荧光共振能量转移技术检测ITGB4BP与P311间的相互作用

目的利用激光共聚焦显微镜中的荧光共振能量转移(FRET)技术来验证整合素4结合蛋白(ITGB4BP)和P311间的相互作用。方法分别构建能在哺乳动物细胞中表达ITGB4BP的绿色荧光融合蛋白ITGB4BP-EGFP和表达P311的红色荧光融合蛋白P311-DsRed的重组载体pITGB4BP-EGFP和pP311-DsRed,经酶切与测序鉴定正确后,共转染人胚肾293(HEK293)细胞48h后,采用受体漂白方法(P311-DsRed),检测ITGB4BP和P311间的能量转移率(E)和相互间的作用距离(R)。结果重组载体pITGB4BP-EGFP和pP311-DsRed经双酶切鉴定正确,转染293细胞后经激光共聚焦显微镜观察能分别表达融合蛋白ITGB4BP-EGFP和P311-DsRed,在细胞质和细胞核中存在着共定位,FRET检测结果显示其能量转移率为14%,两个分子间的作用距离为6.3nm。结论成功构建了ITGB4BP-EGFP和P311-DsRed融合蛋白真核表达重组载体,在哺乳动物细胞中进行了表达后,利用FRET技术证实了活体细胞内ITGB4BP和P311间存在着相互作用。

β4整合素结合蛋白调控成纤维细胞胞外基质生成的实验研究

目的探讨β4整合素结合蛋白(ITGB4BP)对成纤维细胞胞外基质生成的调控作用。方法分别构建、包装能在哺乳动物细胞中促进和抑制ITGB4BP表达的腺病毒表达载体pAdEasy-ITGB4BP-EGFP和慢病毒表达载体Lentivirus-FIV-H1/U6-copGFP-ITGB4BP-RNAi,经筛选鉴定有效后,分别感染人正常皮肤成纤维细胞和增生性瘢痕(HTS)成纤维细胞,利用ELISA检测细胞培养上清内基质金属蛋白酶(MMP-9)、转化生长因子-β1(TGF-β1)和Ⅰ型胶原蛋白(collagenⅠ)的表达情况。结果正常皮肤成纤维细胞内IT-GB4BP高表达后,引起MMP-9、TGF-β1和collagenⅠ表达降低;反之HTS成纤维细胞内ITGB4BP表达抑制后,MMP-9、TGF-β1和collagenⅠ表达增高。结论ITGB7BP对MMP-9、TGF-β1和collagenⅠ表达具有重要调节功能。提示ITGB4BP可能具有抗纤维化的重要功能,为下一步深入探讨HTS的形成机制提供了重要依据。

P311和整合素β4结合蛋白在非小细胞肺癌中的表达及意义

目的 探讨P311和整合素β4结合蛋白（ITGB4BP）在非小细胞肺癌（NSCLC）中的表达及意义.方法 80例NSCLC石蜡标本制成组织芯片,采用链菌素亲生物素-过氧化物酶法（SP）检测F311和ITGB4BP的表达情况,应用SPSS 13.0软件进行统计分析.结果 P311和ITGB4BP在NSCLC中的阳性表达率分别为77.5%（62/80）和82.5%（66/80）,P311和ITGIMBP表达均阳性者占73.8%（59/80）,一致率为87.5%,具有显著一致性（Kappa=0.611,P〈0.001）.结论 NSCLC中可能存在一条新信号途径P311-ITGB4BP,且可能具有调节肺癌细胞迁移的作用.