rDNA-ITS 序列测定等三种方法鉴定假丝酵母菌结果比较

目的通过三种假丝酵母菌鉴定方法的比较,为临床选择假丝酵母菌的鉴定方法提供参考。方法用科玛嘉显色培养基、API 20C AUX生化系统和rRNA-ITS序列测定分析鉴定住院患者口腔培养出的198株假丝酵母菌,比较3种鉴定方法的结果。结果 API 20C AUX生化系统与rDNA-ITS序列测定分析鉴定结果一致,科玛嘉显色培养基与API 20C AUX生化系统和rDNA-ITS序列测定分析鉴定的符合率白假丝酵母菌为97.84%,热带假丝酵母菌的符合率为93.33%,光滑假丝酵母菌和克柔假丝酵母菌的符合率分别为90.91%、88.89%,其他假丝酵母菌科玛嘉不能鉴定。结论 API 20C AUX生化系统与rDNA-ITS序列测定分析鉴定假丝酵母菌的结果有较好的一致性,rDNA-ITS序列测定分析鉴定假丝酵母菌有望成为假丝酵母菌鉴定较好的方法。科玛嘉显色培养基方法可以简便有效的鉴定最常见的4种假丝酵母菌。

不同栽培条件辣椒疫霉菌ITS序列同源性分析

由疫霉菌引起的辣椒疫病是辣椒生产上的主要病害。明确设施栽培辣椒土传病害和露地栽培条件下辣椒疫病疫霉病菌基因序列和同源性,为制定病害防治措施提供依据。通过病菌形态观察、ITS基因序列测定与同源性分析开展研究。由疫霉菌侵染的辣椒病害在设施和露地不同栽培形式下发生部位略有不同,但在病菌形态上表现一致,ITS基因序列同源性极高,达到了99%以上。设施土传病害和露地栽培条件下辣椒疫病菌属于同一种,均为辣椒疫霉菌(Phytophthora capsici Leonian)。

葡萄炭疽病菌鉴定及同源性分析

为揭示葡萄炭疽病菌种类和遗传特征,给深入研究该病提供科学理论依据。本研究对不同地区的26株葡萄炭疽病菌通过形态学和r DNA-ITS序列分析进行鉴定及同源性研究。利用真菌通用引物ITS4、ITS5对病菌基因组进行PCR扩增,将测序结果与NCBI数据库上已知序列进行比对,同时利用Clustalx 1.83和MEGA 5.0软件进行聚类分析。结果表明:病菌菌落为白色或灰白色,菌丝呈绒状或絮状,分生孢子为圆柱形或圆筒状,单孢,无色;测得病菌ITS序列为500 bp左右,鉴定病原均为胶孢炭疽菌(Colletotrichum gloeosporioides)。不同地区葡萄炭疽菌的r DNA-ITS序列同源性高,亲缘关系比较近,但是各菌株间存在着遗传差异,并且菌株之间差异与地理来源和品种无明显的相关性。

红山茶高质量基因组DNA的提取

红山茶植物细胞含有大量的多糖、脂质、色素和酚类物质,严重影响基因组DNA的提取.本研究在多次实验的基础上对CTAB法进行了改良,结果表明:采用细胞核被解裂之前加入不溶性聚乙烯吡咯烷酮(PVP),用冰冻异丙醇沉淀基因组DNA等关键技术,可以从山茶属红山茶组56个物种的植物叶片中快速提取高质量的DNA,满足ITS序列测定的需要;用嫩叶提取可获得纯度较高的DNA;样品在-20℃低温下保存对DNA的提取质量无明显影响.

中国部分棉区棉花轮纹斑病病原菌“种”的初步鉴定

从中国棉花主产区部分地区采集棉轮纹斑病叶,分离获得17个致病链格孢(Alternaria spp.)菌株。根据链格孢菌菌体和孢子形态学观察结果,结合ITS序列测定和分析结果,明确A1等16个菌株为链格孢菌(Alternaria alternata),A3菌株为大孢链格孢菌(Alternaria macrospore)。

瓦尼木层孔菌WN-3分类地位的分子生物学验证及生理学特性研究

[目的]研究瓦尼木层孔菌WN-3分类地位的分子生物学验证及生理学特性。[方法]采用分子生物学方法对瓦尼木层孔菌WN-3菌株进行分类地位验证,通过生长速率法研究该菌株的生理学特性。[结果]菌株WN-3的ITS序列长度为756 bp,在Genbank核酸序列数据库中比对,试验菌株与瓦尼木层孔菌的相似率为98%,确定菌株WN-3为瓦尼木层孔菌,GenBank登陆号为HQ845057。瓦尼木层孔菌WN-3生长的最佳碳源为葡萄糖和甘露糖,最佳氮源为麦麸和玉米;菌株在pH6.5条件下生长最好,适宜生长温度为28℃。[结论]该方法研究了瓦尼木层孔菌WN-3分类地位的分子生物学验证及生理学特性,为进一步研究其人工栽培和规模化生产提供了理论基础。

辽宁地区辣椒疫病菌鉴定及同源性分析

对采集到的辣椒疫病病原菌通过形态学观察和rDNA-ITS序列分析进行鉴定及同源性研究。利用真菌通用引物ITS4、ITS5对病菌基因组进行PCR扩增,将测序结果与已知序列进行比对,并利用Clustalx1.83及MEGA4.0软件进行聚类分析。试验结果表明:病菌菌落为白色,菌丝呈鹅毛绒状,无隔膜,孢子囊卵圆形或梨形,乳突单生;测得病菌ITS序列为805～877bp,rDNA-ITS序列同源性高,致病菌病原均为辣椒疫霉菌(Phytophthora capsici Leonian)。