequencerepeats)技术比较了 2 4份中国半冬性、瑞典冬性和瑞典春性油菜的遗传多样性。 2 0个引物扩增出了 12 5条多态性带。UPGMA聚类分析将 2 4份材料分为 3组。第一组为 6份瑞典冬性和 8份中国半冬性材料 ,第二组为 2个中国半冬性材料湘油 15号和保 81,第三组为 8份瑞典春性材料。主成分分析结果与聚类分析结果相似 ,表明研究所用中国半冬性、瑞典冬性和瑞典春性 3类材料彼此间区分明显 ,中国半冬性油菜与瑞典冬性油菜的遗传关系比与瑞典春性油菜的关系近。结果显示 。

ISSR标记技术及其在遗传多样性研究中的应用

ISSR(Inter SimpleSequenceRepeat)技术是在PCR中直接使用微卫星序列进行DNA扩增的一种DNA分子标记。文章主要介绍了ISSR标记的原理、方法、特点及其在遗传多样性研究中的应用。ISSR标记方法具有无需知道任何靶标序列的微卫星背景信息、遗传多态性高、检测快速等特点,在遗传多样性研究中具有广泛的应用前景。

ISSR分子标记技术在分析玉米自交系遗传关系研究中的适用性

利用ISSR分子标记技术对5 9份玉米自交系和1份大刍草材料进行遗传多样性分析。2 1对ISSR引物共扩增出4 75条不同位置的带,平均2 2 6条;多态性带4 6 9条,平均2 2 3条,百分率高达98 7% ;不同引物的多态性信息指数(PIC)在0 84～0 94之间。6 0份材料的遗传相似系数在0 2 3～0 4 8之间。经聚类分析,可将这些材料分成两大组,共9个亚组,并且在一定程度上与血缘和系谱是一致的,也存在一些例外。结果表明,ISSR标记尽管可以用于进行遗传多样性分析,但并不是最好的分子标记类型。综合考虑不同的分子标记类型的优缺点,认为ISSR标记在遗传研究较少的作物上应用潜力较大。

7个野生云芝基于ITS序列和ISSR的亲缘关系分析

以湖南省的7个野生云芝菌株为试验材料,基于ITS序列进行分子鉴定以确定样品的种属关系,以MEGA 11.0软件中的邻接法构建系统发育树,采用ISSR分子标记技术对样品进行遗传多样性分析并构建DNA指纹图谱,同时辅以拮抗及栽培试验对结果进行验证。结果表明,7个野生菌株与云芝的同源性为95%~100%;构建的系统发育树显示7个菌株均与云芝聚为1支,且菌株NX4和NX6高度同源。筛选到6条重复性好且条带清晰的ISSR引物,平均每条引物扩增出11条谱带,多态位点百分率为95.5%;ISSR遗传聚类图谱显示在相似性为67%时,7个云芝菌株可聚为2类,其中NX4、NX6归于一类,其他5个菌株归于一类且NX3和NX18遗传差异较小。结合拮抗和栽培试验结果,基于子实体半径尺寸可将NX4和NX6归于一类。

基于ISSR分子标记的44种山药种质资源遗传多样性分析

为探讨不同地区山药种质资源类型及遗传多样性亲缘关系,为山药品种选育、种质资源的保护利用提供参考。采用ISSR标记技术对44份山药种质资源进行遗传多样性及聚类分析。结果表明:从100条随机引物中筛选出8条随机引物,8条引物扩增获得的总谱带数为87条,多态性谱带数为87条,多态性谱带比例为100%。聚类分析将44份种质资源分成4个类群,从结果看ISSR标记技术聚类分析与植物分类学进行的基原分类结果基本一致,44份山药种质资源的遗传距离在0.0313~0.7216,以遗传距离为0.5618进行划分,可以将44份山药种质资源划分为5类,其中薯蓣与褐苞薯蓣亲缘关系最近,与山薯较远,与参薯距离最远。

ISSR分子标记技术在作物遗传育种中的应用

作物遗传育种是专门研究农作物遗传改良的理论、方法与技术的科学;搞好作物遗传育种,可以为农业生产培育优良的作物品种。而ISSR分子标记技术则是一项重要的分子标记技术,该技术具有较高的稳定性与多态性,成本低廉,可以广泛应用于不同生物基因组多态性分析中。文章结合实例,阐述了ISSR技术在作物遗传育种中的应用。

不同地区广金钱草遗传多样性的ISSR分析

目的:对广东省、广西壮族自治区共15个产地的广金钱草遗传多样性以及亲缘性关系进行分析。方法:应用inter-simple sequence repeat(ISSR)技术,对广东省、广西壮族自治区的样品进行遗传多样性分析;使用Popgene 1.32软件对扩增结果进行分析,并使用UPGMA软件绘制聚类图。结果:7条ISSR引物扩增出的产物共有51条清晰的条带,其中多样性条带为41条;Shannon多样性指数(I)为0.3,Nei’s遗传多样性指数(H)为0.246 4,居群间的遗传分化系数(G_(ST))为0.123 8,基因流(N_m)为3.539 7。结论:广东、广西两地栽培以及野生广金钱草具有较高的遗传多样性,其遗传距离跟地理距离有一定的关联性。

应用拮抗和ISSR方法综合鉴定灰树花菌株

【目的】准确、科学地鉴定灰树花菌株,明确其亲缘关系。【方法】采用拮抗和ISSR分子标记对供试的11个灰树花菌株进行鉴定和遗传多样性分析。【结果】拮抗反应表明,供试菌株之间拮抗作用有一定差异,根据拮抗反应的有无,供试菌株分为4组。ISSR分子标记分析表明,当相似性系数达到0.87水平时,供试菌株聚成5组,第1组包括菌株1 (石家庄灰树花)、2 (台灰)、10 (XG-W)、5 (Gr0001+2)、6 (CN)、7 (雪圆);第2组为菌株11 (CN-9);第3组为菌株4 (Gr0003);第4组包括菌株8 (H)、9 (Hokto);第5组为菌株3(Gr20)。【结论】拮抗反应与ISSR两种方法结论较一致,推测石家庄灰树花与台灰,Gr0001+2、CN与雪圆,H与Hokto这3组菌株分别来源于同一个菌株,属于同种异名现象Gr0003、H和Hokto亲缘关系较远;Gr20与其他菌株亲缘关系最远。

不同黄芪和党参栽培品种(系)遗传关系的ISSR分析

目的研究不同品种(系)黄芪和党参的遗传关系。方法对25个不同品种(系)黄芪和17个不同品种(系)党参进行ISSR-PCR扩增,用Popgen32软件分析其遗传多样性及遗传距离,应用NTSYS软件构建Nei's遗传距离UPGMA聚类。结果黄芪、党参样本分别检测出62、100个位点,多态位点百分率均为100%,Shannon信息指数平均值分别为0.537 6、0.472 7,Nei's基因多样度平均值分别为0.361 3、0.307 4;黄芪在遗传距离0.59、党参在遗传距离0.50处均被聚为2类。结论不同品种(系)的黄芪和党参在物种水平上具有较高的遗传多样性,且品种(系)间遗传差异较大。

利用正交设计优化水曲柳ISSR-PCR反应体系

利用正交设计L16(45)对水曲柳ISSR-PCR反应体系的5因素(Taq酶,Mg2+,模板DNA,dNTP,引物)在4个水平上进行优化试验,PCR结果用统计软件MINITAB分析:①各因素的不同水平对PCR反应结果都有显著的影响,其中Taq酶量影响最大;②筛选出各反应因素的最佳水平,建立水曲柳ISSR-PCR反应的最佳体系(20滋l)为:Taq酶1.0U,Mg2+2.0mmol/L,模板DNA50￣200ng,dNTP0.15mmol/L,引物0.3滋mol/L。最后,对水曲柳ISSR-PCR最佳反应体系进行梯度退火,得到最佳退火温度为58.3℃。这一优化系统的建立为今后利用ISSR标记技术,研究水曲柳的地理变异提供一个标准化程序。

19个秀珍菇菌株种质鉴定及遗传多样性分析

采用拮抗试验、酯酶同工酶测定和ISSR分子标记技术从形态学、蛋白质和分子角度对19个生产中常用的秀珍菇菌株进行鉴定分析和遗传多样性评价。最终3种方法测定结果高度一致,19个秀珍菇菌株可划分为四类:第一类有9个菌株,分别为1、7、8、9、10、11、15、16、17号;第二类有8个菌株,分别为2、3、4、5、6、13、14、19号;第三类有1个菌株,为12号;第四类有1个菌株,为18号。

天女花与广玉兰杂交F_1代的ISSR遗传多样性分析

利用ISSR分子标记技术探讨了天女花与广玉兰杂交后代9株幼苗的遗传多样性。9株F_1代幼苗根据生长健壮的情况依次标记为SA、SB、SC、SD、SE、SF,、SG、SH、SI。选用10个ISSR引物对亲本以及9株F_1代幼苗的基因组进行分析。结果表明,11株植物共扩增出96条DNA条带,其中多态性条带为85条,占总条带的88.5%。UPGMA聚类结果表明所有F_1代幼苗与六倍体父本更为相似,与二倍体的母本遗传距离较远。其中SC无论从叶片大小、边缘的形态在9株F_1代幼苗中与父本最相似,SG叶片为披针形,在9株F_1代幼苗中较为特殊。其余7株F_1代幼苗日渐成熟后再根据UPGMA聚类树状图进行形态多样性分析。

应用ISSR分子标记研究茶树种质资源遗传多样性

采用ISSR分子标记技术对川渝茶树资源进行了遗传多态性分析。结果表明，川渝茶树资源遗传多态性丰富，12条ISSR引物共产生100条扩增带，其中多态性条带90条（占90．0％）。ISSR标记遗传相似系统（GS）变异范围为0．41-0．87。通过类平均聚类（UPGMA）法，可将14份材料分为2个大类。