GP1BA、PTGS1、LTC4S、ITGB3基因多态性检测指导阿司匹林使用

目的对陕西宝鸡地区阿司匹林药物相关基因的基因型分布进行回顾性分析,明确与阿司匹林药物相关基因的突变率。方法选取2022年1月至2023年5月在宝鸡市中医医院心内科接受阿司匹林治疗并进行相关基因检测的住院患者475例,采用飞行时间质谱仪对阿司匹林药物相关的4个基因[血小板膜糖蛋白Ⅰbα多肽(GP1BA)基因、前列腺素内过氧化物合酶1(PTGS1)基因、白三烯C4合酶(LTC4S)基因、糖蛋白Ⅲa(ITGB3)基因]进行检测,然后进行基因多态性分析。结果各基因分布频率符合Hardy-Weinberg平衡定律,GP1BA c.482C>T基因型分布频率CC>CT>TT,ITGB3 c.176T>C基因型分布频率TT>TC>CC,PTGS1 c.-842A>G基因型分布频率AA>AG>GG,LTC4S c.-444A>C基因分布频率AA>AC>CC;不同性别、年龄的各基因型分布比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论对阿司匹林药物治疗患者进行阿司匹林药物相关基因检测,可以为临床医生对患者制订个体化治疗方案提供辅助性的指导,具有重要的临床价值。

化瘀消癥颗粒含药血清对HTR-8/SVneo增殖侵袭迁移及FGA、ITGB3表达的影响

目的研究化瘀消癥颗粒含药血清对人绒毛膜滋养层细胞(HTR-8/SVneo)增殖、侵袭、迁移以及纤维蛋白原α链(fibrinogen alpha chain,FGA)、整合素β3(integrinβ3,ITGB3)表达的影响。方法CCK8法检测化瘀消癥颗粒含药血清干预HTR-8/SVneo细胞的增殖情况;Transwell、细胞划痕分别检测化瘀消癥颗粒含药血清(低、中、高浓度组)对HTR-8/SVneo细胞侵袭、迁移的影响;qRT-PCR检测FGA、ITGB3 mRNA表达;Western blot检测FGA、ITGB3蛋白表达。结果化瘀消癥颗粒含药血清高、中、低浓度组对HTR-8/SVneo细胞活性具有明显抑制作用。与对照组相比,各剂量化瘀消癥颗粒含药血清组对HTR-8/SVneo细胞增殖活性均有不同程度的抑制作用(P<0.05);不同剂量HTR-8/SVneo细胞穿过Transwell小室滤过膜数量均低于空白组,其中低剂量组HTR-8/SVneo细胞穿膜率最低(P<0.05)。化瘀消癥颗粒含药血清组FGA、ITGB3蛋白表达下调;低浓度化瘀消癥颗粒含药血清组FGA和ITGB3 mRNA表达下调,中、高浓度化瘀消癥颗粒含药血清组ITGB3 mRNA表达下调。结论化瘀消癥颗粒可能通过调控FGA/ITGB3通路抑制HTR-8/SVneo细胞粘附力,从而达到降低细胞活性的目的。

扶正化瘀解毒汤调控ITGB3-Ras轴对人前列腺癌细胞生物学行为的影响

目的:探讨扶正化瘀解毒汤通过调控ITGB3-Ras轴对前列腺癌(Prostate Cancer,PCa)的肿瘤细胞增殖、侵袭和迁移等肿瘤生物学行为的影响。方法:RM-1细胞建立PCa体内荷瘤模型,该方灌胃观察对移植瘤的生长抑制效应。该方含药血清处理人PCa细胞系LNCaP、DU-145、PC-3细胞以及正常前列腺细胞系WPMY-1,MTT检测细胞增殖,集落形成实验观察细胞集落形成,Transwell小室实验观察细胞侵袭和迁移能力,Western blot和RT-qPCR检测含药血清对ITGB3-Ras轴的调控作用,shRNA和过表达验证含药血清的作用靶点。iTRAQ分析检测该方含药血清对PC-3细胞ITGB3-Ras轴主要蛋白表达调控作用。高效液相色谱法(HPLC)测定该方的有效成分含量。结果:该方体内可明显抑制RM-1细胞小鼠的皮下移植肿瘤体积(P<0.001)和重量(P<0.01)。含药血清抑制了PC-3和DU-145的细胞生长活力和集落形成,并呈剂量依赖性。Transwell小室实验显示,低浓度含药血清可抑制PC-3和DU-145的细胞的侵袭和迁移能力。iTRAQ蛋白组学分析,经过含药血清干预的PC-3细胞,ITGB3-Ras轴表达水平明显与未经处理的PC-3细胞降低。高转移潜能的PC-3细胞与不具有转移潜能的LNCaP细胞相比,ITGB3和Ras蛋白和ITGB3 mRNA表达水平更高,表明ITGB3-Ras对PCa肿瘤进展特别是转移特性获得具有重要作用。shRNA沉默ITGB3后,ITGB3促上皮-间充质转化(EMT)能力降低,PC-3和DU-145细胞转移能力降低,这与含药血清的作用效果相似。该方提取物中有效成分含有姜黄素(0.79 mg/mL)、迷迭香酸(0.16 mg/mL)和人参皂苷R g3(68.4μg/mL)。结论:扶正化瘀解毒汤可抑制具有转移特性的人PCa的PC-3和DU-145细胞肿瘤生物学行为,其可能机制是调控细胞ITGB3-Ras轴表达,抑制EMT转化,从而降低细胞增殖、侵袭、迁移和体内成瘤的能力。

血栓通与阿司匹林对ITGB3基因多态性药物抵抗患者治疗作用的研究

目的探讨中药制剂血栓通及阿司匹林抗血小板治疗脑卒中以及ITGB3基因多态性对治疗效果的相关性。方法收集了192例脑梗死患者,随机分为4组(阿司匹林组、血栓通组、血栓通+阿司匹林组、阿司匹林+氯吡格雷组)进行治疗,通过一般资料及测定生化指标和血栓弹力图,同时提取静脉血全基因组DNA,采用Snapshot方法检测ITGB3基因型,分析4组患者的血小板抑制情况,比较各组结果。结果整体水平上,各组经药物治疗后,血小板抑制率显著提高,血栓通治疗对3种ITGB3基因型AA、AG、GG患者血小板抑制率显著高于阿司匹林组,且组间没有显著性差异。结论中药制剂血栓通可以抑制血小板聚集发挥药效,并且突变型ITGB3基因AA及GG不会对血栓通产生抵抗。

miRNA-30b调控ITGB3表达促进乳腺癌细胞凋亡

目的:探讨微小RNA-30b(microRNA-30b,miRNA-30b)和整合素β3(integrinβ3,ITGB3)在乳腺癌组织中的表达及对乳腺癌细胞生物学行为的影响。方法:选择2016年3月至2019年3月于成都医学院第一附属医院收治的144例包括原位、浸润性和转移性乳腺癌患者的组织标本以及其癌旁组织,同时收集其临床病理资料。采用实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测miRNA-30b和ITGB3的表达。构建miRNA-30b高表达的miRNA-30b模拟物和ITGB3高表达的miRNA-30b模拟物-pc DNA3.1-ITGB3,转染乳腺癌MCF-7细胞,同时将转染后的细胞皮下注射至小鼠体内。5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)实验、流式细胞术、Transwell小室侵袭实验检测细胞增殖、凋亡、侵袭,Western blot检测细胞中的ITGB3表达。结果:RT-PCR结果显示,原位、浸润性和转移性乳腺癌组织中的miRNA-30b相对表达量分别为0.75、0.52和0.23,ITGB3 mRNA分别为2.17、3.76和5.43,与正常组织相比,差异均具有统计学意义(均P<0.001)。miRNA-30b高表达后,BrdU、流式细胞术、Transwell小室侵袭实验、Western blot检测结果显示,癌细胞的增殖、侵袭能力以及ITGB3表达明显降低,凋亡率升高(均P<0.001)。结论:在乳腺癌组织中miRNA-30b和ITGB3表达异常,miRNA-30b过表达能明显下调ITGB3表达,抑制乳腺癌细胞的增殖、侵袭,并促使其凋亡。

丹皮酚调控ITGB3/p38MAPK抑制乳腺癌细胞增殖侵袭与上皮-间质转化

目的探讨丹皮酚(paeonol,Pae)对三阴乳腺癌细胞系MDA-MB-231细胞增殖、侵袭和上皮-间质转化(epithelial mesenchymal transition,EMT)的影响及可能机制。方法不同浓度Pae处理MDA-MB-231细胞后,设立对照样本。采用CCK8方法检测细胞增殖活性;Transwell法检测细胞的侵袭能力;流式细胞技术检测细胞周期;Western blot检测整合素β3(integrinβ3,ITGB3)、p38丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinases,p38MAPK)、磷酸化-p38MAPK(phosphorylated-p38MAPK,p-p38MAPK)蛋白的表达以及EMT相关标志物纤维连接蛋白(fibronectin,FN)、波形蛋白(vimentin,Vim)、N-钙粘蛋白(N-cadherin,N-cad)的表达变化。结果60 mg/L的Pae对于乳腺癌细胞产生了明显的抑制作用,故本实验使用60 mg/L的Pae浓度。Pae分别处理24、48 h后,G0/G1的细胞周期分别从对照组的50.6%增加到53.0%和65.4%。S期处理48 h后,Pae组肿瘤细胞百分比从37.6%降低至26.6%。Transwell结果显示,与对照组相比,Pae处理乳腺癌细胞24、48 h后细胞侵袭数明显减少,差异有统计学意义[个:(378.73±47.62)比(193.64±32.54)或(174.37±27.83),t=5.35、5.75,P值均<0.05]。与对照组相比,Pae处理后乳腺癌细胞ITGB3、p38MAPK、p-p38MAPK表达水平明显降低;EMT标记物FN、N-cad、Vim表达均显著下降,差异有统计学意义[(0.97±0.19)比(0.48±0.10),(1.24±0.24)比(0.56±0.18),(0.93±0.18)比(0.51±0.13),t=4.08、3.93、3.28,P值均<0.05;(0.88±0.16)比(0.46±0.08),(0.96±0.17)比(0.43±0.12),(0.87±0.15)比(0.37±0.13),t=4.06、4.42、4.36,P值均<0.05]。结论Pae显著抑制三阴乳腺癌细胞系MDA-MB-231细胞增殖,侵袭和EMT,该作用可能与ITGB3/p38MAPK信号通路激活有关。

人血小板膜糖蛋白ITGB3基因终止突变C．1476G〉A的体外表达研究

目的对ITGB3基因新的终止突变c．1476G〉A进行体外表达研究，以阐明其功能。方法应用体外定点诱变技术构建突变型ITGB3e．1476G〉AcDNA的真核表达载体，转化感受态细胞，提取质粒后测序验证。采用非脂质体介导重组质粒转染中国仓鼠卵巢癌细胞株（Chinesehamsterovariancancer，CHO）细胞，经G418筛选获取稳定表达细胞株。采用实时荧光定量PCR、Western印迹和流式细胞术分别检测CHO稳定表达株ITGB3基因的mRNA表达和血小板膜糖蛋白llIa（glycoproteinIIIa，GPⅢa）糖蛋白水平。结果成功构建野生型和突变型ITGB3cDNA的真核表达载体，转染筛选后分别获得了稳定表达的CHO细胞株。突变型细胞株中CD61抗原表达量仅为野生型的37％，而ITGB3mRNA转录水平为野生型的6％。Western印迹结果显示，野生型细胞株稳定表达完整的GPⅢa蛋白，而突变型CHO细胞株无完整的GPⅢa蛋白表达。结论ITGB3c．1476G〉A终止突变可导致ITGB3基因的转录水平降低，影响GPⅢa蛋白合成及CD61抗原的表达水平。

化瘀消癥颗粒调控Talin1抑制人绒毛膜滋养层细胞侵袭迁移的研究

目的研究化瘀消癥颗粒含药血清对人绒毛膜滋养层细胞HTR-8/SVneo增殖、侵袭和迁移的影响,并探讨其作用机制。方法制备化瘀消癥颗粒含药血清,CCK8实验检测不同浓度化瘀消癥颗粒含药血清对HTR-8/SVneo细胞增殖的影响并筛选后续实验药物浓度,划痕实验、Transwell实验检测化瘀消癥颗粒含药血清对HTR-8/SVneo细胞侵袭、迁移的影响;qPCR及Western blot检测HTR-8/SVneo细胞中Talin1、MMP-2、N-cadherin、Snail、Rap1GAP、ITGB3的mRNA和蛋白表达。结果化瘀消癥颗粒含药血清可抑制HTR-8/SVneo细胞的增殖、侵袭和迁移;与空白对照组比较,化瘀消癥颗粒含药血清可下调侵袭相关因子Talin1、MMP-2、N-cadherin、Snail、Rap1GAP、ITGB3的mRNA和蛋白表达(P<0.05,P<0.01)。结论化瘀消癥颗粒含药血清可能通过调控Rap1/Talin1/ITGB3通路而下调Talin1表达来发挥杀胚作用。

1例血小板无力症的分子发病机制研究

目的探讨1例血小板无力症患儿的发病原因,阐明其致病机制。方法收集1例血小板无力症患儿外周血,通过基因测序技术明确致病基因位点;采用PCR定点突变方法制备突变质粒,转染中国仓鼠卵巢上皮细胞(CHO-K1),构建体外真核表达系统。用免疫印迹法检测突变型CHO-K1细胞中血小板αⅡb和β3蛋白的合成;流式细胞术检测突变型CHO-K1细胞膜和胞质αⅡb和β3表达水平;免疫荧光显微镜观察突变型CHO-K1中αⅡb和β3的表达及分布。结果该患儿为Ⅱ型血小板无力症。基因测序发现ITGB3基因存在2个突变,且尚未被报道。ITGB3 c.1495 T>C错义突变导致β3蛋白亚基第499号半胱氨酸被精氨酸代替(p.C499R);ITGB3 c.1728 delC移码突变导致β3蛋白亚基第577号丝氨酸开始的氨基酸合成发生改变,并在改变之后的第92个氨基酸终止。免疫印迹法结果为突变型CHO-K1细胞裂解液中均检测到αⅡb和β3一级结构的合成表达。流式细胞术检测结果为突变型CHO-K1细胞表面及胞内β3表达量缺如;荧光显微镜检测结果为突变型CHO-K1细胞未见β3蛋白亚基的分布。结论ITGB3 c.1495 T>C和c.1728delC突变是该患儿的发病原因,这2个突变并未影响血小板膜β3蛋白亚基一级结构合成,但影响其高级结构的表达和形成。

受体相互作用蛋白质激酶3通过上调整合素β3促进骨关节炎相关病变

骨关节炎(osteoarthritis,OA)是最常见的慢性致残性关节疾患,目前尚无针对病因的有效治疗手段。程序性坏死在多种疾病中扮演关键角色,受体相互作用蛋白质激酶3(receptor-interacting protein kinase 3,RIP3)是程序性坏死进程的关键调控因子。有研究显示,RIP3在人与鼠骨关节炎退变软骨组织中表达水平显著上调,提示程序性坏死的发生,但RIP3在软骨中的具体病生理角色仍不明确。本研究拟对过表达RIP3前后的软骨细胞转录物组进行测序分析,探索RIP3在骨关节炎进程中发挥作用的具体机制。RNA测序结果显示,RIP3的过表达诱发软骨细胞中244个基因表达上调,277个表达下调。通过进一步构建基因间共表达作用网络,筛选出16个候选靶基因在mRNA水平进行验证,证实RIP3对磷脂酰肌醇3激酶调节亚单位5(phosphoinositide-3-kinase,regulatory subunit 5,Pik3r5)、整合素β3(integrin subunit beta 3,Itgb3)及成髓细胞瘤转录因子第2亚型(MYB proto-oncogene like 2,Mybl2)的表达上调作用最为显著。CCK-8以及乳酸脱氢酶活性检测结果表明,利用siRNA沉默Itgb3的表达可显著抑制RIP3诱发的软骨细胞活力下降及程序性坏死,同时也抑制了RIP3对软骨细胞中分解代谢相关基因Mmp1、Mmp13与Il6的表达上调作用,以及其对合成代谢相关基因Acan、Col2a1与Sox9的下调作用。本研究证实,RIP3通过上调软骨细胞中Itgb3的表达诱发软骨细胞坏死与软骨基质代谢紊乱,并最终导致软骨退变,为骨关节炎的临床治疗提供了新靶点,同时进一步明确了程序性坏死的病理生理学意义。

新生儿血小板无力症1例并文献复习

目的:探讨新生儿血小板无力症的临床特征和基因变异特点。方法:对南京医科大学附属苏州医院新生儿科收治的1例新生儿血小板无力症患儿的临床资料进行回顾性分析。以“新生儿”、“血小板无力症”、“neonate”、“newborn”、“glanzmann thrombasthenia”为检索词对中国知网、万方数据库、维普、中华医学期刊网、PubMed、Embase数据库收录的文献进行检索,分析总结该病的临床特征和遗传学特点。结果:本例患儿为足月男婴,生后半小时出现头颅包块伴瘀斑瘀点,渐出现帽状腱膜下出血、重度贫血,血小板计数、血小板体积、凝血功能正常,血小板聚集试验提示花生四烯酸和二磷酸腺苷诱导的血小板聚集率下降,基因检测发现患儿ITGA2B基因存在c.886G>A(p.Gly296Arg)、c.2855dup(p.Phe953Valfs*83)两个杂合变异。共检索到42篇文献,结合本例,共44例血小板无力症患儿,其中33例(75.0%)在生后1 d出现皮肤瘀斑、瘀点;13例患儿有详细资料记录,5例重度贫血,均予输注悬浮红细胞和血浆,其中1例输注血小板,发生基因纯合变异、复合杂合变异各4例,10例有随访记录,2例随访期间无出血,其余8例出血程度轻重不一,无死亡病例。结论:对生后早期以瘀斑、瘀点为主要表现的新生儿,应考虑到血小板无力症可能;符合输血指征时,输血为新生儿期治疗的较佳选择。

新生儿期起病的血小板无力症一例

报告1例新生儿期起病及诊断的血小板无力症,患儿主要临床表现为生后出现的皮肤多发出血点、瘀斑,不伴其他部位出血,血小板功能检査提示血小板聚集障碍,流式检査CD41及CD61明显下降,基因检查患儿ITGB3基因IVS2 c.166-2A>C及EX5 c.665T>G复合杂合突变。新生儿期起病的血小板无力症非常罕见,临床应提髙对该病的警惕性。

Cell Rep：研究发现衰老和癌症相关的关键蛋白

伦敦大学玛丽皇后学院（UQML）的一项早期研究发现了衰老细胞中一个蛋白此前未知的一种功能。研究人员希望这项发现在未来可以帮助开发出治疗衰老和早期癌症的新疗法。我们身体的组织和器官由大量细胞组成，这些细胞一起协作帮助机体行使正常的功能。