根肿病菌核糖体基因ITS区段的克隆测序及其在检测中的应用

应用真菌核糖体基因ITS区段通用引物ITS1和ITS4,对十字花科蔬菜根肿病菌(Plasmodiophorabrassicae)rDNA进行PCR扩增,并将扩增到的目的片段克隆到pGEM-T载体上。对重组克隆进行测序和碱基编码结构特点分析,结果表明:十字花科蔬菜根肿病菌ITS1区长141bp,5 8S区长160bp,ITS2区长187bp,rDNA总长为488bp.根据此序列设计一对根肿病菌特异性寡聚核苷酸引物(前引物:5'AGGTGAACCTGCGGAAGGAT3'和后引物:5'TTCAGCGGGTAATCCTACCT3'),应用聚合酶链式反应(polymerasechainreaction,PCR)技术,对分离自十字花科蔬菜(白菜、青菜、甘蓝、芥蓝、花椰菜等)根肿病菌全基因组DNA进行特异性扩增试验。试验结果表明,该对引物能从十字花科根肿病菌全基因组DNA中扩增到约500bp长度的分子片段,而对照菌株和健康对照则无扩增产物。该实验结果对有效追踪根肿病菌在田间的发生动态监测和预测预报提供了重要的信息和手段。

马铃薯及番茄晚疫病菌的核糖体DNA-ITS区段序列分析

取3个不侵染马铃薯的番茄晚疫病菌菌株和3个不侵染番茄的马铃薯晚疫病菌菌株,以及2个可交叉侵染马铃薯和番茄的菌株,提取DNA全基因组后,用引物ITS1和ITS4进行扩增,得到约850bp左右的扩增产物并进行测序,比较同源性,结果显示这些菌株的全基因组DNA序列与Genebank上登录的3个序列AF228084,AF228083,AY269995 1的同源性均为100%。3个番茄菌株之间的同源性大小为98 22%,3个马铃薯菌株之间的为99 52%,较番茄菌株的同源性高。不可交叉的两类菌株间的同源性为98 28%,可交叉侵染的番茄菌株和马铃薯菌株之间的同源性为99 17%,比不可交叉侵染的菌株间的同源性高,说明相似的序列使得生物学特性也很相似,反之,同源性有差异的,在生物特性上也表现出一定差异。

大丽轮枝菌核糖体基因ITS区段特异扩增

大丽轮枝菌核糖体基因ＩＴＳ区段特异扩增朱有勇１王云月１ＢｒｕｃｅＲ．Ｌｙｏｎ２（１．云南农业大学云南省植物病理重点实验室，昆明６５０２０１）（２．澳大利亚悉尼大学生命科学学院分子遗传学实验室，悉尼２００６）ＰＣＲＡｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｔｈｅＩ...