鸡的FETUB基因真核表达载体的构建及其在LMH细胞中的表达

胎球蛋白B(FETUB)是一种新型的脂肪因子/肝因子,是由肝脏产生并释放入血液的半胱氨酸蛋白酶抑制剂,其在糖脂代谢中起重要作用.本研究目的是构建鸡的FETUB基因真核表达载体,在LMH细胞过表达FETUB后研究其对其他脂类相关基因表达的影响.采用荧光定量PCR检测FETUB基因在鸡各种不同组织中的表达量,以肝脏组织总RNA为模板,RT-PCR扩增鸡FETUB基因编码区,并构建真核表达重组载体,转染LMH细胞后分别提取总蛋白和总RNA,Western Blot检测重组蛋白表达,荧光定量PCR检测脂类代谢相关基因的表达.结果显示,FETUB基因在鸡11种不同组织中有表达,其中在肝脏中表达量极高,小肠和肾脏中表达较高,而在肌胃、脾脏、脂肪中表达量较低.通过RT-PCR获得鸡FETUB基因CDS,构建真核表达载体pCMV-3Tag-9-ggaFETUB,在LMH中成功融合表达FETUB-MYC.FETUB基因过表达使LMH细胞LPL和ITIH2基因表达均显著下调,而对APOA4、DGAT2、FASN、ACACA四个基因的表达没有显著影响.研究结果表明FETUB基因通过抑制LPL和ITIH2基因表达来影响脂类代谢,为进一步分析鸡的FETUB基因的功能奠定基础.