基于ITGB4/FAK/p38信号通路蒙药蓝盆花总黄酮提取物体内外抗肝纤维化的作用研究

目的探讨蒙药蓝盆花总黄酮提取物(total flavonoid extract of Scabiosa comosa,TFS)对肝纤维化体内外的影响,以及通过对ITGB4/FAK/p38信号通路的调控对肝纤维化的作用。方法体内实验:选取50只Wistar大鼠随机分为空白组,模型组,TFS高(200mg/kg)、中(100mg/kg)、低(50mg/kg)剂量组,除对照组外均给予2ml/kg CCl_(4)灌胃。期间对TFS各剂量组给药,而对照组和模型组不做处理,灌胃10周。检测血清丙氨酸氨基转移酶(glutamic-pyruvic transaminase,ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(glutamic-oxaloacetic transaminase,AST)、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)含量及肝组织羟脯氨酸(hydroxyproline,HYP)含量;苏木精-伊红(hematoxylin eosin,HE)染色、Masson染色观察肝组织病理学改变;肝组织经转录组测序筛选与肝纤维化相关的通路;实时荧光定量聚合酶链反应(real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)与Western blot法分别检测肝组织中α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、collagenⅠ及ITGB4/FAK/p38信号通路相关mRNA及蛋白表达情况。体外实验:MTT法检测TFS对HSC-T6细胞的抑制率;RT-qPCR与Western blot法分别检测HSC-T6细胞中α-SMA、collagenⅠ及ITGB4/FAK/p38信号通路相关mRNA及蛋白表达;流式细胞术检测不同浓度TFS对HSC-T6细胞凋亡的影响。结果与空白组比较,TFS显著增加了模型组中ALT、AST、ALP及HYP的含量(P<0.01);与模型组比较,TFS显著降低了TFS剂量组中ALT、AST、ALP、HYP的含量(P<0.01);肝组织病理变化显示,肝纤维化增生明显改善;GO、KEGG富集分析表明,ITGB4/FAK/p38信号通路在模型组相关性显著。不同剂量的TFS对HSC-T6细胞均有抑制作用;体内外RT-qPCR与Western blot法检测结果显示,TFS各剂量组α-SMA、collagenⅠ、ITGB4/FAK/p38信号通路相关的mRNA及蛋白表达显著下降(P<0.05);凋亡结果亦显示,TFS各剂量组细胞凋亡数明显增加(P<0.01)。结论蒙药蓝盆花总黄酮提取物可显著抑制肝纤维化进展,其调控机制可能与ITGB4/FAK/p38信号通路有关。

荧光共振能量转移技术检测ITGB4BP与P311间的相互作用

目的利用激光共聚焦显微镜中的荧光共振能量转移(FRET)技术来验证整合素4结合蛋白(ITGB4BP)和P311间的相互作用。方法分别构建能在哺乳动物细胞中表达ITGB4BP的绿色荧光融合蛋白ITGB4BP-EGFP和表达P311的红色荧光融合蛋白P311-DsRed的重组载体pITGB4BP-EGFP和pP311-DsRed,经酶切与测序鉴定正确后,共转染人胚肾293(HEK293)细胞48h后,采用受体漂白方法(P311-DsRed),检测ITGB4BP和P311间的能量转移率(E)和相互间的作用距离(R)。结果重组载体pITGB4BP-EGFP和pP311-DsRed经双酶切鉴定正确,转染293细胞后经激光共聚焦显微镜观察能分别表达融合蛋白ITGB4BP-EGFP和P311-DsRed,在细胞质和细胞核中存在着共定位,FRET检测结果显示其能量转移率为14%,两个分子间的作用距离为6.3nm。结论成功构建了ITGB4BP-EGFP和P311-DsRed融合蛋白真核表达重组载体,在哺乳动物细胞中进行了表达后,利用FRET技术证实了活体细胞内ITGB4BP和P311间存在着相互作用。

一个致死性大疱性表皮松解症伴幽门闭锁家系的遗传学分析与产前诊断

大疱性表皮松解症(epidermolysis bullosa,EB)是一种罕见的具有临床和遗传异质性的遗传性皮肤病,以皮肤、黏膜脆性和水疱形成为特征,常由微创诱发,在欧洲EB患儿的出生率为1.9/100000[1]。EB主要分为4种类型:单纯型(EBS)、交界型(JEB)、营养不良型(DEB)和Kindler综合征(KS)。EB的临床表型具有差异性,可从轻度皮肤脆性到严重皮肤受累。目前已报道与EB发病相关的致病基因至少有20种,这些基因编码的蛋白质主要影响细胞的完整性和黏附性[2-4]。作为JEB的亚型,EB伴幽门闭锁(EB with pyloric atresia,EB-PA)是指皮肤脆性伴有先天性胃肠道闭锁的综合征,包括幽门闭锁、十二指肠闭锁和食管闭锁。

整合素β4蛋白在老年甲状腺乳头状癌组织中的表达水平及临床意义

目的探讨整合素β4(ITGB4)蛋白在老年甲状腺乳头状癌组织中的表达水平及临床意义。方法招募2019年8月至2020年8月于海口市中医医院接受全甲状腺切除术治疗的甲状腺乳头状癌老年患者80例,另选取同期接受手术治疗的结节性甲状腺肿患者50例作为对照。术中切除甲状腺乳头状癌组织及癌旁组织、结节性甲状腺肿病灶组织进行免疫组化染色,采用Western blot法检测ITGB4蛋白表达水平。分析ITGB4蛋白表达水平与老年甲状腺乳头状癌患者临床病理特征及预后情况的关联性。结果ITGB4蛋白主要表达于细胞质中。甲状腺乳头状癌组织ITGB4蛋白表达水平显著高于癌旁组织及结节性甲状腺肿组织(P<0.05),癌旁组织及结节性甲状腺肿组织ITGB4蛋白表达水平差异无统计学意义(P>0.05)。与TNM分期为Ⅰ~Ⅱ期患者相比,Ⅲ~Ⅳ期患者ITGB4蛋白表达水平更高。与无淋巴结转移患者相比,发生淋巴结转移患者ITGB4蛋白表达水平更高。与高分化患者相比,中、低分化患者ITGB4蛋白表达水平更高,且低分化患者的表达水平较中分化患者更高,差异均有统计学意义(P<0.05)。甲状腺乳头状癌患者ITGB4低表达组的复发、生存预后情况显著优于高表达组(P<0.05)。结论ITGB4蛋白在老年甲状腺乳头状癌中呈高表达,且与TNM分期、无淋巴结转移、分化程度显著相关,有助于预测患者预后。

P311和整合素β4结合蛋白在非小细胞肺癌中的表达及意义

目的 探讨P311和整合素β4结合蛋白（ITGB4BP）在非小细胞肺癌（NSCLC）中的表达及意义.方法 80例NSCLC石蜡标本制成组织芯片,采用链菌素亲生物素-过氧化物酶法（SP）检测F311和ITGB4BP的表达情况,应用SPSS 13.0软件进行统计分析.结果 P311和ITGB4BP在NSCLC中的阳性表达率分别为77.5%（62/80）和82.5%（66/80）,P311和ITGIMBP表达均阳性者占73.8%（59/80）,一致率为87.5%,具有显著一致性（Kappa=0.611,P〈0.001）.结论 NSCLC中可能存在一条新信号途径P311-ITGB4BP,且可能具有调节肺癌细胞迁移的作用.