LCMS-IT-TOF鉴定藤黄酸在大鼠胆汁中的代谢产物(英文)

目的:研究藤黄酸在大鼠胆汁中代谢物。方法:应用LCMS-IT-TOF和合成的标准品对代谢物进行研究。结果:藤黄酸在大鼠胆汁中代谢成三个产物,M1,M2和M3。M1的结构推测为3,4-二氢藤黄酸,M2和M3分别确证为10-羟基藤黄酸和9,10-环氧藤黄酸。结论:藤黄酸在大鼠胆汁中主要存在3个代谢产物。代谢物M1是首次被报道的,代谢物M2和M3的结构通过将它们与标准品进行比对而得到确证。

采用HPLC-PDA-IT-TOF鉴定一种果浆保健品中的白藜芦醇并测定其含量

采用HPLC-PDA-IT-TOF测定果浆保健品中白藜芦醇的含量,比较PDA检测与质谱检测定量结果的优劣,并用IT-TOF质谱进一步鉴定果浆饮品中的白藜芦醇,分析其裂解规律。结果表明,质谱定量分析的重复性优于PDA检测的结果,但是最低检出限比PDA检测结果高。采用质谱检测结果定量分析果浆保健品中白藜芦醇的含量高达2.668 mg/g,且在IT-TOF质谱下的所有碰撞碎片及裂解规律均与白藜芦醇标准品相同。

HPLC法测定吡嗪酰胺的含量及有关物质

建立用于吡嗪酰胺含量及其有关物质测定的HPLC法，为吡嗪酰胺原料药制定质量控制标准，并采用LCMS—IT-TOF对检出主要杂质的结构进行推定。色谱柱为TSK—gelODS一100V（250mm×4．6mm，5μm），流动相为甲醇-水（冰醋酸调节pH3．0）（8：92），检测波长为268nm，柱温为35cC，流速为1．0mL/Mmin。对方法进行了系统的验证：主峰能与相邻杂质峰较好地分离；在0．4～250μg／mL范围内，吡嗪酰胺的质量浓度与峰面积呈良好的线性关系（r：1．00）；最低检测限和最低定量限分别为6．5和40．5ng／mL；9批样品含量测定结果与英国药典的非水电位滴定法结果一致。所建方法专属、耐用，操作简便，可用于吡嗪酰胺原料的含量及有关物质测定。已建议中国药典和国际药典收载。

药品微生物限度检查真菌污染鉴定溯源

目的对实验室药品微生物限度检查所得真菌进行鉴定溯源。方法采用形态学鉴定、内转录间隔区(ITS序列)分析技术和基质辅助激光解离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)鉴定法,对从药品中分离纯化的4个菌株和实验环境中采集到的8个菌株进行鉴定和同源性分析,并建立系统发育树。结果ITS测序鉴定结果最大鉴定率均大于99%,结果可靠。其中4株样品检出真菌和1株环境菌的蛋白分子量主要集中在2000~18000 Da范围内,主要质谱峰重叠度高,被鉴定为局限曲霉菌,且亲缘关系非常接近。另4株环境菌和3株环境菌被分别鉴定为聚多曲霉菌和烟曲霉菌。结论样品污染菌来自pH 7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液。可使用形态学鉴定、ITS序列分析技术和MALDI-TOF-MS技术对实验室真菌污染进行鉴定和溯源。

MALDI-TOF-MS技术快速鉴定临床酵母样真菌的应用评价

目的评价基质辅助激光解析/电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)在快速鉴定临床分离的酵母样真菌中的应用价值。方法收集临床分离的酵母样真菌135株,分别用VITEK MS、API20C和CHROMargar显色培养同时进行鉴定与比较,χ2检验分析VITEK MS和API及显色培养基鉴定结果的准确率,以真菌内转录间隔区(ITS)基因测序作为鉴定结果的金标准,同时比较各种方法在临床使用中的优缺点。结果 VITEK MS、API20C和显色培养基鉴定的准确率分别为98.5%(133/135)、78.5%(106/135)、59.3%(80/135),经χ2检验分析,差异有统计学意义(χ2=51.996,P<0.05)。结论 MALDI-TOF-MS可将酵母样真菌快速、准确地鉴定到种。

MALDI-TOF质谱仪进行临床酵母菌鉴定的方法学评价

目的探讨MALDI-TOF质谱仪用于临床酵母菌鉴定的优越性,为临床真菌感染提供早期诊断、治疗的依据。方法收集该院2015年8月至2016年3月临床分离酵母菌206株,分别用MALDI-TOF质谱仪、VITEK2 Compact微生物鉴定仪和显色培养法进行鉴定,以内转录间区序列测序结果为最终确认结果。比较MALDI-TOF质谱仪、VITEK2 Compact微生物鉴定仪和显色培养法鉴定的准确性。结果 3种方法鉴定酵母菌的准确率分别为VITEK2 Compact鉴定仪82.5%,显色培养法67.0%,MALDI-TOF质谱仪92.7%。MALDI-TOF质谱仪与VITEK2 Compact鉴定仪比较,差异有统计学意义(P=0.006),MALDI-TOF质谱仪与显色培养法比较,差异有统计学意义(P=0.001)。结论 MALDI-TOF质谱仪与VITEK2Compact鉴定仪、显色培养法相比,具有快速、操作简便、结果准确等优点。

MALDI-TOF MS鉴定酵母菌应用评价

目的评估MALDI-TOF MS鉴定酵母菌的能力。方法分别用VITEK MS和API ID 32C系统同时鉴定387株临床分离酵母菌。以ITS测序结果作为比较标准。比较MALDI-TOF MS、API ID 32C结果准确率。结果 VITEK MS鉴定酵母菌准确率为97.7%,API ID 32C鉴定准确率为93.0%,差异有统计学意义(χ~2=9.439,P=0.002);MALDITOF与ITS测序相比,差异无统计学意义。结论 MALDITOF可对临床常见酵母菌快速、准确鉴定到种。

基于多种微生物鉴定技术的制药企业环境微生物鉴定结果分析和应用研究

目的运用多种微生物鉴定技术建立制药企业无菌制剂高风险生产区环境微生物鉴定信息库。方法连续4个季度对中间体、制药用水、洁净空间、人员设备表面等收集微生物,采用VITEK生化鉴定、MALDI-TOF MS蛋白鉴定和16S rRNA/ITS基因鉴定技术进行鉴定,结合微生物形态学和来源信息进行分析,建立相应的微生物鉴定信息库。结果共收集获得89株细菌和5株真菌的鉴定结果,开展相关形态学分析:在收集的94株菌中,革兰氏阳性球菌和革兰氏阳性芽孢杆菌共占比60.6%,是洁净区常见污染菌;B级环境收集到46株微生物,葡萄球菌是主要优势菌属,占比45.7%,其次是芽孢杆菌(17.4%)、微球菌(6.5%)和酵母菌(4.3%),B级还分离到1株洋葱伯克霍尔德菌;制药用水收集到29株微生物,主要为革兰氏阴性菌(58.6%)。结论本研究建立了融合生化、蛋白、基因鉴定结果的微生物鉴定信息库并开展相关分析,为制药企业开展风险控制,加强对不可接受微生物的管理,开展微生物数据偏差调查和溯源分析提供依据;企业还可利用鉴定结果建立环境微生物地图,有针对性地控制并消除微生物污染,提高无菌保障水平,确保药品质量安全。