基于PINK1-Parkin线粒体自噬通路探讨海昆肾喜含药血清对N2a/APP695细胞的神经保护作用

目的研究海昆肾喜(haikun shenxi,HKSX)含药血清对N2a/APP695细胞的神经保护作用及机制。方法制备HKSX含药血清,高效薄层色谱(high performance thin layer chromatography,HPTLC)对其成分进行分析。应用含药血清干预N2a/APP695细胞,MTT检测HKSX含药血清的细胞毒性;ELISA检测Aβ_(1-42)含量;JC-1法检测线粒体膜电位、DCFH-DA法检测活性氧(reactive oxygen species,ROS)、ATP检测试剂盒检测三磷酸腺苷(adenosine triphosphate,ATP)评价线粒体功能;免疫印迹法(Western blot)检测PTEN诱导的激酶1(PTEN induced putative kinase 1,PINK1)、Parkin、p62、微管相关蛋白1轻链3(microtubule-associated-proteinlight chain-3,LC3)及p-Tau S396蛋白的表达;设置线粒体自噬抑制剂Mdivi-1干预组,Western blot检测PINK1、Parkin、p-Tau S396蛋白表达,ELISA检测Aβ_(1-42)含量,验证HKSX的神经保护作用是否与线粒体自噬密切相关。结果与模型对照组(MC)相比,HKSX低、中、高剂量组Aβ_(1-42)含量明显降低,高剂量组尤为明显(P<0.01);线粒体膜电位及ROS含量明显降低(P<0.01)、ATP含量升高(P<0.01);PINK1、Parkin(P<0.01)及LC3Ⅱ(P<0.01)的表达增加,而p62的表达降低(P<0.01),p-Tau S396蛋白亦降低(P<0.01);而Mdivi-1的干预,在很大程度上抑制了HKSX对PINK1、Parkin蛋白的活化(P<0.01)及对p-Tau S396和Aβ_(1-42)的清除(P<0.01),表明HKSX的神经保护作用依赖于PINK1-Parkin信号通路。结论HKSX能够提高线粒体自噬相关蛋白PINK1、Parkin蛋白的表达,激活线粒体自噬,提高线粒体功能,抑制Aβ及p-Tau S396蛋白在神经细胞中的沉积,发挥神经保护作用,从而起到防治AD的效果。

紫糯杂交稻两优黑珍糯695在南安市种植表现及高产栽培技术

两优黑珍糯695是福建省农业科学院水稻研究所、安徽瑞稻种业科技有限公司利用自育的糯稻父本黑珍糯695与不育系墨S配组育成的晚籼迟熟杂交糯稻新品种,于2023年通过安徽省农作物品种审定委员会审定。2022—2023年在南安市农业科学研究所作晚稻示范种植0.33 hm^(2),2 a平均产量7938.0 kg/hm^(2)。介绍了两优黑珍糯695在南安市作晚稻示范表现和高产栽培技术。

50 Hz磁场暴露对Neuro2a/APP(695)细胞基因转录的影响

目的研究50 Hz磁场暴露对Neuro2a/APP(695)细胞基因转录的影响。方法Neuro2a/APP(695)细胞简单随机分为假性辐照组和磁场暴露组(n=3)。暴露条件为1.0 mT 50 Hz正旋波磁场,4 h/d,连续3 d;假性辐照组细胞除无磁场暴露外,余同磁场暴露组。暴露结束后按标准方法送样,进行转录组测序检测,包括样品RNA提取、数据质量评价和数据分析等。结果50 Hz磁场暴露后Neuro2a/APP(695)细胞有141种定性的基因表达发生了明显的变化,其中有129种表达上调、12种表达下调。GO富集分析结果显示,Neuro2a/APP(695)细胞中62种上调差异表达基因涉及432类显著GO功能富集,其中涉及生物学过程337类、细胞组分16类、分子功能79类;3种下调差异表达基因共涉及275类显著GO功能富集,其中涉及生物学过程260类、细胞组分5类、分子功能10类。KEGG通路分析显示,这些差异基因可能参与了20条KEGG通路,其中2个下调差异表达基因通路,18个上调差异表达基因通路。结论50 Hz磁场暴露可能对Neuro2a/APP(695)细胞的黏附连接、Hippo信号通路、糖胺聚糖生物合成-硫酸软骨素/硫酸皮肤素、蛋白消化和吸收和甘露糖型O-聚糖生物合成等方面产生影响,以上通路可能是50 Hz磁场对Neuro2a/APP(695)细胞产生影响的主要途径。

基于DSP的ITU-TG·729语音编解码实现

详细分析了ITU TG·729CS ACELP语音编解码算法的原理,针对算法特征及DSP体系结构特点,提出了一些有效的优化措施,在TITMS320VC5410DSP平台上实现了该算法的实时编解码.该系统的实现可应用于数字语音存储和网络多媒体通信系统等领域.

基于静音检测的ITU-TG.729算法

提出了一种能够提高ITU TG .72 9算法性能的静音检测技术 .该技术的引入不仅可以降低G .72 9的语音通讯平均传输比特率 ,而且可以大量节省G .72 9压缩和解压过程的实际运算量 .通过在不同噪声背景下的性能分析 ,该静音检测技术的引入不会对G .72

三羟基异黄酮对转染APP695基因PC12细胞凋亡和功能的影响

目的以APP695MT基因转染PC12细胞为细胞模型,研究三羟基异黄酮(GST)对模型细胞凋亡和功能的影响。方法用pIRES2-EGFP空载体和pIRES2-EGFP/APP695MT表达载体转染正常的PC12细胞,将细胞分为对照组、APP695转染组、GST干预组。应用激光共聚焦显微技术检测PC12细胞凋亡率,荧光分析法测定儿茶酚胺类(CA)分泌量。结果 APP695转染组与对照组比较,PC12细胞凋亡率明显升高(P<0.01),CA分泌量明显降低(P<0.01);GST干预组与APP695转染组比较细胞凋亡率降低(P<0.01),CA分泌量均明显增加(P<0.01)。结论 GST可降低APP695MT基因转染引起的PC12细胞凋亡率,同时也可提高CA的分泌量,对转染细胞有一定的保护作用,并能改善其生理功能。

基于TSC695F的高可靠航天相机控制器设计

针对传统相机控制器已无法满足航天相机更多的任务需求和更高的可靠性要求,本文根据某实际型号项目应用背景提出了一种以TSC695F为核心处理器,FPGA辅助其进行功能及外围接口扩展的新型高可靠航天相机控制器设计方案,并详细阐述了系统的组成和软硬件设计。结合航天光学相机模拟在轨飞行测试平台进行的大量测试,结果表明,本相机控制器在硬件设计简化和程序映像组织优化的同时工作稳定、可靠,为新一代航天相机控制器设计提供了新的思路。

基于TSC695F和FPGA的CAN总线接口设计

新一代空间相机控制器采用具有高可靠性的32位处理器TSC695F和Flash型FPGA APA600作为核心控制单元,采用CAN总线与小卫星平台上各单元通信;由于TSC695F采用独立的32位数据线和地址线,而CAN总线控制器SJA1000采用8位分时复用的数据线和地址线;且TSC695F和SJA1000的地址线和数据线采用5V电平,APA600的输入输出接口采用3.3V电平,需要根据读写过程中数据流向对电平转换芯片的方向进行控制;提出了一种基于APA600的TSC695F与SJA1000的接口逻辑电路设计方法,给出了VHDL源码和在TSC695F中使用该CAN总线接口的具体方法;在实验中使用逻辑分析仪对实际工作过程中时序参数进行测量,实验结果表明采用本文的设计满足CAN总线接口时序要求,可以实现空间相机控制器与星上其他单元可靠的通讯。

基于TSC695-FPGA架构的空间扫描运动控制系统设计

提出一种新型空间扫描运动控制系统TSC695—FPGA架构设计方案。方案以空间级32位浮点处理器TSC695为算法处理器,以XCV600 FPGA作为脉宽调制波形发生器和采样/通讯数据管理器,结合了TSC695的浮点运算单元和检错/纠错模块,以及FPGA的并行处理能力。实验证明,与传统的工业控制芯片相比,该架构能够显著提高空间扫描控制系统的可靠性和控制精度。

GST对转染APP695基因PC12细胞形态和增殖能力的影响

目的:观察APP695MT基因转染对PC12细胞形态和增殖能力的影响及植物雌激素三羟基异黄酮(Genistein,GST)的干预作用,初步探讨GST对表达APP695MT基因PC12细胞的保护作用。方法:以pIRES2-EGFP空载体和pIRES2-EGFP/APP695MT表达载体转染正常PC12细胞,电镜观察各组细胞形态学改变,细胞计数方法检测各组细胞增殖能力差异。结果:电镜下观察可见正常对照组与空载组细胞形态无差异,细胞形态结构正常,无明显病理改变;APP695转染组细胞胞体肿胀,线粒体髓样变和空泡样变,胞核扭曲凹陷,异染色质边集;GST干预组较APP695转染组细胞形态明显改善,线粒体髓样变和空泡样变明显减少,胞核凹陷明显减轻。细胞计数结果显示,在各细胞计数时间点,与正常对照组比较,空载组细胞数目无显著变化(P>0.05),APP695转染组PC12细胞数目减少(P(0.01),细胞生长增殖能力明显受到抑制;GST各剂量处理组与APP695转染组比较细胞生长增殖能力均有不同程度的增强(P(0.01)。结论:GST能改善突变型APP695基因转染引起的PC12细胞病理变化,并提高其增殖能力,对转染细胞有一定的保护作用。

基于FPGA和TSC695F的空间相机控制器设计

随着空间相机的应用领域从对地观测拓展到行星际探测,对系统的抗辐射能力、重量、功耗和可靠性有了更高的要求。采用耐辐射FPGA RT54SX72S和TSC695F进行了空间相机控制器的设计,用RT54SX72S实现行周期信号产生、OC指令锁存、地址译码及A/D控制锁存等相机控制功能,在提高系统可靠性的同时减小体积、减轻重量、降低功耗。给出了FPGA中各功能模块的具体实现方法和部分VHDL源码。实验结果表明,各功能模块的实现方法正确可行,相机控制器工作可靠,满足总体技术指标要求。

慢病毒载体介导的APP695过表达SH-SY5Y细胞系的构建和鉴定

目的通过构建pLVX-APP695-PGK-Puro慢病毒载体,用以建立可以稳定过表达APP695蛋白的SH-SY5YAPP695细胞株。方法利用PCR方法扩增目的基因片段APP695,并构建pLVX-APP695-PGK-Puro慢病毒载体,鉴定后将构建好的载体与慢病毒包装系统共转染293T细胞,并以最适感染复数感染神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞,筛选稳转SH-SY5Y-APP695细胞株并用PCR和Western blot鉴定稳转株细胞APP695表达。结果对pLVX-APP695-PGK-Puro载体进行酶切鉴定及DNA测序证明构建过表达APP695的重组慢病毒载体成功,PCR和Western blot显示构建的SH-SY5Y细胞稳转株成功。结论成功构建APP695基因的慢病毒载体并成功构建了SH-SY5Y-APP695细胞株,该载体可在SH-SY5Y细胞株中高水平表达APP695。

APP695-siRNA慢病毒载体构建及其对SH-SY5Y细胞中APP695基因的沉默作用

目的:构建针对APP695的siRNA慢病毒载体,并检测其对人神经纤维母细胞瘤SH-SY5Y细胞株中APP695基因表达的沉默作用。方法:设计并合成针对筛选确定的APP695基因寡核苷酸序列特异性siRNA有效靶序列,同时合成1对阴性对照寡核苷酸序列,将以上寡核苷酸序列退火后连入pFU-GW-iRNA质粒,酶切和测序鉴定后,将它们分别与包装质粒混合物共感染293T细胞,产生具有感染能力的慢病毒颗粒,并感染SH-SY5Y细胞,分未经病毒感染(CON)组、阴性对照病毒感染(NC)组和慢病毒介导阳性干扰(APP695-RNAi)组;应用实时荧光定量PCR(FQ-RT-PCR)检测各组细胞APP695mRNA的表达水平。结果:酶切和测序证实目的寡核苷酸片段已被准确克隆到pFU-GW-iRNA质粒;各质粒与包装质粒共感染293T细胞后收获慢病毒颗粒;感染SH-SY5Y细胞72h后,不同组别APP695mRNA表达水平不同(F=554.442,P<0.001),APP695-siRNA组表达水平低于CON组和NC组。结论:成功构建了APP695-siRNA慢病毒载体,该载体可有效沉默SH-SY5Y细胞中APP695mRNA的表达。

Genistein对APP695转染PC12细胞凋亡的保护作用

目的观察Genistein(GST)对APP695转染PC12细胞凋亡的保护作用。方法将培养的PC12细胞分为正常对照组、APP695转染组、GST干预组。采用流式细胞术检测PC12细胞凋亡率。结果 APP695转染组与正常对照组比较,PC12细胞存活率明显降低,凋亡率明显升高(P<0.01)。GST干预组与APP695转染组比较,细胞存活率显著升高,凋亡率显著降低,其中1μmol/L GST组与APP695转染组比较,细胞凋亡率降低(P<0.05),5μmol/L GST组较APP695转染组细胞凋亡率则明显降低(P<0.01)。结论 GST对APP695基因转染引起的PC12细胞损伤有一定的保护作用。

三羟基异黄酮对APP695基因转染PC12细胞凋亡的保护作用

目的探讨植物雌激素三羟基异黄酮(Genistein,GST)对APP695基因转染PC12细胞凋亡的保护作用及机制。方法用pIRES2-EGFP空载体和pIRES2-EGFP/APP695MT表达载体转染正常的PC12细胞,将细胞分为对照组、空载组、APP695转染组、GST干预组。应用流式细胞仪测定细胞凋亡率,免疫细胞化学SABC法和Western blot方法检测凋亡相关蛋白Caspase-3的表达。结果 APP695转染组与空载组比较,PC12细胞凋亡率明显升高(P<0.01),Caspase-3为强阳性表达(P<0.01);GST干预组与APP695转染组比较,PC12细胞凋亡率明显降低(P<0.01),Caspase-3的免疫反应产物明显减弱(P<0.01),且15μmol.L-1和20μmol.L-1 GST处理组与5μmol.L-1和10μmol.L-1 GST处理组比较,Caspase-3的免疫反应产物减弱更明显(P<0.01)。结论 GST能降低APP695基因转染的PC12细胞凋亡率,其机制可能与减少凋亡蛋白Caspase-3的表达有关。

GST对转染APP695基因PC12细胞β淀粉样蛋白表达和形态功能的影响

目的:观察三羟基异黄酮(Genistein,GST)对APP695转染PC12细胞β淀粉样蛋白(Aβ)表达和形态功能的影响。方法:用pIRES2-EGFP空载体和pIRES2-EGFP/APP695MT表达载体转染正常的PC12细胞,神经生长因子(nerve growth factor,NGF)诱导PC12细胞72 h后,放射免疫法测定Aβ的变化,激光共聚焦显微镜观察细胞形态学的变化,荧光分析法测定儿茶酚胺类(CA)分泌量。结果:APP695转染组与对照组比较Aβ生成量明显增加(P<0.01),细胞突起数量少、突起长度较短,CA分泌量明显降低(P<0.01);GST干预组与APP695转染组比较Aβ生成量减少(P<0.05),细胞突起数量增多、突起较长,CA分泌量明显增加(P<0.01)。结论:GST能减少APP695基因转染引起的PC12细胞Aβ的表达,改善细胞分化程度,提高CA的分泌量,对转染PC12细胞具有一定的保护作用。

PACS-2在阿尔茨海默病发展中作用机制研究

目的探究磷酸呋喃酸性簇分选蛋白-2(phosphofurin acidic cluster sorting protein-2,PACS-2)在N2a/APP695swe细胞线粒体功能及细胞凋亡中的参与作用,进一步探讨PACS-2在阿尔茨海默病(Alzheimer’sdisease,AD)发生、发展中的作用及意义。方法CCK8法分析不同浓度的二苯乙烯苷(tetrahydroxy stilbeneglycoside,TSG)处理N2a/APP695swe细胞48h后的细胞存活率,选择合适浓度的TSG用于后续实验。体外常规培养N2a/WT细胞和N2a/APP695swe细胞,实验细胞分为3个组:空白对照组(WT组):N2a/WT细胞;模型组(APP组):N2a/APP695swe细胞;治疗组(TSG组):N2a/APP695swe细胞,合适浓度的TSG干预。TUNEL法荧光显微镜观察细胞凋亡情况,JC-1法流式检测细胞线粒体膜电位,Westernblot(WB)检测PACS-2的蛋白表达情况,RT-qPCR检测PACS-2的mRNA表达情况。结果CCK8法分析不同浓度的TSG作用细胞48h后的细胞存活率:100μmol/L的TSG保护作用最显著,差异有统计学意义(P<0.01);TUNEL法荧光显微镜观察细胞凋亡情况,与WT组相比,APP组的凋亡率升高,与APP组相比,TSG组的凋亡率降低,差异有统计学意义(P<0.05);JC-1法检测细胞线粒体膜电位;与WT组相比,APP组的膜电位降低,与APP组相比,TSG组膜电位升高,差异有统计学意义(P<0.05);WB检测PACS-2的蛋白表达:与WT组相比,APP组的PACS-2表达升高,与APP组相比,TSG组的PACS-2表达降低,差异有统计学意义(P<0.05);RT-qPCR检测PACS-2的mRNA表达:与WT组相比,APP组的PACS-2表达升高,与APP组相比,TSG组的PACS-2表达降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论PACS-2在AD的发生、发展中有重要作用,其上调可能促进AD的发生,脑保护药物TSG可能通过下调PACS-2抑制AD模型细胞凋亡并改善线粒体功能发挥细胞保护作用。

Genistein对APP695基因转染PCI2细胞Caspase-3表达的影响

目的利用APP695MT基因转染PCI2细胞为细胞模型，观察植物雌激素三羟基异黄酮（GST）对PCI2细胞中Caspase-3表达的影响，初步探讨GST对表达APP695MT基因PCI2细胞的保护作用及其相关机制。方法将培养的PCI2细胞分为正常对照组、APP695转染组、GST干预组，免疫细胞化学SABC法检测凋亡相关蛋白Caspase-3在不同处理组PCI2细胞中的表达变化。，结果正常纽及空载组Pc12细胞Caspase-3阳性表达非常弱；与正常对照组比较，APP695转染组PCI2细胞Caspase-3为强阳性表达（P〈0.01）；GST干预组与APP695转染组比较．Caspase-3的免疫反应产物明显减弱（P〈0．01），且15Ixmol／L和201xmol／LGST处理组与5txmol／L和10gmol／LGST处理组比较，Caspase-3的免疫反应产物减弱更明显（P〈0．01）。结论APP695基因转染的PCI2细胞中凋亡蛋白Caspase-3的表达明显增强，GST的干预能显著降低其表达，对神经细胞产生保护作用。

5-取代-1-氮杂蒽醌类衍生物A7对过氧化氢诱导转染人APP695基因的SH-SY5Y细胞应激损伤的保护作用

目的探究5-取代-1-氮杂蒽醌类衍生物A7对过氧化氢诱导转染人APP695基因的SH-SY5Y细胞(APPsw细胞)氧化应激损伤的保护作用。方法将APPsw细胞传代培养24 h后,加入不同浓度(0.01,0.1,1.0和10μmol·L^-1)的A7预处理24 h,再加入200μmol·L^-1过氧化氢(H 2 O 2)继续培养24 h,用MTT法检测细胞活性,用Hoechst染色法检测细胞凋亡,用Annexin V/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡率。结果5-取代-1-氮杂蒽醌类衍生物A7可剂量依赖性地增加过氧化氢处理后的细胞活力,经不同浓度的A7预处理后,加过氧化氢处理组的细胞活性明显低于对应单独A7处理组的细胞活性,但均高于单独过氧化氢处理组的细胞活性,差异具有统计学意义(P<0.05)。经不同浓度A7预处理后,加过氧化氢处理组与过氧化氢组比较细胞核中荧光显著变暗。过氧化氢组细胞早凋率为42.4%,A7(0.01,0.1,1.0和10μmol·L^-1)预处理24 h后加过氧化氢处理组细胞早凋率分别为22.7%,19.9%,16.4%和15.9%,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论5-取代-1-氮杂蒽醌类衍生物A7对过氧化氢诱导APPsw细胞的氧化应激损伤具有保护作用,可抑制细胞凋亡。

小檗碱对阿尔茨海默症 N2a-APP695-sw 细胞的抗氧化能力影响

探讨小檗碱对阿尔茨海默症(AD)细胞 N2a-APP695-sw 抗氧化能力的影响。方法:N2a-APP695-sw 细胞为对照组和 N2a-APP695-sw 加小檗碱组为实验组,在实验组细胞数布满视野时予小檗碱不同浓度进行干预。用 CCK-8 法检测细胞活力,抗氧化试剂盒检测 SOD 和 GPx 酶的活性,采用 Western 印迹检测 APP、BACE-1 蛋白表达。结:1.CCK-8 检测细胞活力结果显示,5μmol/L 小檗碱组细胞的存活率较 1μmol/L 和10μmol/L 小檗碱及对照组明显升高(P<0.05) 。2.SOD 和 GPx 检测试剂盒结果显示,5μmol/L 的小檗碱组细胞 SOD、GPx 活性比 N2a-APP695-sw 对照组明显增加(P<0.05) 。3.与对照组比较,5μmol/L 的小檗碱组细胞组 APP 表达减少(P<0.05) ,而 BACE-1 无明显改变(P>0.05) 。结论:小檗碱对阿尔茨海默症细胞 N2a-APP695-sw 具有一定的保护作用,机制可能是小檗碱抗阿尔茨海默症细胞 N2a-APP695-sw 氧化应激的作用。