一种靶向CA IX的多肽化合物标记与初步评价

为合成靶向碳酸酐酶IX(CA IX)的多肽探针^(68)Ga-DOTA-CA IX-P1-4-10,建立^(68)Ga-DOTA-CA IX-P1-4-10的标记及质控方法,对pH和前体多肽DOTA-CA IX-P1-4-10浓度对标记率的影响进行研究,确定^(68)Ga-DOTA-CA IX-P1-4-10的标记条件为:反应体系的pH为4.0~5.0(n=6),多肽DOTA-CAIX-P1-4-10浓度为15.0~40.0 mg/L(n=6),反应温度为100℃,反应时间10 min。产品为无色澄明液体、无可见异物,pH为5~7(n=6),放化纯度>99.0%(n=6),比活度为1.0~5.0 GBq/μmol(合成结束后)(n=6)。探针的脂水分配系数为-2.07±0.01(n=6),具有良好的亲水性。^(68)Ga-DOTA-CA IX-P1-4-10在生理盐水和胎牛血清中孵育4 h,放化纯度>95.0%,具有良好的体外稳定性。^(68)Ga-DOTA-CA IX-P1-4-10无异常毒性。初步评价结果表明,^(68)Ga-DOTA-CA IX-P1-4-10标记方法简单、放化纯度高、性质稳定、无异常毒性,具有开展进一步研究的价值。

膀胱癌中CAIX和β-catenin的表达及临床意义

目的探讨碳酸酐酶IX蛋白(CAIX)及β-连环蛋白(β-catenin)在膀胱癌中的表达及临床病理意义。方法对65例膀胱癌组织和31例癌旁尿路上皮免疫组化EnVision法检测CAIX及β-catenin蛋白表达,分析两者表达与膀胱癌临床病理特征的关系及两者表达的相关性。结果膀胱癌组织中CAIX及β-catenin蛋白表达明显高于癌旁尿路上皮(P<0.05)。CAIX蛋白表达与膀胱癌组织学分级、临床分期有关(P<0.05),与患者性别、年龄、肿瘤最大直径、单发/多发无关(P>0.05)。β-catenin蛋白表达与膀胱癌患者组织学分级有关(P<0.05),与患者年龄、性别、临床分期、肿瘤最大直径以及肿瘤单发/多发无关(P>0.05)。膀胱癌组织中CAIX及β-catenin蛋白表达呈正相关(P<0.05)。结论①CAIX、β-catenin在膀胱癌组织中表达上调,可能参与膀胱癌的发生;②CAIX和β-catenin异常表达与膀胱癌组织学分级、临床分期有关,提示可能参与膀胱癌恶性发展;③膀胱癌中CAIX、β-catenin表达呈正相关。

点描、音群、瞬间作曲法与序列思维的整合方式——施托克豪森《钢琴曲IX》中素材构建观念和数列组织探微

欧洲先锋派音乐领军人物施托克豪森的《钢琴曲IX》,体现出了20世纪50至60年代初作曲家的创作观念及对多样技术手法的整合。这部作品在表层音响素材的构建与运作方面汇集了作曲家这一时期的多种音乐创作思维和技法;在中层结构上呈现出形态各异且彼此无明显关联的碎片化声音状态;在深层结构上这些看似杂乱、类似用拼贴方式连接起来的音响素材却在作曲家内心听觉的指导下得到了有组织的呈现。

乳腺癌分子亚型中CAIX的表达及临床意义

目的:探讨乳腺癌各分子亚型中碳酸酐酶IX(carbonic anhydrase IX,CAIX)的表达及临床意义。方法:采用免疫组织化学检测CAIX在4种不同乳腺癌分子亚型中的表达水平并分析其与临床病理参数的关系。结果:CAIX在管腔A型、管腔B型、HER-2过表达型和基底样型乳腺癌中的阳性表达率分别为6.65%(28/421)、12.50%(7/56)、60.61%(40/66)和32.31%(84/260)。ER阴性的HER-2过表达型及基底样型乳腺癌组织中,CAIX的阳性表达明显高于ER阳性的管腔A型和管腔B型(P<0.001),并且HER-2过表达型乳腺癌组织CAIX的阳性表达率明显高于基底样型相比,差异有统计学意义。CAIX与乳腺癌的组织学分级、淋巴结转移、临床分期及高增殖指数相关(P<0.05),而与患者年龄、是否绝经及肿瘤大小无关。结论:CAIX在不同乳腺癌分子亚型中的表达具有明显差异,可能与ER阴性乳腺癌关系更密切,并在乳腺癌的侵袭、转移中发挥重要作用,可能成为乳腺癌浸润、进展及预后评估的指标。

人凝血IX因子基因乳腺组织特异性表达载体的构建及其在奶山羊乳腺中的分泌性表达

人凝血ＩＸ因子基因乳腺组织特异性表达载体的构建及其在奶山羊乳腺中的分泌性表达张克忠卢大儒邱信芳（复旦大学遗传学研究所上海２００４３３）黄英黄淑帧（上海市儿童医院医学遗传研究所上海２０００４０）血友病Ｂ（ＨｅｍｏｐｈｉｌｉａＢ）是由于人凝血ＩＸ因子（ｈ...

血清碳酸酐酶IX检测对肺癌的诊断意义

背景与目的碳酸酐酶IX(carbonic anhydrase IX,CAIX)是一种跨膜蛋白,参与肿瘤细胞的代谢过程。其在少数正常组织中低表达,但在多种恶性肿瘤组织中广泛表达。检测CAIX在肺癌患者血清中的含量,探讨其对肺癌的诊断价值,分析不同病理类型及TNM分期肺癌患者血清CAIX含量是否存在差异。方法选取47例肺癌患者和31例健康体检者为研究对象,用酶联免疫吸附测定(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)法检测其血清CAIX含量,根据病理类型及TNM分期分组,比较各组血清CAIX差异;绘制血清CAIX诊断肺癌的受试者工作特征曲线(receiver operating characteristic curve,ROC)。结果肺癌组较健康对照组血清CAIX含量明显增高(P<0.001);鳞癌和小细胞癌患者血清CAIX含量明显高于腺癌患者。I期+II期与III期+IV期的肺癌患者血清CAIX含量比较,未发现两者间的差异有统计学意义;血清CAIX诊断肺癌的ROC曲线下面积为0.961,当血清中CAIX阈值为115.115 pg/m L时,敏感度和特异度分别为95.7%和90.3%。结论用ELISA法检测患者血清CAIX有助于肺癌诊断,且具有较高的敏感性和特异性。

基于凝血因子IX基因剔除小鼠建立血友病乙转基因动物模型

为在凝血因子IX基因剔除小鼠基础上建立基因组中整合有含特定点突变的人凝血因子IX基因表达载体的转基因小鼠家系 ,为血友病乙的研究提供更接近临床实际的动物模型。利用体外定点突变技术 ,构建含有特定点突变的人凝血因子IX基因表达载体 ,该载体包括由人凝血因子IX编码区及第一内含子构成的人凝血因子IX基因(hFIXml)、4个拷贝的MCK增强子 (MCKe)、鸡 β -肌动蛋白启动子 (bA)及PolyA ,命名为pMe4bAIXml质粒。将其线性化后 ,用显微注射法注射入 817只凝血因子IX基因剔除小鼠受精卵雄原核 ,再将它们分别回输 4 5只假孕受体母鼠的输卵管中 ,共产仔 6 9只 ,存活 6 3只。采用PCR与基因组Southern杂交筛选法鉴定小鼠 ,证实 6只小鼠基因组中整合有含特定点突变的pMe4bAIXml质粒 ,并对 1只小鼠的PCR产物进行测序 。

微小腺病毒载体介导的人凝血IX因子小基因的离体表达

将带有内源内含子的人凝血IX因子cDNA(hFIX小基因 )构建到不含腺病毒基因而只带有反向末端重复顺序 (ITR)和包装信号 ψ等顺式元件的微小腺病毒 (mini adenovirus)载体GT2 0 73上 ,得到载体GTi’IX。将该载体与带有lacZ报告基因的微小腺病毒载体 pRP10 0 1分别转移入腺病毒包装细胞 2 93Cre4中 ,随后再转染辅助病毒AdLC8,从而包装出微小腺病毒AdGTi’IX和AdRP10 0 1。经超离心纯化后对两种病毒的检测结果表明 ,病毒颗粒浓度分别为 2 4× 10 12 /ml和 2 2× 10 12 /ml,辅助病毒所占比例均小于 0 8% ;用AdRP10 0 1以感染复数 (MOI)为 5 0的比例转染 3T3细胞 ,X - gal染色后发现细胞蓝染率在 90 %以上 ;用AdGTi’IX以MOI =5 0的比例转染 3T3细胞 ,ELISA结果表明 ,其瞬时表达为 1 4μg/10 6细胞·2 4h。此结果显示出该载体系统在血友病B基因治疗方面有很好的应用前景 ,为进一步的动物试验及免疫原性研究等临床前研究奠定了良好的基础。

宫颈脱落细胞CA-IX的表达与高危型人乳头瘤病毒感染状态的相关性研究

目的探讨碳酸酐酶IX(carbonic anhydrase-IX,CA-IX)在宫颈脱落细胞中的表达情况及与高危型人乳头瘤病毒(high risk-human papilloma virus,HR-HPV)感染的关系,分析CA-IX预测宫颈病变自然转归方向的价值。方法运用免疫细胞化学技术观察CA-IX在不同宫颈病变宫颈脱落细胞中的表达,采用HC-Ⅱ测定HR-HPV DNA,定期随访,比较CA-IX表达与HR-HPV感染状态的相关性。结果 CA-IX的表达与HPV的感染存在相关性(χ2=81.8,P=0.000)。低级别〔宫颈炎、宫颈上皮内瘤变(cervical intraepithelial neoplasia,CIN-Ⅰ)〕和高级别(CIN-Ⅱ、CIN-Ⅲ及宫颈癌)宫颈病变,CA-IX的阳性表达率差异有统计学意义(χ2=4.5,P=0.032)。不同HPV感染状态下(持续性感染、一过性感染、无HPV感染),CA-IX表达的阳性率分别为60.6%、38.4%、15.6%,差异具有统计学意义(χ2=11.69,P=0.001)。结论 CA-IX的表达与HPV感染相关,在持续性HPV感染中,CA-IX的表达阳性率较一过性HPV感染、无HPV感染明显升高,提示CA-IX有可能是参与持续HPV感染致宫颈上皮内瘤变的分子标志之一。

原卟啉IX锌-聚乳酸的合成及表征

血红素用硫酸亚铁-氯化氢的氯仿-甲醇溶液处理,制得原卟啉IX二甲酯。原卟啉IX二甲酯水解得到原卟啉IX,再与乙酸锌反应制得原卟啉IX锌。然后,利用原卟啉IX锌上的羧基,在脱水剂DCC和催化剂HOBt的作用下,与聚乳酸端基的氨基发生酰胺化反应,制备得到了原卟啉IX锌-聚乳酸。UV-Vis光谱、IR和1 H-NMR分析表明,卟啉环脱除铁离子和络合锌离子过程中乙烯基保持稳定。采用GPC测试分子量及分子量分布。结果表明,酰胺化反应近似按照投料比进行反应。

5-氨基乙酰丙酸诱导原卟啉IX在大肠癌模型大鼠血液中积聚的实验研究

目的探讨5-氨基乙酰丙酸(5-ALA)诱导原卟啉IX在大肠肿瘤内积聚的特性,定量检测正常组、早癌组和进展期癌组大鼠血液中原卟啉IX含量。方法培养大肠癌大鼠模型。尾静脉注射5-ALA溶液,对正常、早癌及进展期癌三组实验大鼠尾静脉采血。用化学抽提法提取血液原卟啉IX并定量检测其含量。结果在正常组、早癌组和进展期癌组中,血液原卟啉IX含量均具有统计学意义差别,其血液原卟啉IX含量的平均值分别为(2363.44±241.25)ng/ml,(3357.39±369.11)ng/ml,(4939.55±692.68)ng/ml。结论尾静脉注射5-ALA后,原卟啉IX不同组大鼠血液中的积聚具有明显差异。5-ALA诱导血液原卟啉IX含量可以作为临床筛选大肠癌的普查指标之一。

光敏剂PpIX亚细胞分布方式对食管癌细胞光动力学效应的影响

目的:探讨不同来源的光敏剂PpIX在食管癌细胞中的亚细胞分布与光动力学效应的关系.方法:KYSE-450、KYSE-70和Het-1A细胞分别用ALA和外源性PpIX以及Mito Tracker Green处理,相差荧光显微镜观察不同来源的PpIX在细胞内的定位.利用JC-1-流式细胞方法检测ALA-PDT和PpIX-PDT后细胞线粒体膜电位(ΔΨm)的改变.利用电镜观察ALA-PDT和PpIX-PDT后细胞线粒体的超微结构,观察PpIX的不同细胞分布形式对线粒体损伤的形态学改变.MTS法测定PDT处理后的细胞存活率.结果:由ALA产生的内源性光敏剂PpIX荧光主要分布在线粒体,与Mito Tracker Green显示的线粒体荧光分布在相同的区域,而外源性PpIX荧光信号则弥漫性分布于整个细胞质.KYSE-450、KYSE-70和Het-1A细胞经ALA-PDT12h后,膜电位受损细胞分别达到22%、52%和33%,而外源性PpIX-PDT别12h后线粒体受损细胞率仅分别为15%、14%和18%.电镜观察结果显示,ALA-PDT后仅1h一些线粒体即已出现受损状态,可见线粒体内嵴不明显,出现空泡和膨胀.但外源性PpIX-PDT后1h细胞内大部分线粒体仍保持完整结构.ALA-PDT的细胞杀伤效果明显好于外源性PpIX-PDT.结论:光敏剂的不同亚细胞定位影响了食管癌细胞PDT的功效,PDT造成的线粒体的损伤在肿瘤细胞杀伤过程中起非常重要的作用,提示以线粒体为靶点的光敏剂是未来光敏剂研制的重点.

原卟啉原IX的构象分析

在合理药物设计方法中 ,当靶标酶的三维结构未知时 ,对其底物进行构象分析 ,特别是确定其活性构象 ,对阐明靶标酶活性中心的空间形状和作用位点具有十分重要的意义。我们曾利用距离比较法确定了原卟啉原氧化酶的底物—原卟啉原IX的活性构象 ,本文从构象分析的角度对 4种不同构象的原卟啉原IX分子与二苯醚类分子的晶体学构象进行了几何参数的比较和分析 。

肝脏第IX段临床应用解剖及恶性肿瘤的介入栓塞化疗

目的探讨肝脏第IX段临床应用解剖及其占位性病变的介入治疗。方法对50例肝脏进行解剖观察;对6例肝脏第IX段占位性病变进行介入栓塞化疗。结果肝脏第IX段动脉主要来源于肝右动脉,部分来自肝中动脉或肝左动脉;门静脉主要来自门静脉右前叶上段支,小部分来自门静脉左支横部;胆管汇入右肝管;静脉血由数支细小静脉经第3肝门直接汇入肝后下腔静脉,部分汇入肝右静脉。第IX段肝脏肿瘤通过血管介入治疗后,肿瘤显著缩小;其中4例合并黄疸患者肝功能明显缓解。结论肝脏第IX段是一个结构上较为独立的区域,有其特殊的管道系统和引流系统,位置深隐,单独或联合手术切除较困难;通过介入技术可以对该区段进行相应的治疗。利用微导管采用超选技术,可以对肝脏第IX段的病变进行精确的治疗,微创、副作用小、可重复操作,能够弥补外科手术的局限性,达到甚至超过外科手术的治疗效果。

基于Oncomine芯片数据库荟萃分析碳酸酐酶IX在肾细胞癌中的表达及意义

目的阐述碳酸酐酶IX(carbonic anhydrase IX,CAIX)在肾细胞癌中的表达及意义。方法挖掘Oncomine数据库中关于CAIX的信息,并对目前数据库中资料进行二次分析,对其在肾癌中的作用进行荟萃分析。结果 Oncomine数据库中共收集了440个不同类型的研究结果,其中关于CAIX表达有统计学差异的研究结果有31个,CAIX表达增高的研究有22个、表达降低的研究有9个。在泌尿系统肿瘤中,膀胱肿瘤中高表达的研究有3个、低表达的有0个,肾癌中高表达的研究有5个、低表达的有0个,前列腺癌中表达没有差异。共有8个研究涉及CAIX在肾透明细胞癌组织和正常组织中的表达,共包括969个样本,与对照组相比,CAIX在肾透明细胞癌中高表达(P=5.79×10-9)。不仅如此,在TCGA RCC的研究中,CAIX的DNA copy number和mRNA表达量与肾透明细胞癌总体生存率存在相关性,即低表达CAIX的患者总体生存率较差,高表达CAIX的患者预后较好(P分别为0.000 7和0.019)。结论我们通过对Oncomine基因芯片数据库中肿瘤相关基因信息的深入挖掘,提出CAIX在肾细胞癌组织中高表达,且与肾癌预后有关,将为肿瘤药物的开发提供重要理论依据。

犬传染性肝炎病毒IX基因的克隆及原核表达

通过对犬传染性肝炎病毒(CAV-I)基因组的提取,PCR扩增获得了大小为1109bpCAV-I病毒结构IX基因片段,成功地将IX基因克隆至载体pMD-18T中,构建了pIX原核表达载体pGEX-4T1-IX,将重组质粒pGEX-4T1-IX转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中,并实现了IX基因在该菌中的高效表达。对表达产物进行了Westernblot检测,分析结果表明表达蛋白能与抗CAV-I阳性血清发生特异性的抗原-抗体反应,为CAV-I的血清学诊断和免疫监测提供大量优质的抗原奠定了基础。

5-氨基乙酰丙酸代谢产物原卟啉IX在葡萄酒色斑动物模型鸡冠中的积聚

目的:研究5-氨基乙酰丙酸(5-Aminolevulinic acid,ALA)在不同给药途径下其代谢产物原卟啉IX(protoporphyrin IX,PpIX)在葡萄酒色斑动物模型鸡冠中的聚集、分布的动态变化,探讨其治疗葡萄酒色斑的可行性。方法:以鸡冠为模型,静脉或局部真皮内注射ALA后,应用多通道光量子分析仪监测代谢产物PpIX的动态变化,组织取材切片后用共聚焦显微镜检测PpIX的分布。结果:在鸡冠组织内,ALA给药后3hPpIX出现明显聚集,分别在给药5h(静脉给药组)和4h(局部给药组)后到达高峰,静脉给药组峰值(94±15)units略高于局部给药组(73±12)units。在身体其它部位的皮肤中,PpIX聚集规律相似,但局部给药组的峰值(38±14)units明显低于静脉组(109±14)units。组织切片荧光检测显示PpIX弥漫性分布于真皮层中。结论:ALA的局部真皮内注射比全身给药用药量小,但能达到同样程度PpIX的积聚,有望成为葡萄酒色斑光动力学治疗的新光敏剂。

锌原卟啉IX对胃癌细胞增殖和侵袭能力的影响

目的:研究HO-1抑制剂锌原卟啉IX(ZnPPIX)对胃癌细胞增殖能力和侵袭能力的影响,探讨锌原卟啉对胃癌细胞生物学特性的调控作用。方法:应用胃癌细胞株SGC7901作为实验载体,不同浓度ZnPPIX干预胃癌细胞,应用MTT法检测其在不同时间段和不同浓度对胃癌细胞增殖能力的影响。应用Transwell小室检测ZnPPIX对胃癌细胞侵袭能力的影响。Western blot在蛋白水平检测胃癌细胞中侵袭相关因子的表达变化。结果:ZnPPIX可明显抑制肿瘤细胞的增殖能力且呈浓度依赖性。ZnPPIX干预胃癌细胞与Co PP组和空白对照组相比,细胞的侵袭能力明显减弱。ZnPPIX可降低胃癌细胞MMP2、MMP9、VEGF的蛋白表达量。结论:本实验初步探讨HO-1抑制剂锌原卟啉IX对胃癌细胞增殖和侵袭能力的负向调控作用,为HO-1可能成为胃癌的治疗新靶点提供理论依据及线索。

抗组胺药对慢性荨麻疹患者血浆TAT与FIX水平的影响

目的:观察抗组胺药对慢性荨麻疹(CU)患者血浆凝血酶-抗凝血酶复合物(TAT)与凝血因子Ⅸ(FIX)水平的影响并探讨TAT、FIX与CU发病的关系。方法:用酶联免疫吸附法检测治疗前CU患者、抗组胺治疗症状控制后CU以及健康献血者血浆TAT与FIX的水平。结果:CU患者治疗前的血浆TAT水平(32.13±14.72 ng/mL)明显高于正常对照组(21.94±7.95 ng/mL)(P<0.01),抗组胺治疗症状控制后的血浆TAT水平(26.53±14.43 ng/mL)较治疗前下降,但组间比较无统计学差异(P>0.05);CU患者治疗前的血浆FIX水平(2.32±0.77μg/mL)低于正常对照组(4.25±1.16μg/mL)(P<0.01),抗组胺治疗症状控制后的血浆FIX水平(3.02±1.36 ng/mL)较治疗前升高(P<0.01),但尚低于正常对照组(P<0.01)。结论:CU患者血浆TAT水平升高,FIX水平降低,提示CU患者存在凝血系统激活以及FIX消耗,抗组胺药治疗后CU患者体内凝血状态向正常水平方向改变,但短时间用药症状控制后其凝血状态并不能立即恢复正常水平。

Ixekizumab—抗白细胞介素17单克隆抗体治疗银屑病的新药

银屑病为多基因遗传背景下的慢性炎症性皮肤病。银屑病的病因尚未完全阐明,目前认为银屑病是遗传因素与环境因素等多种因素相互作用的多基因遗传病。临床上治疗银屑病的传统药物包括阿维A、甲氨蝶呤、环孢素等,但其不良反应较多,临床应用受到限制。研究表明白细胞介素(IL)-17是银屑病发病机制中的关键环节。Ixekizumab(IXE),一种新型抗IL-17单克隆抗体,对中重度斑块状银屑病具有较好的临床疗效和安全性。