ITSN1基因与卵巢癌化疗敏感性和预后的关系

目的:探究交叉蛋白1(ITSN1)基因在卵巢癌化疗敏感性中的作用和临床意义。方法:利用GEO、Kaplan-Meier数据库分析ITSN1在卵巢癌化疗敏感组和耐药组中的表达差异以及与化疗患者预后的关系。在此基础上,进一步分析ITSN1表达水平与信号通路的关系,构建ITSN1蛋白相互作用网络。结果:在GSE51373(t=3.691,P=0.001)和GSE148003(t=16.67,P=0.0000)数据集中化疗敏感组的ITSN1表达水平显著高于耐药组。生存分析结果显示,ITSN1高表达的卵巢癌铂类化疗患者的总生存期(OS,HR=0.85,95%CI:0.72~0.99,P=0.04)和无进展生存期(PFS,HR=0.85,95%CI:0.74~0.99,P=0.031)显著提高。在多西他赛化疗的卵巢癌患者中,ITSN1高表达患者的生存率明显改善。在不同组织学类型和组织病理学级别的铂类基础化疗卵巢癌患者中,ITSN1 mRNA高表达患者的预后更好。进一步分析ITSN1表达水平与信号通路的关系发现,ITSN1可能参与DNA修复通路,并且与DNA修复呈负相关(均P<0.05)。ITSN1的相互作用蛋白包括RAD18等。结论:ITSN1在卵巢癌铂类化疗敏感组中显著高表达且与铂类基础化疗患者预后呈显著正相关,并可能通过与RAD18相互作用参与调控DNA修复通路,进而提高铂类化疗敏感性。

ITSN1-S的SH3功能域对恶性胶质瘤细胞U87增殖能力的影响

目的:观察ITSN1-S的SH3功能域对恶性胶质瘤细胞U87增殖能力的影响,并探讨其相关分子机制。方法:构建标记mGFP荧光的慢病毒表达质粒PCDH-CMV-MCS-EF1-Puro。将ITSN1-S的不同片段的PCR产物:EH1-EH2、EH1-EH2-CC、ITSN1-S,分别连接到慢病毒表达质粒载体中。用HEK-293T细胞分别包装上述四种质粒的慢病毒后感染U87细胞,嘌呤霉素(puro)筛选出稳定表达的细胞,分别命名为vector/U87、EH1-EH2/U87、EH1-EH2-CC/U87、ITSN1-S/U87。Western blot检测目的蛋白的表达,增殖实验和软琼脂克隆形成实验检测各组胶质瘤细胞的增殖能力。结果:增殖实验和软琼脂克隆形成实验显示与vector/U87、EH1-EH2/U87、EH1-EH2-CC/U87细胞相比较,ITSN1-S/U87细胞的增殖能力显著增强(P<0.05),但vector/U87、EH1-EH2/U87、EH1-EH2-CC/U87三组细胞之间的增殖能力差异无统计学意义(P>0.05)。增殖实验结果显示第6天时,ITSN1-S/U87、EH1-EH2-CC/U87、EH1-EH2/U87、vector/U87细胞数分别为(29.16±1.19)×104、(22.82±0.94)×104、(22.17±0.90)×104、(21.93±1.15)×104个;软琼脂克隆形成实验表明第21d时,ITSN1-S/U87克隆形成数高达(6.37±0.41)×103个,而EH1-EH2-CC/U87、EH1-EH2/U87和vector/U87克隆形成数分别为(2.65±0.34)×103、(2.23±0.31)×103和(2.1±0.29)×103个。结论:过表达ITSN1-S能显著提高胶质瘤细胞U87的增殖能力,这种促进细胞增殖的作用可能是通过SH3功能域来实现的。

ITSN1-S对胶质瘤细胞凋亡的作用研究

目的:研究ITSN1-S蛋白在调节恶性胶质瘤细胞增殖与凋亡方面的作用,并进一步探讨其相关的分子机制。方法:利用小RNA干扰技术抑制体外培养的人胶质母细胞瘤细胞LN-229中ITSN1-S蛋白的表达,并应用MTT、流式细胞术、TUNEL染色等方法检测胶质母细胞瘤细胞的增殖与凋亡情况,进而应用Western blotting法检测与细胞凋亡密切相关的蛋白(Bad、Bcl-2)的表达情况。结果:与对照组相比,转染组细胞的增殖受到明显抑制(P<0.05),凋亡显著增加(P<0.05),并且促凋亡蛋白Bad的表达增加,抗凋亡蛋白Bcl-2的表达下降。结论:ITSN1-S参与调节胶质母细胞瘤细胞的增殖与凋亡,该作用可能与其调节凋亡相关蛋白的表达有关。

miR-10a-5p靶向ITSN1对宫颈癌细胞增殖和顺铂化疗敏感性的影响

目的探讨miR-10a-5p对宫颈癌细胞增殖及对化疗药物顺铂敏感性的影响及机制。方法实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测23对宫颈癌及配对癌旁组织miR-10a-5p的相对表达水平。利用空载体病毒(阴性对照组)或miR-10a-5p过表达慢病毒(miR-10a-5p过表达组)感染人宫颈癌细胞株Caski,同时设置不作处理的空白对照组。使用CCK-8法检测各组细胞增殖及对顺铂敏感性的影响,检测指标为吸光度和细胞生长抑制率。qRT-PCR和Western blot检测三组细胞中ITSN1的mRNA和蛋白水平。使用荧光素酶报告基因验证miR-10a-5p的潜在靶点。结果与宫颈癌癌旁组织相比,宫颈癌组织中miR-10a-5p表达显著降低(P<0.05)。与空白对照组及阴性对照组相比,miR-10a-5p过表达组细胞吸光度显著减小,细胞增殖能力显著降低(P<0.05),对顺铂的化疗敏感性显著增强(P<0.05),空白对照组和阴性对照组间细胞增殖能力和对顺铂的化疗敏感性差异无统计学意义(P>0.05)。miR-10a-5p可与ITSN1靶向结合,降低ITSN1表达水平。结论miR-10a-5p可能通过靶向ITSN1抑制Caski细胞增殖,并增强Caski细胞对顺铂的药物敏感性。

ITSN1 mRNA预测乳腺癌预后的价值

目的:通过数据库对ITSN1 mRNA的表达水平分析,以期能够预测乳腺癌患者的预后。方法:利用Kaplan-Meier Plotter数据库分析ITSN1 mRNA表达水平与乳腺癌患者预后的关系,GEPIA数据库分析基因ITSN1和HER2在乳腺癌中的表达。结果:ITSN1 mRNA高表达的乳腺癌总人群有更好的预后。ITSN1 mRNA的高表达预示luminal A、luminal B、HER2阴性、淋巴结阳性乳腺癌患者更长的无复发生存,以及淋巴结阴性乳腺癌患者更好的总生存。ITSN1 mRNA低表达的Her-2扩增型/阳性乳腺癌患者有更好的预后。ITSN1基因在乳腺癌中的表达低于正常乳腺组织,HER2基因在乳腺癌中的表达高于正常乳腺组织。结论:ITSN1 mRNA高表达的乳腺癌患者预后更好,ITSN1在乳腺癌中可能发挥抑癌的功能。

ITSN1蛋白磷酸化的研究进展

Intersectin(ITSN),又称EHSH1、Dap60和Ese-1,该基因位于人体第21号染色体上,编码一种高度保守的多结构域细胞衔接蛋白,主要调节胞吞和胞吐、肌动蛋白细胞骨架重排等生物学过程。磷酸化是蛋白质翻译后修饰的主要类型,受到蛋白激酶和磷酸酶的共同调节而保持一种动态平衡,在正常生命活动乃至肿瘤发生中发挥作用。本文总结了ITSN1磷酸化后参与的生物学过程及在一些疾病中的作用,希望能进一步了解磷酸化是如何调节ITSN1蛋白的功能。