苎麻细胞质雄性不育系与保持系线粒体DNA的ISSR检测

采用蔗糖衬垫法提取苎麻雄性不育系与相应保持系的线粒体DNA。选用了38个ISSR引物进行ISSR-PCR扩增,在编号为ISSR-29、33、34引物中找到了苎麻不育系与相应保持系线粒体DNA之间的差异。

广丰千金薯离体快繁及其气孔观察、染色体倍数FCM分析和DNA变异ISSR检测

目的：对广丰千金薯的离体快繁进行研究,并对其移栽驯化苗和盆栽苗的气孔、染色体倍数和DNA变异进行观察比较、FCM分析和ISSR检测,旨在为广丰千金薯种苗规模化生产提供技术基础。方法：采用植物组织培养的方法,建立和优化广丰千金薯离体快繁技术体系,并用透明胶带粘取法观察和比较移栽驯化苗和盆栽苗的气孔参数,用FCM分析移栽驯化苗和盆栽苗的染色体倍数,用ISSR检测分子标记检测移栽驯化苗和盆栽苗的DNA变异。结果：广丰千金薯离体快繁技术体系为：选取带芽的稍木质化茎段,经70%酒精消毒1 min、无菌水冲洗3次、0.1%氯化汞消毒12 min、无菌水冲洗3次,然后接种到MS＋KT 1 mg/L＋NAA 0.2 mg/L固体培养基上置于温度为（25±2）℃、光照强度为1 500～2 000 Lx、光照时间为14 h/d的条件下培养。待到新芽长至2～3 cm,便将其切下接种于MS＋KT 2 mg/L＋NAA 0.5 mg/L液体培养基中继续置于上述培养条件下培养。培养90 d左右便可形成完整植株。移栽时将封口膜打开,依旧置于上述培养条件下培养2～3 d,然后取出完整植株洗净培养基后放入盛有浅层MS基本培养液的容器中进行室内移栽驯化,待到新芽从植株上长出,即可取出驯化苗移植于户外盛有沙土（1∶1,40%甲醛消毒）的盆中,每天早晚各浇水1次,成活率达100%。气孔观察、FCM分析和ISSR检测结果显示,移栽驯化苗和盆栽苗的气孔参数和染色体倍数无显著性差异,两者的ISSR扩增谱带也无特异性条带产生。结论：建立和优化了广丰千金薯离体快繁技术体系,再生植株没有发生遗传性变异,可以保证其遗传稳定性。

玛瑙红樱桃离体快繁及组培苗的变异检测

以贵州玛瑙红樱桃的休眠芽为外植体,通过不同激素质量浓度组合的正交试验,建立了高效的离体培养体系;利用ISSR分子标记,对组培苗的遗传变异进行检测,结果表明:在引物检测范围内,玛瑙红樱桃离体快繁至第8代仍然能保持其遗传稳定性;DNA甲基化的MASP分析表明,组培苗的甲基化敏感多态性随继代次数的增加而逐步升高,第5代组培苗总甲基化率最高,为21.4%,全甲基化率为12.4%,半甲基化率为9.0%.

基于ISSR的半夏离体培养材料遗传稳定性研究

目的:对连续继代的1~8代组培苗及移栽后1~3代半夏进行遗传稳定性分析,为半夏人工种子的研制提供参考依据。方法:以块茎作为外植体离体培养的连续1~8代组培苗、移栽后的1~3代半夏为材料,筛选引物、最佳退火温度以及DNA模板,建立ISSR-PCR反应体系,统计条带,计算多态率;并利用Ntsyspc 2.1对条带数据进行聚类分析。结果:筛选出18个条带清晰、完整的引物,共扩增出225个条带;其中1~4代组培苗及移栽后1~3代半夏均为单态带,多态位点百分率为0,5~8代组培苗共有32个多态条带,多态率2.78%~10.26%;UPGMA聚类结果表明1~4代组培苗基因型没有发生明显改变。结论:连续继代1~4代组培苗及移栽后1~3代半夏具有遗传稳定性,可作为优选材料用于半夏的人工繁殖;为半夏人工种子研制、良种繁育及大规模工厂化生产提供了分子理论依据。

走马胎种质资源遗传多样性的ISSR分析（英文）

走马胎(Ardisia gigantifolia)是紫金牛科(Myrsinaceae)紫金牛属(Ardisia)多年生小灌木植物。走马胎作为我国传统中药材,已有多年的药用历史。目前,走马胎不再局限于临床药用,在食疗和保健方面的开发利用崭露头角,大大扩展了其应用范围。随着走马胎市场需求量的增大,野生走马胎植物被过度采挖,导致野生走马胎资源几乎枯竭。人工栽培走马胎逐渐成为供应药用市场的主力军,但是人工栽培走马胎种质、种子来源混杂,常会造成质量和疗效的不稳定,而利用分子标记技术可以从分子水平上对走马胎进行种质的区分和评价。该研究利用ISSR分子标记技术,对来自广西地区的36份走马胎种质资源进行了遗传多样性分析,采用POPGEN32软件进行数据分析,用UPGMA软件绘制聚类图。结果表明:14条ISSR引物共检测到136个清晰的扩增位点,多态性位点112个,多态位点百分率为82.35%;Nei’s基因多样性指数(H)为0.296 5,Shannon多样性指数(I)为0.441 7,基因分化系数(Gst)为0.855 8。个体间的遗传相似系数为0.667 8~0.838 2,平均为0.739 1。基于聚类分析可知,所有的个体被划分为5类,其中绝大多数来自相同或者邻近地区的个体严格按照地理位置聚为相同的一类或者亚类,只有少数个体在归类上与地理位置相悖。研究证明ISSR分子标记技术在评价走马胎种质资源亲缘关系和遗传变异等方面有很好的适用。该研究结果为该药用植物的种质资源评估和引种栽培提供了科学依据。

桂林大旗瓣凤仙花遗传多样性的ISSR分析

采用ISSR分子标记技术对桂林3个居群的30份大旗瓣凤仙花样品进行遗传多样性分析,结果表明,6个被筛选到的ISSR引物共扩增出52条谱带,其中47条为多态带,多态率达90.38%,表明桂林大旗瓣凤仙花资源的遗传多样性非常丰富。居群间遗传分化系数为0.04838,基因流为2.8626,表明居群间存在较低的遗传分化,这可能主要是由其繁育特性造成的。聚类分析结果表明,采自同一产地的不同大旗瓣凤仙花样品未能严格聚合在一起,此结果可能是由于采样地地理距离较近或者花粉的传播方式所致。

紫背天葵遗传多样性的ISSR分析（英文）

【目的】对野生紫背天葵资源的遗传多样性研究可为其育种、利用和保护提供参考依据。【方法】应用ISSR分子标记技术对广东肇庆鼎湖山、广西桂林大野神境、青狮潭3个紫背天葵野生居群的遗传多样性进行分析。采用POPGEN32进行数据分析,UPGMA绘制聚类图。【结果】12条ISSR引物共检测到112个清晰的扩增位点,多态性位点102个,多态位点百分率为91.07%;Nei's基因多样性指数(He)为0.3383,Shannon多样性指数(I)为0.5011,基因分化系数(Gst)为0.1507。居群间的遗传相似系数为0.8949~0.9162,平均为0.9026。聚类分析可知,各居群个体的聚类与其地理位置一致。【结论】紫背天葵具有较高的遗传多样性,但居群间的遗传分化水平较低,建议可将各种群后代种子或幼苗相互交叉移栽,以提高群体间的基因交流,增加遗传多样性水平。

优质速生抗虫紫花苜蓿多元杂交后代的ISSR分析

应用ISSR分子标记技术研究苜蓿品种甘农3号、甘农5号、游客及其杂交后代19份材料的遗传多样性,为其遗传改良和分子标记辅助育种提供依据。结果:6个ISSR引物共扩增出37条带,其中31条带是多态性谱带,多态性比率平均值为83.78%,平均每个引物扩增出6.17条带。用POPEGENE 32软件分析有效等位基数(Ne)、Nei’s基因多样性指数(H)、Shannon’s信息指数(I)的平均值分别为1.484 2、0.287 5、0.432 3,遗传多样性水平较高;19份材料间的遗传相似系数(GS)为0. 486 5～0.945 9;通过UPGMA分子系统聚类法构建分子树状图,可把19份材料划分为5个类群,第1类包括速生1~#、速生11~#、速生12~#共3份种质材料;第2类包括速生5~#、大叶2~#、速生26~#、直立、甘农5号、速生15~#、速生17~#、速生20~#、速生19~#共9份种质材料;第3类包括速生4~#、白花1~#、白花2~#、白花3~#、甘农3号共5份种质材料;速生2~#、游客分别单独聚为一类。

EMS诱变花生珍珠红1号创制优良新种质

为创制花生优良新种质,以花生品种珍珠红1号的干种子为材料,采用浸泡法开展甲基磺酸乙酯(EMS)诱变研究。结果表明,以半致死剂量为选择标准,适宜诱变条件为0.8%EMS处理10 h;筛选获得9个优良M5突变系,其中4个表现出产量高、品质优、综合性状优良等特点。上述4个M5突变系干荚果产量较对照(珍珠红1号)增加10.93%~26.78%,出仁率均高于对照;在品质方面,诱珍珠红1号2Ⅱ/19油酸含量为56.68%、油酸/亚油酸比值(O/L)为1.92,分别较对照提高8.44个百分点和0.57;诱珍珠红1号2Ⅲ/8亚油酸含量为39.05%,较对照提高3.28个百分点;诱珍珠红1号2Ⅲ/10粗脂肪含量为54.52%,较对照提高1.50个百分点;诱珍珠红1号3Ⅰ/8油酸含量为53.70%、O/L为1.71,分别较对照提高5.46个百分点和0.36。ISSR分子标记结果表明,9个优良M4突变系与珍珠红1号在分子水平上均存在明显差异,突变系之间在分子水平上也存在明显差异。本研究结果为花生遗传改良和功能基因研究提供了优良的新种质,为花生EMS诱变育种研究提供了参考。