人β地中海贫血IVSⅡ654(C→T)突变基因的克隆和真核表达体系的构建

目的 :克隆人 β地中海贫血IVSII654突变基因 ,构建该致病基因的体外真核表达体系。为该病基因治疗的研究提供理想模型。方法 :抽提 β 654纯合子患者DNA进行PCR扩增 ,将其克隆到pBGT51质粒中 ,然后将人 β珠蛋白基因座控制区 (LCR)及 β654基因亚克隆至真核稳定表达质粒pcDNA3 .1 +中。脂质体转染至小鼠红白血病细胞 (MEL) ,DMSO诱导MEL细胞表达 ,逆转录PCR检测人 β 654基因在MEL中的表达。 结果 :成功构建了几乎真实模拟人体内 β 654基因调控的真核表达系统。 结论 :β 654基因在MEL细胞中的表达情况同人体内 β654基因的表达完全一致 。

用等位基因特异性PCR筛查海南省黎族人β-地中海贫血IVSII654(C→T)突变

目的:研究海南省黎族人群β-地中海贫血IVSII654(C→T)突变的发病率。方法:应用等位基因特异性聚合酶链反应(PCR)技术筛查海南省白沙、昌江、陵水、琼中、保亭等县黎族人群中β-地中海贫血IVSII654(C→T)突变。结果:共筛查了788例黎族人DNA标本,未发现β-地中海贫血IVSII654(C→T)突变。结论:IVSII654(C→T)突变不是海南省黎族人群中主要的β-地中海贫血的基因类型。

MTNR1A基因ExonⅡ T/C突变与绵羊季节性繁殖的关联性分析

【目的】分析MTNR1A基因ExonⅡT/C突变与绵羊季节性繁殖性状的关联性,为深入研究MTNR1A基因在绵羊繁殖活动中的作用机制打下基础。【方法】以季节性繁殖的阿勒泰羊和中国美利奴羊(军垦型)及常年繁殖的湖羊和小尾寒羊为研究对象,采用PCR-SSCP及测序技术检测MTNR1A基因ExonⅡT/C突变在4个绵羊品种群体中的分布情况,并分析其与绵羊季节性繁殖性状的关联性。【结果】MTNR1A基因ExonⅡT/C突变致使MTNR1A蛋白的胞内无规卷曲结构域构象发生变化。在4个绵羊品种群体MTNR1A基因ExonⅡ处均可检测到T/C突变,其中阿勒泰羊和小尾寒羊中以TT基因型为主,T等位基因频率分别为C等位基因的3.4和11.2倍;在中国美利奴羊(军垦型)中则以TC基因型为主,TC基因型频率分别为TT和CC基因型的17.6和19.6倍;在湖羊中3种基因型的分布无明显差异。在阿勒泰羊群体中MTNR1A基因ExonⅡT/C突变位点处于Hardy-Weinberg平衡状态(P>0.05),而在中国美利奴羊(军垦型)、湖羊和小尾寒羊群体中处于极度不平衡状态(P<0.01)。【结论】在季节性繁殖的阿勒泰羊和中国美利奴羊(军垦型)及常年繁殖的湖羊和小尾寒羊群体MTNR1A基因ExonⅡ处均可检测到T/C突变,但该突变与绵羊的季节性繁殖性状无关联。

用ARMS法检测β地中海贫血C654-2T突变

地中海贫血（地贫）是我国华南和西南地区的常见遗传病。尤其是β地贫无论对社会和个人、家庭都带来不可估量的危害。目前，检出β地贫携带者的基因型，进行产前基因诊断，是防止重型β地贫患儿的出生，预防本病的唯一有效方法。目前使用的寡核苷酸（ＡＳＯ）杂交法和反向...

抗癌药甲基苄肼诱发转基因小鼠(Muta^(TM) Mouse)cⅡ基因A:T→T:A碱基颠换

目的:研究甲基苄肼诱发转基因小鼠MutaTMMouse主要致癌靶器官的cⅡ基因突变谱以及可能的致突变机理,为抗癌药物引发二次肿瘤提供风险-效益评估的依据。方法:甲基苄肼(150 mg.kg-1)连续5 d腹腔注射,14 d后处死动物并取脏器,经λDNA体外包装进行cII筛选,计算突变率并测序分析突变谱。结果:cⅡ突变率在肺、脾、肾分别为128.8×10-6,194.2×10-6和245.0×10-6,比对照组增加约6～9倍;甲基苄肼诱发脾cⅡ突变主要为A:T→T:A碱基颠换。结论:甲基苄肼在体内实验系统产生的腺嘌呤(A)或胸腺嘧啶(T)上的烷化损伤可能是诱发A:T→T:A突变的原因。