外泌体源性LncRNA ESCCAL-1/miR-874/ITGBL1对结直肠癌细胞增殖凋亡的影响

目的本研究旨在探究外泌体源性长非编码RNA(LncRNA)ESCCAL-1调控miR-874/整合素β样因子1(ITGBL1)轴在结直肠癌(CRC)进展中的作用机制。方法运用基因表达综合数据库(GEO)数据库对CRC中的差异表达基因进行分析。应用qRT-PCR检测LncRNA ESCCAL-1、miR-874和ITGBL1在CRC组织和细胞系(SW480、SW620、HCT116和HT29)及癌旁正常组织和NCM460细胞系中的表达;3(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)、克隆形成和流式细胞术分别检测细胞增殖、集落形成和凋亡情况;双荧光素酶报告实验分别验证miR-874与ESCCAL-1、ITGBL1间的互作用关系;荧光原位杂交测定LncRNAESCCAL-1的亚细胞定位。使用Exosome提取试剂盒分离血清中的外泌体。结果ESCCAL-1和ITGBL1在CRC组织和细胞系中的表达高于癌旁正常组织和NCM460细胞系,miR-874则相反(P<0.05)。敲减ESCCAL-1能够抑制CRC细胞增殖和集落形成,促进细胞凋亡。miR-874和ESCCAL-1存在特异性结合位点,miR-874抑制剂能够部分逆转敲减ESCCAL-1在CRC中介导的效应(P<0.05)。ESCCAL-1吸附miR-874上调ITGBL1。CRC患者血清中的ESCCAL-1及exo-ESCCAL-1较对照组上调,血清exo-ESCCAL-1可能是CRC治疗的一个有价值的诊断指标(P<0.05)。结论ESCCAL-1通过调控miR-874/ITGBL1轴促进CRC进展,ESCCAL-1可能是CRC治疗的一个有效分子靶点。

健脾解毒方对结直肠癌细胞RUNX2及其下游ITGBL1表达的影响

目的:探讨健脾解毒方对β-catenin通路下游Runt相关转录因子2(RUNX2)和整合素β样因子1(ITGBL1)表达的影响,进一步揭示其抑制结直肠癌侵袭转移的作用机制。方法:(1)将LoVo细胞分为健脾解毒方不同浓度(0、50、100、200μg/ml)组,各组分别予以相应浓度的醇提物溶液。干预48 h后,PCR检测RUNX2、ITGBL1的mRNA表达,Western blot检测RUNX2、ITGBL1的蛋白表达。(2)构建慢病毒载体介导的RUNX2基因沉默LoVo细胞。将转染细胞分为对照组(shRNA/NC)、健脾解毒方(中药)组(shRNA/NC+200μg/ml健脾解毒方醇提物)、RUNX2基因沉默组(shRNA/RUNX2)、RUNX2基因沉默+中药组(shRNA/RUNX2+200μg/ml健脾解毒方醇提物),各组分别予以相应药物干预。细胞培养48 h后,Transwell实验观察细胞迁移情况,PCR检测ITGBL1的mRNA表达,Western blot检测ITGBL1的蛋白表达。结果:(1)健脾解毒方能够明显抑制β-catenin信号通路下游分子RUNX2、ITGBL1的mRNA和蛋白表达,且呈一定的剂量依赖性。(2)RUNX2基因沉默可抑制LoVo细胞迁移,与对照组相比,迁移细胞数和ITGBL1表达显著降低(P<0.01)。但RUNX2基因沉默+健脾解毒方组与RUNX2基因沉默组比较,迁移细胞数和ITGBL1表达无明显差异(P>0.05)。结论:RUNX2是健脾解毒方抑制结直肠癌细胞转移的关键靶点,健脾解毒方通过抑制RUNX2,下调ITGBL1表达,进而发挥抗结直肠癌侵袭转移的作用。

整合素β样1 mRNA在乳腺原发癌中的表达及其临床意义

目的探讨乳腺原发癌组织中整合素β样1(integrin bate-like 1,ITGBL1)mRNA水平与临床病理因素的关系,评估其对预测患者预后的临床价值。方法采用实时定量RT-PCR方法检测180例行乳腺癌根治术并随访3年以上的乳腺浸润性导管癌组织中ITGBL1mRNA的水平。采用受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线确定ITGBL1 mRNA水平分组的阈值;用χ2检验比较组间差异;用Kaplan-Meier法绘制生存曲线;用Log-rank时序检验比较组间生存期的差异。结果ER阴性乳腺癌患者的ITGBL1 mRNA高表达率低于ER阳性患者(χ2=7.475,P=0.006),组织学Ⅲ级的乳腺癌患者ITGBL1 mRNA高表达率低于Ⅰ～Ⅱ级乳腺癌患者(χ2=4.410,P=0.036),而在不同年龄和绝经状态、肿瘤大小、淋巴结转移状态、临床分期以及PR和HER-2状态各组间比较差异无统计学意义(P>0.050)。ITGBL1 mRNA低表达组患者3年无转移生存率低于高表达组,差异有统计学意义(χ2=4.569,P=0.033);3年无病生存率、5年无病生存率和5年无转移生存率组间比较虽差异无统计学意义(P>0.050),但随ITGBL1 mRNA表达降低而有下降趋势。结论乳腺原发癌中ITGBL1 mRNA高表达是ER阳性乳腺癌的生物学特征之一;ITGBL1 mRNA低表达的乳腺癌恶性程度高、组织分化差且患者预后不良,提示ITGBL1基因是潜在的乳腺癌预后预测分子标志物。