猪IZUMO2蛋白的原核表达及多克隆抗体制备

IZUMO2蛋白是公猪精液中与其繁殖性能密切相关的一种蛋白。为进一步确定IZUMO2蛋白在公猪组织和细胞上的表达定位,本试验通过cDNA末端快速扩增(Rapid Amplification of cDNA Ends,RACE)技术验证猪IZUMO2核苷酸CDS全长序列,构建原核表达质粒pET-28a-IZUMO2,并在大肠杆菌中异源表达。将IZUMO2重组蛋白免疫BALB/c小鼠,制备多克隆抗体,利用间接ELISA和Western Blot测定多克隆抗体效价及特异性反应。结果表明:猪IZUMO2核苷酸CDS序列全长为627 bp,信号肽序列为60 bp,成功构建pET-28a-IZUMO2原核表达载体;Western Blot和SDS-PAGE结果表明,IZUMO2重组蛋白分子质量为22ku,主要以包涵体形式存在,最佳表达条件是0.4mmol/L的IPTG诱导4h;切胶纯化回收的蛋白满足免疫需求,制备的多克隆抗体效价达1:128 000,可以特异性识别猪IZUMO2重组蛋白。本研究验证了猪IZUMO2核苷酸的CDS全长序列,制备了猪IZUMO2原核蛋白和猪IZUMO2多克隆抗体,为IZUMO2蛋白的表达定位以及功能探究提供了试验基础。